專利名稱：藍靛果忍冬組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到東北地區(qū)的一種漿果的無性繁殖方法，即藍靛果忍冬的組織培養(yǎng)法。本發(fā)明屬于植物 組織培養(yǎng)技術(shù)和森林培育領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
藍靛果忍冬因其潛在的營養(yǎng)價值、藥用價值和商用價值，是一種世界珍稀的、純天然的、綠色的可食 用漿果，具有極為廣闊的國內(nèi)外市場，進一步擴大和開發(fā)藍靛果產(chǎn)品，具有廣闊的前景。然而由于無計劃 掠奪式的采摘，致使藍靛果忍冬遭到嚴(yán)重破壞，自然修復(fù)能力降低，蘊藏量和可采量銳減。其次，黑龍江 省東寧口岸收購藍靛果忍冬已趨熱勢，供需矛盾日益加劇。
我國藍靛果忍冬的育苗技術(shù)主要有實生種子繁殖、無性繁殖(即分株、壓條、硬枝扦插、綠枝扦插) 等技術(shù)，利用組培技術(shù)繁育藍靛果忍冬的資料極少，只有以冬眠枝條經(jīng)水培后萌發(fā)的嫩枝為外植體，篩選 出藍靛果忍冬組培快繁培養(yǎng)基的報道。但藍靛果忍冬生根培養(yǎng)尚未有人研究，組織培養(yǎng)體系尚未建立，優(yōu) 良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇，嚴(yán)重影響了藍靛果深加工業(yè)的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明對優(yōu)良的藍靛果忍冬種質(zhì)資源采用組織培養(yǎng)技術(shù)，以休眠枝條水培后萌發(fā)的嫩枝為外植體，經(jīng) 外植體滅菌、嫩芽接種、分化增殖培養(yǎng)基篩選、生根培養(yǎng)基篩選等步驟，研究培養(yǎng)過程中試管苗的營養(yǎng)需 求、激素對苗木生長分化的調(diào)控，解決藍靛果忍冬的微體快速增殖、誘導(dǎo)生根的重要技術(shù)問題，建立了完 善的藍靛果忍冬組織培養(yǎng)體系，達到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存 了母體的全部優(yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。這種方法可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進行規(guī)模化、工廠化 生產(chǎn)。


圖l藍靛果忍冬接種的嫩芽
圖2 a不同處理增殖培養(yǎng)(35天)分化的試管苗數(shù)b不同處理增殖培養(yǎng)(35天)試管苗苗高 圖3 a不同處理生根培養(yǎng)(40天)的根系
具體實施例方式
以藍靛果忍冬休眠枝條經(jīng)水培后萌發(fā)的嫩枝為外植體，具體由以下四個步驟組成(1)外植體滅菌 首先采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后用0. 1%升汞滅菌3分鐘，以無菌水浸泡40分 鐘；(2)接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 lmg/L 的6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA) ， PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25土2。C,光照周期12h/ d，光強度為20001ux，待培養(yǎng)l個月后，即開始下一個階段；(3)增殖將獲得的苗木轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng) 基上進行增殖培養(yǎng)。以三種激素6-BA、 IBA、 GA3各兩個水平采用正交試驗設(shè)計進行篩選，培養(yǎng)溫度為25 ±2°C,光照周期12h/d ，光強度為20001ux，培養(yǎng)35天。結(jié)果最佳增殖培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添 加了 lmg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 0. 3rag/L的吲哚丁酸(IBA) 、 1. 5mg/L的赤霉素(GA3);培養(yǎng)35 天增殖達4. 88倍；(4)生根剪取增殖培養(yǎng)中長度為1. 5 2. Ocm的健壯的芽接種到四種生根培養(yǎng)基上， 采用單因素試驗設(shè)計進行生根培養(yǎng)篩選。培養(yǎng)溫度為25土2。C，光照周期12h/d,光強度為20001ux。結(jié) 果在1/2MS (大量元素減半)培養(yǎng)基中添加了 0.5rag/L的萘乙酸(NM)的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)20天后新苗基 部出現(xiàn)幼嫩根系，再過20天平均根數(shù)達1. 8條，平均根長達6.4cm。
權(quán)利要求
藍靛果忍冬(Lonicera Edulis)的組織培養(yǎng)方法，其特征在于由以下四個步驟組成1.外植體滅菌 首先采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后用0.1％升汞滅菌3分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；2.接種 在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了1mg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA)、0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，待培養(yǎng)1個月后，即開始下一個階段；3.增殖 將獲得的試管苗轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了1mg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA)、0.3mg/L的吲哚丁酸(IBA)、1.5mg/L的赤霉素(GA3)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，培養(yǎng)35天增殖達4.88倍；4.生根 剪取增殖培養(yǎng)中長度為1.5～2.0cm的健壯的芽接種到生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是在1/2MS(大量元素減半)培養(yǎng)基中添加了0.5mg/L的萘乙酸(NAA)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，20天后苗木基部出現(xiàn)白色嫩根，再過20天平均根數(shù)達1.8條，平均根長達6.4cm。
1. 外植體滅菌首先采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后用0. 1%升汞滅菌3分鐘， 以無菌水浸泡40分鐘；
2. 接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 lmg/L的 6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA) , ffl 5. 8，培養(yǎng)溫度為25土2。C，光照周期12h/ d,光強度為20001ux，待培養(yǎng)l個月后，即開始下一個階段；
3. 增殖將獲得的試管苗轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 lmg/L的6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA) 、 0. 3mg/L的吲哚丁酸(IBA) 、 1. 5mg/L的赤霉素(GA3) , PH 5.8， 培養(yǎng)溫度為25土2。C，光照周期12h/d，光強度為20001ux,培養(yǎng)35天增殖達4. 88倍；
4. 生根剪取增殖培養(yǎng)中長度為1.5 2.0cm的健壯的芽接種到生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是在1/2MS (大 量元素減半)培養(yǎng)基中添加了 0.5mg/L的萘乙酸(NAA) ， PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照周期 12h/d，光強度為20001ux， 20天后苗木基部出現(xiàn)白色嫩根，再過20天平均根數(shù)達1. 8條，平均根 長達6. 4cra。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)和森林培育領(lǐng)域，涉及藍靛果忍冬(Lonicera Edulis)的高效繁殖方法。該方法分為外植體滅菌、接種、增殖、生根四個階段。該方法解決了藍靛果忍冬的微體快速增殖、誘導(dǎo)生根的重要技術(shù)問題，達到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存了母體的全部優(yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。這種方法可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進行規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101574055SQ20081006446
公開日2009年11月11日 申請日期2008年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月8日
發(fā)明者盧慧穎, 田新華, 郭樹平 申請人:黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所