專利名稱：益生菌和口服耐受性的制作方法
背景技術(shù)：
嬰兒的牛奶變態(tài)反應(yīng)或乳超敏反應(yīng)十分常見，通常嬰兒長(zhǎng)到2或3歲時(shí)該反應(yīng)就會(huì)消失，但偶爾也有終身均會(huì)過(guò)敏的。這是嬰兒中的一種最常見的疾病，在足月嬰兒中出現(xiàn)的頻率為0.5-3％，在早產(chǎn)嬰兒中的頻率為3-5％。這種變態(tài)反應(yīng)可導(dǎo)致皮疹、蕁麻疹、嘴部紅腫、流鼻涕、打噴嚏、腹痛、腹瀉、嘔吐、過(guò)敏或更常見地消化道問(wèn)題，在某些情況下還可能與嬰兒猝死有關(guān)。
乳超敏反應(yīng)應(yīng)與乳糖不耐性(先天缺乏乳糖酶導(dǎo)致對(duì)乳不耐受)相區(qū)分。大多數(shù)情況下，牛奶變態(tài)反應(yīng)由α-乳球蛋白及β-乳球蛋白變應(yīng)原造成。酪蛋白和/或白蛋白也是牛奶中潛在的致過(guò)敏乳蛋白，也可導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。當(dāng)免疫系統(tǒng)針對(duì)上述蛋白產(chǎn)生超敏反應(yīng)時(shí)，形成變態(tài)反應(yīng)。此過(guò)程(致敏)的第一步，免疫系統(tǒng)首先把這些蛋白當(dāng)作是一種進(jìn)入身體的抗原，這將引起由特異抗體或特異致敏的T淋巴細(xì)胞組成的免疫應(yīng)答。第二步，如果抗體是IgE抗體，其將通過(guò)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，即變態(tài)反應(yīng)來(lái)應(yīng)答變應(yīng)原的存在。此種類型的變態(tài)反應(yīng)的機(jī)制可解釋如下IgE抗體出現(xiàn)于細(xì)胞(包括循環(huán)嗜堿性粒細(xì)胞)表面。當(dāng)變應(yīng)原和IgE發(fā)生相互作用時(shí)，呈遞IgE/變應(yīng)原對(duì)的細(xì)胞產(chǎn)生并釋放包括組胺在內(nèi)的化學(xué)介質(zhì)。這種現(xiàn)象導(dǎo)致病理學(xué)效應(yīng)，如局部或系統(tǒng)血管擴(kuò)張。通常，當(dāng)嬰兒首次嘗試食物的多樣化而第一次飲用牛奶時(shí)，這種乳超敏反應(yīng)就會(huì)出現(xiàn)。
Oy aboatech AB的WO01/97822公開了使用益生菌，如干酪乳桿菌鼠李糖亞種(Lactobacillus casei ssp.rhamnosus)來(lái)制備可以在高風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生特應(yīng)性疾病的嬰兒中用于主要預(yù)防特應(yīng)性疾病的組合物。這是為高風(fēng)險(xiǎn)過(guò)敏群體這一特殊群體進(jìn)行過(guò)敏預(yù)防的一種嘗試。
WO01/89541(Compagnie Gervais Danone)公開了在口服組合物中使用干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)可增加特異針對(duì)致病微生物的免疫性。其尤其旨在用于影響呼吸系統(tǒng)的病原體，同時(shí)該組合物可以是食品或是食品增補(bǔ)劑。
然而，仍然需要手段來(lái)預(yù)防特應(yīng)性疾病，如牛奶變態(tài)反應(yīng)和/或維持嬰兒自身后天獲得的或是在上述手段的幫助下獲得的口服耐受性。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明涉及至少包含可以維持口服耐受現(xiàn)象的物質(zhì)的食品，以及包含可以促進(jìn)和維持口服耐受現(xiàn)象的物質(zhì)的食品。
本發(fā)明涉及不旨在用于變應(yīng)性群體的食品。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示小鼠(常規(guī)的(CV)，單相關(guān)的(monoassociated)和無(wú)菌的(GF))口服乳清蛋白后28天處死(A)或50天處死(B)，小鼠血清中BLG-特異性抗體(IgE，IgG1和IgG2a)的效價(jià)降低。
圖2顯示體外脾細(xì)胞的IFN-γ、IL-10、IL-5和IL-4產(chǎn)生。給小鼠(常規(guī)的(CV)，單相關(guān)的和無(wú)菌的(GF))喂食乳清蛋白(黑色柱)或鹽水(無(wú)色柱)，之后皮下注射于Al(OH)3中的100μg BLG及100μg OVA，管飼后28天處死(A)或50天處死(B)。在第50天處死的小鼠在第21天和第35天額外地又接受兩次注射。
