用于正烷烴重組生物合成的方法和組合物的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于正燒炫重組生物合成的方法和組合物
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年07月09日和發(fā)明名稱(chēng)為"用于正焼姪重組生物合成的 方法和組合物"的201080031073. 7號(hào)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 巧關(guān)申請(qǐng)的簾叉引巧
[0003] 本申請(qǐng)要求在先的2009年7月9日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)61/224, 463號(hào)，2009 年7月27日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)61/228,937號(hào)和2010年4月13日提交的美國(guó)發(fā)明 專(zhuān)利申請(qǐng)12/759, 657號(hào)的優(yōu)先權(quán)，其公開(kāi)納入本發(fā)明作為參考。
技術(shù)領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明涉及賦予異養(yǎng)或光合自養(yǎng)宿主焼姪產(chǎn)生性能的方法，W使得修飾后的宿主 可W被用于生物焼姪化ioalkane)的商業(yè)生產(chǎn)。
【背景技術(shù)】
[0005] 許多現(xiàn)有的光合自養(yǎng)生物（即，植物、藻類(lèi)和光合細(xì)菌）不適合工業(yè)的生物工藝， 且因此沒(méi)有顯現(xiàn)出商業(yè)上的可行性。相比工業(yè)化異養(yǎng)生物如大腸桿菌（20分鐘），該樣的生 物通常具有較長(zhǎng)的倍增時(shí)間（3-72小時(shí)），反映了低的總生產(chǎn)率。雖然高效生物合成生產(chǎn)燃 料的渴求已導(dǎo)致開(kāi)發(fā)出產(chǎn)生脂肪酸的烷基醋的光合微生物，但仍然存在對(duì)使用光合生物產(chǎn) 生姪如焼姪的方法的需求。
[0006] 發(fā)明概沐
[0007] 本發(fā)明在特定實(shí)施方式中提供了包含選自AAR和ADM酶的編碼序列、作為該些序 列的密碼子優(yōu)化變體的核酸序列及相關(guān)核酸序列和片段所組成的組的核酸序列或由其組 成的分離的多核巧酸。
[0008] AAR酶是指具有SYNP(X7942_1594蛋白（SEQ ID NO ;6)或其同源物的氨基酸序列 的酶，其中SYNPCC7942_1594同源物是其BLAST比對(duì)（i)覆蓋>90%的SYNPCC7942_1594長(zhǎng) 度，（ii)覆蓋>90%匹配蛋白質(zhì)長(zhǎng)度，和（iii)與SYNPCC7942_1594具有乂0%的同一性（當(dāng) 最佳地使用本發(fā)明提供的參數(shù)優(yōu)化比對(duì)時(shí)），并保持SYNPCC7942_1594的功能活性（即將醜 基-ACP(ACP=醜基載體蛋白）轉(zhuǎn)化為焼酵）的蛋白質(zhì)。ADM酶是指具有SYNPCC7942_1593 蛋白（SEQ ID NO ;8)或其同源物的氨基酸序列的酶，其中SYNPCC7942_1593同源物定義為 其氨基酸序列比對(duì)（i)覆蓋>90%的SYNPCC7942_1593長(zhǎng)度，（ii)覆蓋>90%匹配蛋白長(zhǎng) 度，和（iii)與SYNPCC7942_1593具有乂0%的同一性（當(dāng)最佳地使用本發(fā)明提供的參數(shù)比 對(duì)時(shí)），并保持SYNPCC7942_1593的功能活性（即將n-焼酵轉(zhuǎn)化為（n-1)-焼姪）的蛋白 質(zhì)。示例性的AAR和ADM酶分別列于表1和表2中。編碼AAR或ADM酶的基因在本文中分 別被稱(chēng)為AAR基因（aar)或ADM基因（adm)。
[0009] BLAS化優(yōu)選的參數(shù)為；期望值10 ;(默認(rèn)）；過(guò)濾器：無(wú)；開(kāi)放空位罰分（Cost to open a gap) ;11(默認(rèn)）；擴(kuò)展空位罰分（Cost to extend a gap) ;1(默認(rèn)）；最大比對(duì)： 1〇〇(默認(rèn)）；字段大小；11 (默認(rèn)）；描述編號(hào)；1〇〇(默認(rèn)）；罰分矩陣龍L0WSUM62。
[0010] 雖然申請(qǐng)人在本申請(qǐng)中提及焼酵脫駿單加氧酶，但申請(qǐng)人該樣做并非意圖局限于 任何特定的反應(yīng)機(jī)制，除非明確提出。例如，SYNPCC7942_1593或任何其他ADM基因編碼的 酶是否實(shí)現(xiàn)脫撰酶或脫駿反應(yīng)不影響發(fā)明人的該發(fā)明的效用，除非本文中明確給出了相反 的表不。
[0011] 本發(fā)明還提供了包含選自由表1和表2中所列序列及相關(guān)多膚序列、片段和融合 體組成的組的多膚序列或由該多膚序列組成的分離的多膚。特異性結(jié)合本發(fā)明的分離的多 膚的抗體也被包括在本發(fā)明中。
[001引本發(fā)明也提供了用于在缺乏AAR和ADM催化活性的宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼AAR和 ADM的異源核酸序列（從而賦予該宿主細(xì)胞產(chǎn)生正焼姪（n-a化ane)的能力）的方法，或用 于在含有天然AAR和/或ADM活性的宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼AAR和ADM的核酸（從而增強(qiáng)宿 主細(xì)胞產(chǎn)生正焼姪的能力）的方法。
