專利名稱：含有d－泛酸和/或其鹽的可傾倒的飼料添加劑及它們的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及基于發(fā)酵液且含有D-泛酸和/或其鹽的可傾倒的動物飼料添加劑，并涉及這種添加劑的制備方法。
可以通過化學合成或用適宜的微生物在適宜的營養(yǎng)液中發(fā)酵的生物技術方法來生產(chǎn)泛酸。在化學合成的情況下，DL-泛酸內(nèi)酯(DL-Pantolactone)是重要的前體。它由甲醛、異丁醛和氰化物經(jīng)多步驟方法制備；在進一步的方法步驟中，涉及外消旋混合物，將D-泛酸內(nèi)酯與β-丙氨酸縮合，從而獲得D-泛酸。
一般商品形式是D-泛酸的鈣鹽。D，L-泛酸外消旋混合物的鈣鹽也很常見。
通過微生物發(fā)酵方式制備的優(yōu)勢在于直接形成期望的立體異構形式，也就是沒有L-泛酸的D形式。
各種細菌，如大腸桿菌(Escherichia coli)、產(chǎn)脲節(jié)桿菌(Arthrobacter ureafaciens)、產(chǎn)紅棒桿菌(Corynebacteriumerythrogenes)、產(chǎn)氨短桿菌(Brevibacterium ammoniagenes)，以及酵母，如Debaromyces castellii，在適宜的發(fā)酵條件下能產(chǎn)生D-泛酸，如EP-A-0 493 060、EP-A-0 590 857和WO 97/10340所述。特別適宜的微生物是本文描述的大腸桿菌IFO3547衍生物，如FV5069/pFV31或FV5069/pFV202菌株。
如EP-A-0 493 060、EP-A-0 590 857和WO 97/10340中所述，在通過發(fā)酵進行的D-泛酸制備中，在適宜的營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)能產(chǎn)生D-泛酸的微生物，接著所形成的D-泛酸得到分離、純化并以復雜的方式制備鈣鹽形式。
適宜的營養(yǎng)培養(yǎng)基含有碳源如葡萄糖或淀粉水解產(chǎn)物或蔗糖或糖蜜，前體如β-丙氨酸、D，L-泛酸或D，L-泛酸內(nèi)酯，氮源如硫酸銨，磷源如磷酸鉀以及其他鹽，痕量元素和維生素，以及任選的復合培養(yǎng)基添加劑如酵母提取物。然后在適宜的pH值下，在適宜的通氣及攪拌下，在該培養(yǎng)基中培養(yǎng)微生物，然后它們分泌D-泛酸。
根據(jù)WO 96/33283和EP-A-0 590857中描述的現(xiàn)有技術，通過復雜的分離和純化操作從含泛酸的發(fā)酵液獲得D-泛酸的鈣鹽。在通過過濾或離心首次分離生物量后，通過活性炭或柱色譜進一步處理(work up)濾液。使所得溶液和氫氧化鈣反應后，期望的鈣鹽結晶析出。
根據(jù)WO 96/33283，在第一根柱中用活性炭使濾液脫色。用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.0，接著在另外兩根填有活性炭的柱中連續(xù)純化液體。用甲醇洗脫D-泛酸。接著用氫氧化鈣粉末進行中和，通過在5℃下結晶，由此溶液獲得D-泛酸鈣。
在EP-A-0 590 857描述的方法的情況下，首先用陰離子和陽離子交換柱純化濾液。用鹽酸洗脫。接著用氫氧化鈣中和洗脫的部分；向其中加入活性炭并全部濾去。接著用低分子量醇(甲醇、乙醇、異丙醇)萃取所獲得的濾液，通過結晶獲得D-泛酸鈣。
以上述方式制備的D-泛酸鈣用作飼養(yǎng)動物的飼料的添加劑。發(fā)明目的根據(jù)現(xiàn)有技術，通過化學合成或由發(fā)酵液獲得D-泛酸的鹽或D，L-泛酸的鹽，然后將它們以純品形式添加到飼料中。
