專利名稱：粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及一種粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng) 方法。
背景技術：
鐵線蓮為毛茛科鐵線蓮屬植物，原產中國，廣布于北半球，原種200余種，經多年 的人工雜交出現(xiàn)大量園藝品種，花色爽潔淡雅、花大色鮮且繁期久，差不多可從5月陸續(xù)開 到11月。開花場面壯觀受世人歡迎，是良好的庭院材料。粉香檳鐵線蓮為園藝品種，木質 藤本，長約1-2米，莖呈棕色或紫紅色，單葉，常對生，花單生，粉紅色，花期6-9個月。但是 通過選育獲得優(yōu)異的新品種，分株速度慢、扦插繁殖率低、品種易退化，因此無法滿足人們 的需求。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并保持原有母本性狀的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩枝條上的芽，用自來水沖洗l_3h后于超凈工班工作臺上，依次 利用質量濃度為60-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡10-30min，再用 無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成0. 5-2cm長的帶腋芽的節(jié) 段，接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖帶腋芽的節(jié)段接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上，1-3周后腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠黃色 突起，3-5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，腋芽長到3-5cm，將腋芽切下進行增殖培 養(yǎng)，分化的芽轉入不定芽增殖培養(yǎng)基中，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定 芽的增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-4株能夠伸長，其余的叢生 芽處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養(yǎng)基上生長，其中不定芽伸長迅速， 15-30天后可以長至3-5cm ；(4)生根培養(yǎng)取2-3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根，5_15天后幼苗基部分化出白 色的根原基，18-25天后開始生根，30-35天后可以長至l-2cm，每株有3_4個根，生根率為 80-90% ；(5)煉苗與移栽
生根培養(yǎng)30-35天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內 開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化20-40天，即可移 栽上盆，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95%。所述的腋芽誘導培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的腋芽誘導培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+6-IBA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉2_4g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 22-28°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明通過組培技術，極大提高了粉香檳鐵線蓮的繁殖速度和 苗的整齊度，并更好地保持了原有的母本性狀，可以實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩枝條上的芽，用自來水沖洗Ih后于超凈工班工作臺上，依次利 用質量濃度為60%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，無菌水沖洗4次，用 無菌濾紙吸干表面水分后，將芽切成0. 5cm長的帶腋芽的節(jié)段，接種于包括MS+6-BA1. Omg/ L+NAA0. 05mg/L的腋芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖帶腋芽的節(jié)段接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上，1周后腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠黃色突 起，3周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，腋芽長到3cm，將腋芽切下進行增殖培養(yǎng)，分化的 芽轉入包括1.0mg/L MS+6-BA+NAA 0. 05mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中，分化的芽的基部雖有 較多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中，每叢有2株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生 長，其中不定芽伸長迅速，15天后可以長至3cm ；(4)生根培養(yǎng)取2cm的小植株，轉接入包括MS+6-IBA1. 0mg/L+NAA0. 05mg/L的生根培養(yǎng)基中誘 導生根。5天后幼苗基部分化出白色的根原基，18天后開始生根，30天后可以長至1cm，每 株有3個根，生根率為80% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至Icm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉
5苗1天，再取出洗凈根部瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化20天后，即可移栽上盆，給予肥水管 理，移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉2g/L，pH = 5. 5，培養(yǎng)溫度22°C， 光照 15001x。實施例2(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩枝條上的芽，用自來水沖洗2h后于超凈工班工作臺上，依次利 用質量濃度為75%的乙醇浸泡10s，體積濃度為1%。的汞浸泡20min，無菌水沖洗5次，用 無菌濾紙吸干表面水分后，將芽切成Icm長的帶腋芽的節(jié)段，接種于包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的腋芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖帶腋芽的節(jié)段接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上，2周后腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠黃色突 起，3周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，腋芽長到4cm，將腋芽切下進行增殖培養(yǎng)，分化的 芽轉入包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中，分化的芽的基部雖有較 多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中，每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BAlmg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長， 其中不定芽伸長迅速，20天后可以長至4cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的小植株，轉接入包括MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導 生根。10天后幼苗基部分化出白色的根原基，20天后開始生根，30天后可以長至2cm，每株 有4個根，生根率為90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉 苗2天，再取出洗凈根部瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30天后，即可移栽上盆，給予肥水管 理，移栽成活率為95%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉3g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩枝條上的芽，用自來水沖洗3h后于超凈工班工作臺上，依次利 用質量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，無菌水沖洗6次，利 用無菌濾紙吸干表面水分后，將芽切成2cm長的帶腋芽的節(jié)段，接種于包括MS+6-BA3. Omg/ L+NAA 0. 2mg/L的腋芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖帶腋芽的節(jié)段接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上，3周后腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠黃色突 起，5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)2個月，腋芽長到5cm，將腋芽切下進行增殖培養(yǎng)，分化的 芽轉入包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中，每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA2mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長， 其中不定芽伸長迅速，30天后可以長至5cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的小植株，轉接入包括MS+6-IBA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導 生根。15天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后開始生根，35天后可以長至2cm，每株 有4個根，生根率為87% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)35天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉 苗3天，再取出洗凈根部瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化40天后，即可移栽上盆，給予肥水管 理，移栽成活率為92%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉4g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度28°C， 光照 25001x。
權利要求
粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩枝條上的芽，用自來水沖洗1-3h后于超凈工班工作臺上，依次利用質量濃度為60-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的節(jié)段，接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖帶腋芽的節(jié)段接種于腋芽誘導培養(yǎng)基上，1-3周后腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠黃色突起，3-5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，腋芽長到3-5cm，將腋芽切下進行增殖培養(yǎng)，分化的芽轉入不定芽增殖培養(yǎng)基中，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-4株能夠伸長，其余的叢生芽處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養(yǎng)基上生長，其中不定芽伸長迅速，15-30天后可以長至3-5cm；(4)生根培養(yǎng)取2-3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，18-25天后開始生根，30-35天后可以長至1-2cm，每株有3-4個根，生根率為80-90％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30-35天，根系長至1-2cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化20-40天，即可移栽上盆，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95％。
2.根據權利要求1所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的腋芽誘 導培養(yǎng)基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
3.根據權利要求2所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的腋芽誘 導培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
4.根據權利要求1所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的不定芽 增殖培養(yǎng)基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
5.根據權利要求4所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的不定芽 增殖培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據權利要求1所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培 養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據權利要求6所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據權利要求1所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培 養(yǎng)基包括 MS+6-IBA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據權利要求8所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
10.根據權利要求2或4或6或8所述的粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于， 所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉2-4g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度22-28°C， 光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及粉香檳鐵線蓮的組織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明大大提高了粉香檳鐵線蓮的繁殖速度和苗的整齊度，并更好地保持了原有的母本性狀，可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產。
文檔編號A01H4/00GK101869070SQ200910049978
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所