[0013] 此外，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明描述的AAR和ADM基因、蛋白和宿主細(xì)胞生產(chǎn)感興 趣的碳基產(chǎn)物的方法。例如，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)姪類(lèi)的方法，包括： (i) 在培養(yǎng)基中培養(yǎng)工程藍(lán)細(xì)菌，其中所述的工程藍(lán)細(xì)菌包含重組AAR酶和重組ADM酶；和 (ii) 使所述工程藍(lán)細(xì)菌暴露于光和二氧化碳，其中所述暴露導(dǎo)致所述工程藍(lán)細(xì)菌將所述二 氧化碳轉(zhuǎn)化為正焼姪，其中至少一種所述正焼姪選自由正十H焼、正十四焼、正十五焼、正 十六焼和正十走焼組成的組，其中產(chǎn)生的所述正焼姪的量在0. 1%到5%細(xì)胞干重之間，并 且至少為由在相同條件下培養(yǎng)的、但缺乏所述重組AAD酶和ADM酶的而其它方面相同的藍(lán) 細(xì)菌所產(chǎn)生量的兩倍。
[0014] 在相關(guān)的實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的正焼姪的量為至少0. !%、0. 2%、0. 3%、 0. 4%、0. 5%、0. 6%、0. 7%、0. 8%、0. 9%或1% DCW，并且至少為由在相同條件下培養(yǎng)的、 缺乏所述重組AAD酶和ADM酶的而其它方面相同的藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的量的兩倍。
[0015] 在相關(guān)的實(shí)施方式中，至少一種所述重組酶與所述工程藍(lán)細(xì)菌異源。在另一個(gè)實(shí) 施方式中，所述藍(lán)細(xì)菌在沒(méi)有一種或兩種重組酶的表達(dá)時(shí)不合成焼姪。在另一個(gè)實(shí)施方式 中，至少一種所述重組AAR或ADM酶不是與所述工程藍(lán)細(xì)菌異源的。
[0016] 在該方法的另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌還產(chǎn)生至少一種正帰姪或 正焼醇。在再另一個(gè)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生至少一種選自由正十五帰、正十走帰和 1-十八醇組成的組的正帰姪或正焼醇。在相關(guān)實(shí)施方式中，所述正焼姪主要包括正十走 焼、正十五焼或其組合。在相關(guān)實(shí)施方式中，產(chǎn)生了比所有其他正焼姪產(chǎn)物之和更多的正 十走焼和/或正十五焼。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生了比工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn) 生的任何其他正焼姪或正帰姪更多的正十走焼和/或正十五焼。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方 式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的至少一種正十五帰選自由順式-3-十走帰和順式-4-十五 帰組成的組。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的至少一種正十走帰選 自由順式-4-十五帰、順式-6-十走帰、順式-8-十走帰、順式-9-十走帰和順式，順 式-十走-二-帰組成的組。
[0017] 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供了從所述工程藍(lán)細(xì)菌或所述培養(yǎng)基中 分離至少一種正焼姪、正帰姪或正焼醇的步驟。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌在 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌在光生物反應(yīng)器中培養(yǎng)。
[0018] 在另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，AAR和/或ADM酶由質(zhì)粒編碼。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施 方式中，AAR和/或ADM酶由整合入所述工程藍(lán)細(xì)菌基因組中的重組基因編碼。在再另一 個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，AAR和/或ADM酶由在所述工程藍(lán)細(xì)菌上W多個(gè)拷貝存在的基因編碼。 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和/或ADM酶由作為操縱子的部分的基因編碼，其中 所述基因的表達(dá)由單一啟動(dòng)子控制。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和/或ADM酶由 各自的啟動(dòng)子控制下獨(dú)立表達(dá)的基因編碼。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌中重 組AAR和/或ADM酶的表達(dá)受到選自由cl啟動(dòng)子、cpcB啟動(dòng)子、lacl-trc啟動(dòng)子、EM7啟 動(dòng)子、aphll啟動(dòng)子、nirA啟動(dòng)子和nir07啟動(dòng)子（本發(fā)明中稱(chēng)為"P(nir07)")組成的組 的啟動(dòng)子控制。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，酶由作為操縱子的部分的基因編碼，其中所述 基因的表達(dá)由一個(gè)或多個(gè)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子控制。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，至少一個(gè)啟動(dòng) 子是尿素抑制、硝酸鹽誘導(dǎo)的啟動(dòng)子。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，尿素抑制、硝酸鹽誘導(dǎo) 的啟動(dòng)子是nirA型啟動(dòng)子。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，nirA型啟動(dòng)子是P(nir07) (SEQ ID NO ; 24)。