本發(fā)明的目的是提供更易加工的形式的D-泛酸及其鹽，及用于飼料的此D-泛酸及其鹽的制備方法。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，含有D-泛酸和/或其鹽的可傾倒的動物飼料添加劑的特征在于其另外含有固體形式的含氯化物的成分，含氯化物的成分的濃度為＜3mg/g添加劑，優(yōu)選為＜2mg/g添加劑，尤其是＜1.5mg/g添加劑。
一般添加劑被壓實、造粒、呈細粒，但根據(jù)要求在任何情況下都是可傾倒的形式，并且含有不同量的生物量。視密度為200至800kg/m3，尤其是約400至700kg/m3。該添加劑易于傾倒且貯存穩(wěn)定。
如果生物量得到分離，通常除去其他無機固體，例如在發(fā)酵期間加入的無機固體。另外，在沒有通過適宜的方法分離的范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的添加劑含有其他物質(zhì)，尤其是有機物質(zhì)的主要部分，所述其他物質(zhì)是形成或加入的并且溶解在發(fā)酵液中。
這種物質(zhì)包括由在發(fā)酵中所用的微生物產(chǎn)生和分泌的除D-泛酸外的有機副產(chǎn)物。它們包括L-氨基酸，所述L-氨基酸選自L-甲硫氨酸、L-賴氨酸、L-纈氨酸、L-蘇氨酸、L-丙氨酸或L-色氨酸，特別是L-纈氨酸。它們還包括帶有一至三個羧基的有機酸，如醋酸、乳酸、檸檬酸、蘋果酸或延胡索酸。最后，它們還包括糖，如海藻糖。這種化合物可能是期望的，因為它們提高添加劑的營養(yǎng)價值。
在優(yōu)選的形式中制備了含有D-泛酸和/或其鹽的發(fā)酵液，其中a)在基本上不含氯化物的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，b)將任選地在分離生物量并濃縮后所得的發(fā)酵液干燥、壓實、噴霧干燥、造粒或施加在載體上或包埋在穩(wěn)定化基質(zhì)中。
對于根據(jù)本發(fā)明的方法，用適于產(chǎn)生D-泛酸的微生物獲得適宜的發(fā)酵液，所述發(fā)酵液含有D-泛酸和/或其鹽。鹽一般是鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽或鈣鹽。
微生物可以是真菌或酵母如Debaromyces castellii，或格蘭氏陽性菌如棒桿菌屬，或格蘭氏陰性菌如腸桿菌科。在腸桿菌科的情況下，需特別提到的是埃希桿菌屬和大腸桿菌種。在大腸桿菌種中，需提到所謂的K-12菌株，如MG1655菌株或W3110菌株(Neidhard等Escherichia coli and Salmonella(大腸桿菌和沙門氏菌)。Cellularand Molecular Biology(ASM Press，Washington，D.C.))，或大腸桿菌野生型菌株IFO3547(Institut für Fermentation，Osaka，日本)和由其衍生而來的突變體。在由IFO3547產(chǎn)生的菌株中，F(xiàn)V5069/pFV31(EP-A-0 590 857)和FV5069/pFV202(WO 97/10340)是主要的。在棒桿菌屬的情況下，需特別提到的是谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)種。
可以通過分批法或補料分批法或重復補料分批法培養(yǎng)上述微生物，從而連續(xù)或不連續(xù)地生產(chǎn)D-泛酸。Chmiel(Bioprozesstechnik 1.Einführung in die Bioverfahrenstechnik(Gustav Fischer Verlag，Stuttgart，1991)或Storhas(Bioreaktoren und periphere Einrichtungen(ViewegVerlag，Braunschweig/Wiesbaden，1994)在教科書中描述了已知培養(yǎng)方法的概要。
