顯強于溶液劑。 隨著時間的推移，DiR在小鼠腸道內(nèi)逐漸被清除，熒光強度逐漸變?nèi)踔料А５?h后納米結(jié) 構(gòu)脂質(zhì)載體在腸細胞內(nèi)仍然能保持一定的熒光強度，說明納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體能夠促進藥物 在腸道的吸收。
[0069] 實施例9
[0070] 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體腸道吸收機制研究
[0071] 精密移取多西他賽-油酸納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體適量，用K-R液稀釋得到濃度為25yg/ mL的供試液。將大鼠禁食（自由飲水)12h，用質(zhì)量分數(shù)為20%的烏拉坦腹腔注射麻醉(1.0 g/ kg)，固定，置于恒溫手術臺上以保持體溫。沿腹中線剪開3~4cm的開口，打開腹腔，剪下回 腸，K-R液洗凈內(nèi)容物，去除腸系膜，將腸囊外翻并置37°CK-R液中。剪成80-100mg的腸環(huán)，置 于24孔板中，加入ImL K-R液洗兩遍，分別加入氯丙嗪溶液、吲哚美辛溶液、秋水仙堿溶液、 槲皮素溶液和疊氮鈉溶液各lmL(n = 3)，于37°C水浴中孵育45min。去除上述溶液，各孔均加 入供試液ImL，37°C水浴中繼續(xù)孵育45min。去除藥液，加入冰冷的K-R液，洗三遍，終止攝取。 4°C保存，待測。同時，該實驗還在4°C和不加攝取抑制劑的條件下進行，作為對照。藥物相對 吸收率(R r)按照下式計算：
[0073] 其中，Ae和Ac分別為實驗組和對照組樣品的峰面積，me和mc分別為實驗組和對照組 樣品的質(zhì)量。
[0074]如圖12所示，當外翻腸環(huán)中加入網(wǎng)格蛋白抑制劑氯丙嗪、小窩蛋白抑制劑吲哚美 辛、巨胞飲抑制劑秋水仙素、小窩蛋白和網(wǎng)格蛋白非依賴內(nèi)吞抑制劑槲皮素、能力耗竭劑疊 氮鈉后，多西他賽-油酸前藥納米制劑的攝取量顯著降低（p<0.01)至對照組的39.68%， 69.94%，77.59%，61.30%，62.24%。表明納米粒是經(jīng)上述五種途徑介導的內(nèi)吞入胞并且 整個攝取過程是能量依賴的。其中，網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞是最重要的途徑。
[0075] 實施例10
[0076] 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體經(jīng)MDCK細胞吸收情況
[0077] 將MDCK細胞以I X IO4/孔/mL接種于6孔培養(yǎng)板中，置于CO2培養(yǎng)箱中。24h后，用37°C 的DMEM高糖培養(yǎng)液(無血清)洗滌2-3次，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，小心棄去培養(yǎng)液，加入ImL 的lyg/mL香豆素-6乙醇溶液和包載香豆素-6的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，分別于37°C恒溫搖床中 振蕩Ih，3h和5h。孵化結(jié)束后，棄去培養(yǎng)液，加入4°C的PBS終止細胞攝取，PBS洗3次。加 500uL4%多聚甲醛37°C固定IOmin，PBS洗3次。然后加入500uL 0 · 5 %TritonX-100以增加細 胞通透性，PBS洗3次。將蓋玻片取出，細胞面朝上至于平面上，在暗室下，向蓋玻片上加入 IOOuL DAPI溶液，再次放入濕盒中。37°C振蕩lh。棄去溶液，PBS洗3次，取出蓋玻片，置于滴 有封固液的載玻片上，于共聚焦顯微鏡下觀察。
[0078] 由圖13可知，溶液組和納米粒組對香豆素-6的吸收隨著時間的推移逐漸增加，但 在每一時間段，納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組的吸收均顯著高于溶液組，說明納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體能 夠促進藥物經(jīng)MDCK細胞的吸收。
[0079] 實施例11
[0080] 多西他賽-油酸納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體藥代動力學研究
[0081 ]取35只健康、雄性大鼠，體重200g左右，隨機分為5組，給藥前禁食12h，自由飲水。 一組靜脈注射多西他賽溶液(5mg/kg)作為對照，另四組分別口服給藥多西他賽-油酸溶液 (53 · 2mg/kg)，多西他賽-油酸納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(53 · 2mg/kg)，多西他賽溶液(40mg/kg)，多 西他賽納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(40mg/kg)，于規(guī)定的時間點眼眶取血，通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 儀測定藥物濃度。