[0019] 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，被工程化W表達(dá)重組AAR和/或ADM酶的藍(lán)細(xì)菌種 在不存在所述重組AAR和/或ADM酶時(shí)產(chǎn)生少于約0. 01 % DCW的正十走焼或正十五焼， 0. 01% DCW大致對(duì)應(yīng)于用本文描述的氣相色譜/火焰電離檢測(cè)方法檢測(cè)正十走焼和正十五 焼的檢測(cè)限。在另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，該方法的工程藍(lán)細(xì)菌是嗜熱的。在再另一個(gè)相關(guān) 實(shí)施方式中，該方法的工程藍(lán)細(xì)菌選自由工程化的聚球藻（Synechococcus)PCC7002和工 程化的細(xì)長(zhǎng)嗜熱聚球藻（Thermosynechococcus elonga1:us)BP-l組成的組。
[0020] 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和/或ADM酶分別選自由表1和表2中所 列酶的組。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR酶選自由SYNPCC7942_1594、tlll312、 PMT9312_0533和cce_1430組成的組。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組ADM酶選自由 SYNPCC7942_1593、tlll313、PMT9312_0532 和 cce_0778 組成的組。
[0021] 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和ADM酶分別具有SEQ ID NO ;10和SEQ ID NO; 12的氨基酸序列。在特定實(shí)施方式中，重組AAR和ADM酶分別由SEQ ID NO ;9和11編 碼。在再另外的相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和ADM酶分別由SEQ ID NO ;26和28,或分別由 SEQ ID NO ;30和31編碼，并分別具有SEQ ID NO ;27和28的氨基酸序列。在特定實(shí)施方 式中，重組AAR和ADM酶分別由SEQ ID N0;1和3編碼，并分別具有SEQ ID N0;2和4的氨 基酸序列。在再另外的實(shí)施方式中，重組AAR和ADM酶分別由SEQ ID N0;5和7編碼，并分 別具有SEQ ID NO ;6和8的氨基酸序列。
[0022] 在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，該方法包括在抗生素的存在下培養(yǎng)工程藍(lán)細(xì)菌，其 中所述抗生素對(duì)于編碼AAR和/或ADM酶的重組基因的存在進(jìn)行選擇。在特定實(shí)施方式 中，抗生素是壯觀霉素或卡那霉素。在相關(guān)實(shí)施方式中，培養(yǎng)基中壯觀霉素的量在100到 700y g/ml之間，如可W加入100、200、300、400、500、600、或700113/1111的壯觀霉素到培養(yǎng) 基中。在特定實(shí)施方式中，加入的壯觀霉素的量約為600 y g/ml，而工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的正焼 姪的量為至少3%、4%或5% DCW。
[0023] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，生產(chǎn)姪的方法包括在用于一種或兩種酶的外源底物存在下 培養(yǎng)表達(dá)重組AAR和/或ADM酶的工程藍(lán)細(xì)菌。在相關(guān)實(shí)施方式中，底物選自由醜基-ACP、 醜基-CoA和脂肪酵組成的組。在另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，外源脂肪醇或脂肪醋或其他間接 底物可W被加入并被藍(lán)細(xì)菌轉(zhuǎn)化為醜基-ACP或醜基-CoA。
[0024] 在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含由本發(fā)明描述的任何重組生物合成方 法產(chǎn)生的正焼姪的組合物。在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含由本發(fā)明描述的任 何重組生物合成方法產(chǎn)生的正帰姪或正焼醇的組合物。
[0025] 在特定實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生正焼姪的工程化宿主細(xì)胞，其中所述 細(xì)胞包含一種或多種選自由醜基-CoA還原酶活性、醜基-ACP還原酶活性、焼酵脫駿單加氧 酶活性和電子供體活性組成的組的重組蛋白活性。在相關(guān)實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞包含重組 醜基-ACP還原酶活性、重組焼酵脫駿單加氧酶活性和重組電子供體活性。在其他實(shí)施方式 中，宿主細(xì)胞包含重組醜基-ACP還原酶活性和重組焼酵脫駿單加氧酶活性。在特定實(shí)施方 式中，電子供體活性是鐵氧化還原蛋白。在特定的相關(guān)實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞能進(jìn)行光合作 用。在再其他的相關(guān)實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞是藍(lán)細(xì)菌。在再其他實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞是革 蘭氏陰性細(xì)菌、革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌或酵母菌。