要用的培養(yǎng)基必需符合以適宜的方式滿足正被討論的微生物的要求。發(fā)酵培養(yǎng)基基本上沒有含氯化物的成分。根據(jù)本發(fā)明，在生產(chǎn)發(fā)酵罐中氯離子的濃度＜300mg/l，優(yōu)選＜200mg/l，更特別優(yōu)選＜150mg/l?？梢杂米魈荚吹陌ㄌ呛吞細浠衔锶缙咸烟?、蔗糖、乳糖、果糖、麥芽糖、糖蜜、淀粉和纖維素，油和脂肪如大豆油、向日葵油、花生油和椰子油，脂肪酸如棕櫚酸、硬脂酸和亞油酸，醇如甘油和乙醇，以及有機酸如醋酸。那些物質(zhì)可以單獨或以混合物的形式使用?？梢杂米鞯吹陌ㄓ袡C含氮化合物如蛋白胨、酵母提取物、肉膏、麥芽膏、玉米漿、大豆粉和尿素，或無機化合物如硫酸銨、磷酸銨、碳酸銨和硝酸銨。氮源可以單獨或以混合物的形式使用?？梢杂米髁自吹陌姿岫溻浕蛄姿釟涠浕蛳鄳暮c鹽。培養(yǎng)基還必須含有生長所必需的金屬鹽，如硫酸鎂或硫酸鐵。最后，除了上述物質(zhì)之外，還可以使用生長必需物質(zhì)，如氨基酸和維生素。D-泛酸的前體，如天冬氨酸鹽、β-丙氨酸、酮異戊酸鹽、酮泛酸(ketopantoic acid)或泛酸，以及任選的它們的鹽，也可以加入培養(yǎng)基中。在培養(yǎng)期間，上述物質(zhì)可以以一批的形式加入培養(yǎng)物中，或者以適宜的方式給入。
為了控制pH值，使用氨或氨水或其它堿性化合物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣。如果需要酸性化合物來控制pH，可以方便地使用磷酸或硫酸。為了直接制備泛酸的鈣鹽，在發(fā)酵期間使用含水懸浮液形式的氫氧化鈣。為了控制泡沫的產(chǎn)生，可以使用防沫劑，如脂肪酸聚乙二醇酯。為了保持質(zhì)粒的穩(wěn)定性，任選地向培養(yǎng)基中加入具有選擇性作用的適宜的物質(zhì)，例如抗生素。為了保持有氧條件，可以向培養(yǎng)物中引入氧或含氧氣體混合物，例如空氣。培養(yǎng)物的溫度通常為20～45℃，優(yōu)選為25～40℃。培養(yǎng)持續(xù)直至已經(jīng)形成最大量的D-泛酸。這一目的通常在10～160小時的時間內(nèi)實現(xiàn)。
這樣獲得的發(fā)酵液通常含有7.5～25％(重量)的干物質(zhì)，并且含有2～20％(重量)的D-泛酸。特別有利的發(fā)酵方法是當發(fā)酵完成時D-泛酸以干物質(zhì)形式存在，其量為至少20％(重量)。至少在發(fā)酵結束時限制發(fā)酵中的糖的量也是有利的，但是有利地是限制發(fā)酵持續(xù)時間的至少30％。這意味著在那段時間，發(fā)酵培養(yǎng)基中可用的糖濃度保持在，或降低至≥0～3g/l。
為了制備根據(jù)本發(fā)明的添加劑，首先優(yōu)選地通過已知的分離方法，如離心、過濾、傾析或它們的組和，將含有D-泛酸和/或其鹽的發(fā)酵液與全部或部分生物量分離。然而，根據(jù)本發(fā)明也可能將所有生物量留在發(fā)酵液中。以那種方式獲得的懸浮液接著優(yōu)選濃縮到不超過60％(重量)的干物質(zhì)，并在噴霧干燥或冷凍干燥裝置的幫助下加工成粉末。接著通過適宜的壓制或造粒方法將粉末轉化成粗糙的、易于傾倒的、可貯存的和基本上無塵的產(chǎn)品。在造?；驂褐撇僮髦?，有利地使用常規(guī)有機或無機輔助物質(zhì)，或載體，如淀粉、明膠、纖維素衍生物或類似物質(zhì)，這些物質(zhì)一般用作食品或飼料或其他物質(zhì)如二氧化硅、硅酸鹽或硬脂酸鹽加工過程中的粘合劑、膠凝劑或增稠劑。