[0082]由圖14可知，與多西他賽溶液組和多西他賽納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組相比，多西他賽-油酸前藥納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的生物利用度提高了4.04倍和2.06倍。表明基于core-match機 理包載多西他賽-油酸前藥的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體能顯著提高多西他賽的口服生物利用度。
【主權項】
1. 多西他賽-油酸前藥，其特征在于，該前藥嵌段W多西他賽為母藥，W醋鍵鏈接一分 子油酸為脂肪鏈，結(jié)構(gòu)式如下所示：2. 根據(jù)權利要求1所述的多西他賽-油酸前藥的制備方法，其特征在于，采用如下步驟 制備：油酸溶于少量二氯甲燒中，在雙環(huán)己基碳酷亞胺和4-二甲氨基化晚催化作用下，化保 護下冰浴2-化，然后與多西他賽在25-30°C化保護下反應24-3化，經(jīng)分離純化得到白色粉末 前藥。3. 多西他賽-油酸前藥的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，W單硬脂酸甘油醋為固體脂 質(zhì)，W油酸為液體脂質(zhì)，W多西他賽-油酸前藥為主藥，W泊洛沙姆188或脫氧膽酸鋼為表面 活性劑，W賴氨酸橋連的聚乙二醇2000二維生素 E班巧酸醋或賴氨酸橋連的聚乙二醇5000 二維生素 E班巧酸醋為表面修飾材料。4. 如權利要求3所述的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，單硬脂酸甘油醋、油酸、表面活 性劑、表面修飾材料、多西他賽-油酸前藥的重量組成比為：1:0.3~0.5:0.5~1:0.3~0.5: 0.8 ~1.2。5. 如權利要求3所述的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，單硬脂酸甘油醋、油酸、表面活 性劑、表面修飾材料、多西他賽-油酸前藥的重量組成比為:7:3:5:3:8。6. 如權利要求3-5任何一項所述的多西他賽-油酸前藥的納米脂質(zhì)載體的制備方法，其 特征在于，制備工藝如下： 將一定量的單硬脂酸甘油醋，油酸，多西他賽-油酸前藥，表面修飾材料，溶于適量乙醇 中，加熱至70-80°C，磁力攬拌下使其溶解均勻，將表面活性劑溶于一定量水中，加熱至70-80°C，磁力攬拌下使其溶解均勻，將上述乙醇溶液快速加入到水溶液中，70-80°C水浴下保 持磁力攬拌5-lOmin，將上述溶液超聲處理，迅速冰浴冷卻，得到淡藍色乳光液體制劑。7. 權利要求1所述的多西他賽-油酸前藥在制備納米脂質(zhì)載體藥物中的應用。8. 權利要求3-5任何一項所述的多西他賽-油酸前藥的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在藥物傳遞 系統(tǒng)中的應用。9. 權利要求3-5中任何一項所述的多西他賽-油酸前藥的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在制備抗 腫瘤藥物中的應用。10. 權利要求3-5中任何一項所述的多西他賽-油酸前藥的納米脂質(zhì)載體在制備口服給 藥藥物中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種多西他賽-油酸前藥的制備及基于core-match機理的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在藥物傳遞中應用。所述的前藥以多西他賽為母藥，以油酸為脂肪鏈，通過脂鍵鏈接。所述的基于core-match機理的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體以單硬脂酸甘油脂為固態(tài)脂質(zhì)，以油酸為液態(tài)脂質(zhì)，以泊洛沙姆188或脫氧膽酸鈉為表面活性劑，以PLV2000或PLV5000為修飾材料，包載多西他賽-油酸前藥。制備的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的載藥量約為23%，與包載多西他賽的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體相比（5%），載藥量得到了顯著提高，且具有更好的膠體穩(wěn)定性，更優(yōu)良的緩控釋效果。藥動學實驗證明基于core-match機理的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體能顯著提高多西他賽的口服生物利用度，穩(wěn)定性好，安全性高，適于口服給藥，有較大的市場應用前景。
【IPC分類】A61K47/48, A61P35/00, A61K47/10, C07D305/14, A61K47/12, A61K31/337, A61K47/14, A61K9/127
【公開號】CN105541762
【申請?zhí)枴緾N201610035597
【發(fā)明人】何仲貴, 孫進, 孫丙軍, 羅聰, 李琳
【申請人】沈陽藥科大學
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月19日