[0026] 在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含選自由W下序列組成的組的核酸序列或由 該核酸序列組成的分離的或重組的多核巧酸；(a)SEQ ID N0:l、3、5、7、9、ll、13、14、30或 31 ;(b)作為SEQ ID No ;1、3、5、7、9、11、13、14、30或31的簡(jiǎn)并變體的核酸序列；（c)與 SEQ ID 齡；1、3、5、7、9、11、13、14、30或31至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至 少98%、至少99% %、至少99. 1 %、至少99. 2%、至少99. 3%、至少99. 4%、至少99. 5%、至 少99. 6%、至少99. 7%、至少99. 8%或至少99. 9%相同的核酸序列；（d)編碼具有SEQ ID ^;2、4、6、8、10、12、27或29的氨基酸序列的多膚的核酸序列；（6)編碼與569 10^;2、 4、6、8、10、12、27 或 39 至少 50%、至少 60%、至少 70%、至少 80%、至少 90%、至少 95%、 至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99. 1 %、至少99. 2%、至少99. 3%、至少 99. 4%、至少99. 5%、至少99. 6%、至少99. 7%、至少99. 8%或至少99. 9%相同的多膚的核 酸序列；和（f)與SEQ ID齡；1、3、5、7、9、11、13、14、30或31在嚴(yán)格條件下雜交的核酸序 列。在相關(guān)實(shí)施方式中，該核酸序列編碼具有醜基-ACP還原酶活性或焼酵脫駿單加氧酶活 性的多膚。
[0027] 在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了具有焼酵脫駿單加氧酶活性的分離的可溶 性多膚，其中在特定的相關(guān)實(shí)施方式中，多膚具有表2中所列蛋白質(zhì)之一的氨基酸序列。在 相關(guān)實(shí)施方式中，多膚具有與SEQ ID NO ;4、8、12或29相同的或至少95%相同的氨基酸序 列。
[002引在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了在體外從醜基-ACP合成正焼姪的方法，包 括；使醜基-ACP與重組醜基-ACP還原酶接觸，其中所述醜基-ACP還原酶將所述醜基-ACP 轉(zhuǎn)化為正焼酵；然后在電子供體存在下將所述正焼酵與重組的可溶性焼酵脫駿單加氧酶接 觸，其中所述焼酵脫駿單加氧酶將所述n-焼酵轉(zhuǎn)化為（n-1)焼姪。在相關(guān)實(shí)施方式中，本 發(fā)明提供了在體外從正焼酵合成正焼姪的方法，包括；在電子供體存在下將所述正焼酵與 重組的可溶性焼酵脫駿單加氧酶接觸，其中所述焼酵脫駿單加氧酶將所述n-焼酵轉(zhuǎn)化為 (n-1)焼姪。在特定的相關(guān)實(shí)施方式中，電子供體是鐵氧化還原蛋白。
[0029] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含重組AAR和ADM酶的工程藍(lán)細(xì)菌細(xì)胞，其 中所述細(xì)胞包含0. 1 %到5%之間、1 %到5%之間或2%到5%之間細(xì)胞干重的正焼姪，其中 所述正焼姪主要是正十五焼、正十走焼或其組合。
[0030] 在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了本發(fā)明公開(kāi)的表達(dá)和/或轉(zhuǎn)化載體之一。在其 他相關(guān)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明公開(kāi)的表達(dá)和/或轉(zhuǎn)化載體之一轉(zhuǎn)化微生 物，如藍(lán)細(xì)菌的方法。
[003。 在生產(chǎn)姪類(lèi)的方法的再另一個(gè)實(shí)施方式中，AAR和ADM酶分別與SEQ ID NO ;6和 SEQ ID NO ;8至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同。在相 關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生正十五焼和正十走焼，其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加正 十走焼的質(zhì)量百分比至少為20%。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生正十五焼 和正十走焼，其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加正十走焼的質(zhì)量百分比小于30%。在另一個(gè) 相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生正十五焼和正十走焼，其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加 正十走焼的質(zhì)量百分比在20%和30%之間。