或者，可以將產(chǎn)品施加于已知的常用于飼料加工的有機或無機載體物質(zhì)，如二氧化硅、硅酸鹽、粗粉、麩、面粉、淀粉、糖等，并且/或者它們可以通過常規(guī)增稠劑或粘合劑被穩(wěn)定化。相關的實例和方法在文獻(Die Mühle+Mischfuttertechnik 132(1995)49，817頁)中有描述。
根據(jù)本發(fā)明含有D-泛酸和/或其鹽并通過上述方法制備的新的固體產(chǎn)品含有20～80％(重量)，優(yōu)選30～75％(重量)的D-泛酸。它們一般含有2.5～25％(重量)的無機成分，以及＞0～30％(重量)的任選的有機副產(chǎn)物。干生物量的含量為≥0～35％(重量)。水含量優(yōu)選＜5％(重量)。
根據(jù)本發(fā)明含有D-泛酸和/或其鹽并通過上述方法制備的新的產(chǎn)品的不同之處在于粒度分布為20μm至2000μm，優(yōu)選為50μm至800μm，特別優(yōu)選為150μm至600μm。極細微塵(＜10μm)的含量為約0～10％(重量)，優(yōu)選為約0～5％(重量)。該產(chǎn)品用作飼料添加劑。
可以通過已知方法(Velisek；Chromatographic Science 60，515-560(1992))測定D-泛酸的濃度。
可以通過激光衍射光譜的方法測定粒度分布。相應的方法在R.H.Müller和R.Schuhmann，Wissenschaftliche VerlagsgesellschaftStuttgart撰寫的課本“Teilchengrssenmessung in der Laborpraxis”(1996)或M.Rhodes撰寫的課本“Introduction to ParticleTechnology”，Verlag Wiley & Sons(1998)中有描述。
在Quanto Chrome(Odelzhausen，德國)的Cilas 920激光衍射光度計上進行測定。通過德國工業(yè)標準DIN 66141中對粒度分布表示法的詳細說明進行測定結果的評價。實施例1在發(fā)酵液中制備D-泛酸的鈣鹽1.接種物的制備(主細胞庫)將大腸桿菌FV5069/pFV31樣品涂在已向其中加入50μg/ml氨芐西林的LBG瓊脂上。將瓊脂平板培養(yǎng)物在37℃下培養(yǎng)17小時，并接著在+4℃貯存在冰箱中。接著將所選擇的單個菌落進一步在LBG肉湯中增殖。LBG肉湯具有以下組成10g/l蛋白胨、5g/l酵母提取物、5g/l NaCl和1g/l葡萄糖。LBG瓊脂另外含有12g/l瓊脂。現(xiàn)成制劑可以以LB肉湯基或LB瓊脂從Gibco/BRL(Paisley，蘇格蘭，英國)獲得。加入1g/l葡萄糖后，獲得所述的培養(yǎng)基。將100ml錐形瓶中含有的10ml培養(yǎng)物在來自Kühner AG(Birsfelden，瑞士)的ESR培養(yǎng)箱中于37℃，180rpm下培養(yǎng)16小時。接著通過在來自Beckmann(Hanover，德國)的J-6B離心機中于4000rpm下離心15分鐘而分離細胞懸浮液。將細胞粒狀沉淀在其中已加入20％甘油的10ml LBG培養(yǎng)基中再懸??；在無菌條件下向10個等分試樣中分別加入1ml，并在-70℃冷凍。那些培養(yǎng)物用作主細胞庫。
為了制備工作細胞庫，將100ml錐形瓶中已向其中加入50μg/ml氨芐西林的LBG培養(yǎng)基分成10ml部分，接著用100μl上述主細胞庫接種。培養(yǎng)在來自Kühner AG(Birsfelden，瑞士)的ESR培養(yǎng)箱中于37℃，180rpm下進行16小時。
培養(yǎng)后，用來自Dr.Lange(柏林，德國)的LP2W光度計在660nm的測定波長下測定培養(yǎng)物懸浮液的光密度(OD)。結果為3.5。接著將細胞懸浮液在無菌條件下引入來自Greiner(Fickenhausen，德國)的30ml無菌聚乙烯管中，并且用來自Beckmann(Hanover，德國)的J-6B離心機在2500rpm下離心15分鐘進行分離。將已分離的生物量在已向其中加入20％甘油的10ml LBG培養(yǎng)基中再懸浮。接著在無菌條件下將500μl部分的細胞懸浮液引入來自Nalgene(紐約，美國)的1ml無菌管中，并在-70℃冷凍。這樣制備的保存的批量用作工作細胞庫。2.含有D-泛酸鈣的發(fā)酵液的制備為了制備含有D-泛酸鈣的發(fā)酵液，首先在搖瓶培養(yǎng)物中增殖工作細胞庫，后者用于接種預發(fā)酵罐。預發(fā)酵罐培養(yǎng)物用于接種生產(chǎn)發(fā)酵罐。SKA培養(yǎng)基(表1)用于搖瓶培養(yǎng)物。SKA培養(yǎng)基如下制備7.0g(NH4)2SO4、0.5g KH2PO4、1.0g K2HPO4、0.5g MgSO4·7H2O、0.01g MnSO4·H2O、0.001g ZnSO4·7H2O、0.005g Fe2(SO4)3和20g玉米漿，其中玉米漿預先用25％氨水溶液調(diào)節(jié)至pH 6.8，將上述物質(zhì)稱入1升玻璃燒杯中，接著用蒸餾水補足到825g。含有玉米漿的鹽溶液在121℃的高壓滅菌器中滅菌20分鐘。另外，由25g葡萄糖和0.002g鹽酸硫胺素組成的溶液用蒸餾水補足到125g，并通過過濾滅菌。向100ml燒瓶中稱入10g CaCO3并在123℃的高壓滅菌器中滅菌20分鐘。通過將上述兩種成分和含有玉米漿的鹽溶液混和而獲得SKA培養(yǎng)基。
將在100ml錐形瓶中的SKA培養(yǎng)基分成每份12.5ml，并接著用0.5ml細胞懸浮液接種。所用的細胞懸浮液是保存的批量工作細胞培養(yǎng)物用無菌生理鹽水以1∶100的比例稀釋而成的。在來自InforsAG(Bottmingen，瑞士)的RC-1-TK培養(yǎng)箱中于32℃，150rpm下培養(yǎng)20小時。其后在660nm的測定波長下測定的光密度(OD 660)為12.5。
為了接種包含在來自Bioengineering(Wald，瑞士，LP-42型)的42升攪拌反應器發(fā)酵罐中的20kg A1-102預培養(yǎng)基，將0.5ml SKA培養(yǎng)基以1∶100的比例稀釋，取50ml該懸浮液加入發(fā)酵罐中。預培養(yǎng)基A1-102含有列于表2中的成分。培養(yǎng)物在37℃，0.5體積/體積/分鐘(vvm)的體積比通風，氧分壓為20％空氣飽和度，pH為6.5的條件下培養(yǎng)15.5小時，直到OD 660達到11.3。
為了接種包含在來自B.Braun(BBI，德國，Melsungen，BiostatE/ED型)的14升攪拌反應器發(fā)酵罐中的5830g M1-380主要培養(yǎng)基，加入在A1-102培養(yǎng)基中的423ml第二預培養(yǎng)物。M1-380主要培養(yǎng)基含有列于表3中的成分。培養(yǎng)物首先在37℃的溫度，0.75vvm的體積比通風，400rpm的最小攪拌，pH為6.5的條件下培養(yǎng)6.5小時，直到OD 660達到18.6，氧分壓達到2％空氣飽和度。接著培養(yǎng)物在37℃的溫度，氧分壓為2％空氣飽和度，pH為6.0的條件下進一步培養(yǎng)41小時，直到OD 660達到66.8。在發(fā)酵13小時后，在34.5小時的時間內(nèi)加入在570ml水中的152.7g β-丙氨酸。在發(fā)酵21.5小時后，為了控制pH值，在26小時的時間內(nèi)，計量加入10％的Ca(OH)2溶液。在41小時的時間內(nèi)加入葡萄糖濃度為650.8g/l，鹽酸硫胺素濃度為35.7g/l的3.43kg M2-257培養(yǎng)基。