[003引在生產(chǎn)姪類(lèi)的方法的再另一個(gè)實(shí)施方式中，AAR和ADM酶分別與SEQ ID NO ;10和 SEQ ID NO ;12至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同。在相 關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生正十五焼和正十走焼，其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加正 十走焼的質(zhì)量百分比至少為50%。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，正十五焼相對(duì)于正十五焼 加正十走焼的質(zhì)量百分比小于60%。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，正十五焼相對(duì)于正十五 焼加正十走焼的質(zhì)量百分比在50%和60%之間。
[0033] 在生產(chǎn)姪類(lèi)的方法的再另一個(gè)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌包含至少兩種不同的重組 ADM酶和至少兩種不同的重組AAR酶。在相關(guān)實(shí)施方式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌包含至少一種編 碼分別與SEQ ID NO ;27和SEQ ID NO ;29至少95%相同的AAR和ADM酶的操縱子。在再 另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌包含至少一種編碼分別與SEQ ID NO ;10和SEQ ID NO ; 12至少95 %相同的AAR和ADM酶的操縱子。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所述AAR和 ADM酶的表達(dá)受誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如P (nir07)啟動(dòng)子的控制。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所 述重組ADM酶和AAR酶是染色體整合的。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，所述工程藍(lán)細(xì)菌在 誘導(dǎo)物的存在下產(chǎn)生正焼姪，且其中至少95%的所述正焼姪為正十五焼和正十走焼，而且 其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加正十走焼的質(zhì)量百分比為至少80%。
[0034] 在生產(chǎn)姪類(lèi)的方法的再另一個(gè)實(shí)施方式中，工程藍(lán)細(xì)菌包含分別與SEQ ID NO ; 10 和SEQ ID NO; 12至少95 %相同的重組AAR和ADM酶。在相關(guān)實(shí)施方式中，重組AAR和ADM 酶在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如P(nir07)啟動(dòng)子的控制之下。在再另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方式中，工程藍(lán) 細(xì)菌在誘導(dǎo)物的存在下產(chǎn)生至少0. 5 % DCW的正焼姪，其中所述正焼姪包括正十五焼和正 十走焼，且其中正十五焼相對(duì)于正十五焼加正十走焼的質(zhì)量百分比為至少50%。
[00巧]在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種調(diào)節(jié)工程藍(lán)細(xì)菌中正十五焼和正十走 焼的相對(duì)量的方法，包括控制所述工程藍(lán)細(xì)菌中一種或多種重組AAR和/或ADM酶的表達(dá)， 其中所述AAR和/或ADM酶與SEQ ID N0:10、12、27或29的AAR和ADM酶至少95%相同或 者相同。
[0036] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種工程藍(lán)細(xì)菌，其中所述工程藍(lán)細(xì)菌包含 編碼AAR酶、ADM酶或該兩種酶的一個(gè)或多個(gè)重組基因，其中至少一個(gè)所述重組基因在硝酸 鹽誘導(dǎo)啟動(dòng)子的控制之下。
[0037] 在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了重組基因，其中所述基因包含用于控制所 述基因的表達(dá)的啟動(dòng)子，其中所述啟動(dòng)子包含與SEQ ID NO ;24相同的連續(xù)核酸序列。
[0038] 在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含啟動(dòng)子的分離的DNA分子，其中所述 啟動(dòng)子包含與SEQ ID NO ;24相同的連續(xù)核酸序列。
[0039] 在再另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了選自由JCC1469、JCC1281、JCC1683、 JCC1685、JCC1076、JCC1170、JCC1221、JCC879 和 JCC1084t 組成的組的工程菌株。
[0040] 本發(fā)明的該些W及其他實(shí)施方式在此在附圖、說(shuō)明、實(shí)施例和權(quán)利要求中進(jìn)一步 描述。
[0041] 特別地，本發(fā)明涉及W下各項(xiàng)：
[0042] 1. 一種生產(chǎn)姪類(lèi)的方法，包括：
[0043] (i)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)工程藍(lán)細(xì)菌，其中所述的工程藍(lán)細(xì)菌包含重組醜基-ACP還原 酶和重組焼酵脫駿單加氧酶；和
[0044] (ii)使所述工程藍(lán)細(xì)菌暴露于光和二氧化碳，其中所述的暴露導(dǎo)致所述工程藍(lán)細(xì) 菌將所述二氧化碳轉(zhuǎn)化為正焼姪，其中至少一種所述正焼姪選自由正十H焼、正十四焼、正