接著用來自Dr.Bruno Lange GmbH(柏林，德國)的LP1W型數(shù)字光度計在660nm的測定波長下測定光密度(OD)，通過HPLC(Hypersil APS 2.5μm，250×5mm，RI檢測器)測定所形成的D-泛酸的濃度。
70.0小時后，在最終發(fā)酵樣品中測定以D-泛酸計算的D-泛酸鈣的濃度為49.7g/l。
在來自Knauer(柏林，德國)的M321型HPLC(高效液相色譜)儀器的幫助下通過RI(折射率)檢測器用粒徑為5μm的HypersilAPS2氨基相測定D-泛酸的含量。
表1SKA培養(yǎng)基的組成
表2A1-102培養(yǎng)基的組成
表3M1-380培養(yǎng)基的組成
實施例2從發(fā)酵液中制備精細分離的D-泛酸鈣首先，從根據(jù)實施例1的方法制備的含有4.9％(重量)D-泛酸的含有D-泛酸鈣的發(fā)酵液中分離生物量。為此，用來自Millipore(BadHomburg，德國)的CERAFLO MSP005756過濾裝置中的0.22μm微濾膜通過交叉流過濾將90升上述發(fā)酵液過濾。
接著將這樣處理的液體在來自Büchi，瑞士的Rotavapor R-152旋轉蒸發(fā)儀中于40～80℃真空濃縮至約30％固體成分的液體含量。接著將這樣濃縮的液體噴霧干燥以制備D-泛酸的鈣鹽。為此，使用來自Niro(哥本哈根，丹麥)的NIRO Minor型Technikum噴霧干燥器，它具有霧化板(直徑120mm；轉速135m/秒)，入口溫度175℃，出口溫度80℃，干燥氣體通過量525m3/小時。為了使產(chǎn)品更好地流出，基于濃縮物中的干物質(zhì)，以5％(重量)的比例向干燥氣流中加入粉末助劑形式的來自Degussa-Hüls AG(Frankfurt am Main，德國)的Sipemat 22。
這樣制備的含D-泛酸鈣的產(chǎn)品具有48.5％(重量)的D-泛酸含量，它易于傾倒，視密度為460kg/m3，平均粒度為34μm。
表4
實施例3通過在輥式壓實機中壓實并篩分而制備粒度＞100μm的D-泛酸鈣根據(jù)實施例2的方法制備的含有D-泛酸鈣的塵樣產(chǎn)品含有約48.5％(重量)的D-泛酸，平均粒度為34μm，通過具有雪茄狀輥，壓力為40至90牛頓的輥式壓實機(來自BEPEX的L200/50 P型Pharmapaktor)將該產(chǎn)品壓實。輥的旋轉速度為每分鐘10轉。接著將這樣制備的壓實的產(chǎn)品在粉碎篩中粉碎至粒度分布為200至400μm。表5總結了各顆粒部分的收率。
與粉狀起始產(chǎn)品相比，壓實的產(chǎn)品具有顯著更低的微塵含量和顯著改善的流動行為。
表5
“平均粒度”部分通過篩分得到分離，它代表該產(chǎn)品。以D-泛酸計算，這樣制備的產(chǎn)品具有約40.7％(重量)的含量，視密度為630kg/m3。實施例4通過在流化床顆粒機中堆積造粒(build-up granulation)制備平均粒度為200至400μm的D-泛酸鈣4.1用水作為造粒粘合劑隨后，在流化床顆粒機中通過用一定量的水噴霧，進一步處理根據(jù)實施例2中描述的方法由含有D-泛酸鈣的發(fā)酵液通過噴霧干燥制備的含D-泛酸鈣的粉狀產(chǎn)品。
為此，將300g根據(jù)實施例2制備的含D-泛酸鈣的塵樣產(chǎn)品放置在來自Aeromatics Niro(哥本哈根，丹麥)的實驗室流化床裝置中。在流化床溫度為50℃，廢氣溫度為30℃的條件下，通過計量裝置每分鐘噴入3g水。流化的氣體溫度為70～80℃。這樣制備的產(chǎn)品的粒度分布如表6所示。
表6
以D-泛酸計算，測定的含量為38.1％(重量)。該產(chǎn)品幾乎無塵。視密度為310kg/m3。產(chǎn)品非常易于傾倒。4.2用含有泛酸鈣的濃縮物作為造粒粘合劑在另一試驗中，在流化床顆粒機中，通過用一定量的含有約50％(重量)干物質(zhì)的濃縮D-泛酸鈣溶液噴霧，進一步處理根據(jù)實施例2中描述的方法通過噴霧干燥由含D-泛酸鈣的發(fā)酵液制備的含D-泛酸鈣的粉狀產(chǎn)品。
為此，將1000g根據(jù)實施例2中描述的方法制備的含D-泛酸鈣的塵樣產(chǎn)品放置到來自Glatt(Binzen，德國)的分批操作的實驗室流化床裝置中。在流化床溫度為約40～45℃，入口空氣溫度為約80℃的條件下，每分鐘將約5g上述濃縮物噴入實驗室流化床裝置中。這樣制備的產(chǎn)品的粒度分布如表7所示。
表7
以D-泛酸計算，測定的含量為38.9％(重量)。該產(chǎn)品幾乎無塵。視密度為400kg/m3。
通過本文描述的方法，或者通過不同的噴霧、霧化床、攪拌或混合方法，含有D-泛酸鈣或D-泛酸的濃縮物被噴霧到其它常規(guī)有機或無機載體或輔助物質(zhì)，如二氧化硅、硅酸鹽、粗粉、麩、面粉、淀粉、糖等上，并任選地使用粘合劑、膠凝劑或其它配方助劑進行造粒。實施例5通過在真空干燥器中混合和造粒制備平均粒度為100～400μm的D-泛酸鈣首先從根據(jù)實施例1的方法制備的含約4.9％(重量)D-泛酸的含D-泛酸鈣的發(fā)酵液分離生物量。為此，將90升上述發(fā)酵液在來自Millipore(Bad Homburg，德國)的CERAFLO MSP005756過濾裝置中用0.22μm微過濾膜通過交叉流過濾濾除。
接著將這樣處理的液體在來自Büchi，瑞士的Rotavapor R-152旋轉蒸發(fā)儀中在40～80℃真空濃縮至液體含量為約50％(重量)干成分。接著，將這樣制備的D-泛酸含量為28.8％(重量)的含D-泛酸鈣的濃縮物在真空干燥器(VT 130型，Gebrüder LdigeMaschinenbau GmbH，Paderborn，德國)的幫助下和二氧化硅(Sipemat22，Degussa-Hüls AG，F(xiàn)rankfurt，德國)混和，形成可自由流動的顆粒。首先將15kg二氧化硅(Sipemat 22，Degussa-Hüls AG，德國)放置于真空干燥器中(VT 130型，Gebrüder Ldige Maschinenbau GmbH，德國)，接著在200毫巴的真空下以2.0kg/分鐘的速度加入39.0kg上面制備的含D-泛酸鈣的濃縮物，要混合的物質(zhì)的溫度為45℃，攪拌速度為120rpm(轉/分鐘)。接著混和操作再進行15分鐘，同時真空度增加到50毫巴。接著將這樣制備的含D-泛酸鈣的顆粒在流化床表面積為0.3m2，床溫度為65℃，干燥氣通過量為270Nm3/小時的振動流化床干燥器(Escher-Wyss，Linden，德國)中干燥到殘余水分含量小于2％(重量)。表8顯示產(chǎn)品的平均粒度分布。
表8
以D-泛酸計算，測定的含量為32.6％(重量)。產(chǎn)品幾乎無塵。干燥后視密度為650kg/m3。
通過本文描述的方法或不同的噴霧、霧化床、攪拌或混合方法，可以將含有D-泛酸鈣或D-泛酸的濃縮物噴到其它常規(guī)有機或無機載體或輔助物質(zhì)，如二氧化硅、硅酸鹽、粗粉、麩、面粉、淀粉、糖上，并任選地用粘合劑、膠凝劑或其它配方助劑進行造粒。
權利要求
1.基于發(fā)酵液且含有D-泛酸和/或其鹽的可傾倒的動物飼料添加劑，其特征在于a)它們含有從≥0至100％的量的在發(fā)酵期間形成的生物量；b)它們含有發(fā)酵液的其他成分的至少主要部分；c)它們是固體形式的，粒度分布為20～2000μm，特別是50～800μm，更特別是150～600μm，并且是可傾倒的。
2.根據(jù)權利要求1的動物飼料添加劑，其特征在于它們另外含有固體形式的含氯化物的成分，含氯化物的成分的濃度為＜3mg/g添加劑，優(yōu)選為＜2mg/g添加劑，特別優(yōu)選為＜1.5mg/g添加劑。
3.根據(jù)權利要求1或2的動物飼料添加劑，其特征在于它們含有一種或多種選自D-泛酸的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽或鈣鹽的鹽。
4.根據(jù)權利要求1、2或3的動物飼料添加劑，其特征在于它們含有20～80％(重量)的D-泛酸和/或其鹽(干物質(zhì))，且氯化物含量為＜3.0mg/g添加劑，優(yōu)選為＜2.0mg/g添加劑，特別優(yōu)選為＜1.5mg/g添加劑。
5.根據(jù)權利要求1或2的動物飼料添加劑，其特征在于它們是配方成在加工方面有利的微粒的形式。
6.根據(jù)前述權利要求之一項或多項的動物飼料添加劑，其特征在于它們另外含有一種或多種選自L-甲硫氨酸、L-賴氨酸、L-纈氨酸、L-丙氨酸、L-蘇氨酸或L-色氨酸的L-氨基酸。
7.含有D-泛酸和/或其鹽的飼料添加劑的制備方法，其特征在于a)從含有D-泛酸且通過發(fā)酵獲得的發(fā)酵液中任選地全部或部分分離生物量和/或一部分其他成分，b)向所得溶液或液體中任選地加入堿土金屬或堿金屬的氫氧化物或氧化物，c)任選地濃縮根據(jù)a)或b)得到的混合物，以及d)通過適宜方法獲得粒度分布為20～2000μm的可傾倒的動物飼料添加劑。
8.根據(jù)權利要求7的方法，其特征在于基于D-泛酸，所加入的氧化物或氫氧化物的化學計量比為0.8至1.2，優(yōu)選為0.95至1.1。
9.根據(jù)權利要求1的含有D-泛酸和/或其鹽的飼料添加劑的制備方法，其特征在于a)從含有D-泛酸且通過發(fā)酵獲得的發(fā)酵液中任選地全部或部分分離生物量和/或一部分成分，b)任選地濃縮這樣獲得的混合物，以及c)將含有泛酸銨的飼料添加劑通過適宜方法轉化成可傾倒的形式，d)通過適宜方法獲得粒度分布為20～2000μm的可傾倒的動物飼料添加劑。
10.根據(jù)權利要求7的從發(fā)酵液制備動物飼料添加劑的方法，所述動物飼料添加劑含有約20～80％(重量)的D-泛酸和/或其鹽(干物質(zhì))，所述鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽或鈣鹽，其特征在于下列步驟a)任選地從發(fā)酵液中除去水(濃縮)，b)除去≥0至100％的量的在發(fā)酵期間形成的生物量，c)向根據(jù)a)和b)獲得的發(fā)酵液中任選地加入一種或多種上述化合物，所加入的化合物的量為使其在動物飼料添加劑中的總濃度在約20～80％(重量)的范圍內(nèi)，以及d)獲得期望的粉末，或者優(yōu)選的顆粒形式的動物飼料添加劑。
11.根據(jù)權利要求7的方法，其特征在于任選地在加入D-泛酸和/或其鹽之后和任選地在加入有機或無機輔助物質(zhì)后，通過以下方式從發(fā)酵液獲得動物飼料添加劑a)干燥和壓實，或b)噴霧干燥，或c)噴霧干燥和造粒，或d)噴霧干燥和堆積造粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于發(fā)酵液且含有D－泛酸和/或其鹽的動物飼料添加劑，其特征在于，a)其含有從≥0至100％的量的在發(fā)酵期間形成的生物量；b)其含有發(fā)酵液的其他成分的至少主要部分；c)其是固體形式的，粒度分布為20～2000μm，并且是可傾倒的；并且(d)其含有固體形式的含氯化物的成分，含氯化物的成分的濃度為＜3mg/g添加劑。本發(fā)明還提供含有D－泛酸和/或其鹽的動物飼料添加劑的制備方法。
文檔編號A23K1/175GK1449254SQ01812219
公開日2003年10月15日 申請日期2001年5月9日 優(yōu)先權日2000年7月4日
發(fā)明者米夏埃爾·賓德爾, 馬蒂亞斯·默爾, 迪特爾·格賴辛格, 亞歷山大·默勒, 瓦爾特·普費弗爾 申請人:德古薩股份公司