發(fā)明詳述在本發(fā)明上下文中，“食品”這一術(shù)語(yǔ)旨在包括任何可食用的物質(zhì)。因此，它可以是一種可供人食用的產(chǎn)品，但是，該術(shù)語(yǔ)同樣也包括可被動(dòng)物食用的產(chǎn)品，所述動(dòng)物如寵物，如狗、貓、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、鳥(如鸚鵡)、爬行動(dòng)物和魚(如，金魚)等。此外，該術(shù)語(yǔ)也包括可由其它馴養(yǎng)的動(dòng)物，如家畜，如牛、馬、豬、綿羊、山羊、水牛、駱駝等等食用的產(chǎn)品。該術(shù)語(yǔ)也旨在包括任何嬰兒配方食品、幼兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品(infant and baby follow-up formula)等等。
當(dāng)談到牛奶變態(tài)反應(yīng)或牛奶超敏反應(yīng)時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解我們意在指任何食物變態(tài)反應(yīng)或超敏反應(yīng)、以及更一般地任何特應(yīng)性疾病。我們的討論主要圍繞此變態(tài)反應(yīng)展開，是因?yàn)榇蠖鄶?shù)情況下嬰兒接觸到的第一種食品是牛奶；然而，我們并不旨在將本專利申請(qǐng)的范圍限于此疾病。
令人吃驚的是，我們已發(fā)現(xiàn)加入到食品中的益生菌能夠用作佐劑來(lái)促進(jìn)和維持口服耐受性(oral tolerance)。
在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供至少包含可以促進(jìn)對(duì)牛奶蛋白的口服耐受現(xiàn)象的物質(zhì)的食品。令人吃驚的是，我們發(fā)現(xiàn)乳桿菌屬(lactobacillus)的乳酸細(xì)菌株，特別是副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)菌株可促進(jìn)口服耐受的誘導(dǎo)，且特別適用于促進(jìn)對(duì)牛奶蛋白的口服耐受性。
在優(yōu)選實(shí)施方式中，所用的乳桿菌是副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)CNCM I-2116。已經(jīng)證實(shí)這些微生物具有例如以下特性革蘭氏陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶陰性，來(lái)自精氨酸的NH3陰性，CO2產(chǎn)生陰性。它們產(chǎn)生L(+)乳酸，并且能在濃度高達(dá)0.4％的膽汁鹽中生長(zhǎng)。
根據(jù)本發(fā)明，為了促進(jìn)對(duì)抗原的口服耐受，可以將所用乳酸細(xì)菌尤其添加入從出生至向營(yíng)養(yǎng)中引入抗原(如牛奶抗原)時(shí)使用的嬰兒配方食品中，當(dāng)作一種佐劑或是增補(bǔ)劑。由于這種乳酸細(xì)菌不是嬰兒腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群，因此應(yīng)當(dāng)將大量的此種微生物加入到這種配方食品中，如105-108cfu/mL復(fù)水配方食品(reconstituted formulae)或cfu/g食品，更優(yōu)選105-107，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中106cfu/ml復(fù)水配方食品。因此，可以每天攝入幾次該乳酸細(xì)菌，從而導(dǎo)致這種微生物在腸道微生物菌群中的量持續(xù)地足夠有效實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。
上述屬于乳桿菌屬的乳酸細(xì)菌，尤其是副干酪乳桿菌，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中為副干酪乳桿菌CNCM I-2116，也可添加到寵物食品中以促進(jìn)口服耐受性。其優(yōu)選添加到塊狀或油炸食品中，并且也可以添加到濕食品，如罐頭食品中。還可以添加到寵物用的液體配方食品中，如小貓或小狗用的牛奶等等，此外，還能添加到寵物食用的咀嚼型食品中。對(duì)于非濕食品而言，寵物食品中此微生物的補(bǔ)充量可在104-108cfu/g之間，對(duì)于濕食品在105-108cfu/g之間，對(duì)于液體食品在105-108cfu/g之間，這些量并非是限制性的。
我們進(jìn)一步研究了副干酪乳桿菌CNCM I-2116的蛋白水解活性及其在降解牛奶中最重要的變應(yīng)原β-乳球蛋白時(shí)的潛在作用。
基于功能，可將乳酸細(xì)菌的蛋白水解系統(tǒng)分為3組i)蛋白酶將全蛋白分解為肽；ii)肽酶降解肽；和iii)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)運(yùn)輸降解產(chǎn)物穿過(guò)細(xì)胞膜。
蛋白酶位于細(xì)菌細(xì)胞外，而多數(shù)的肽酶位于細(xì)胞質(zhì)中。在本研究中，來(lái)自胞質(zhì)提取物的肽酶被用于降解天然的β-乳球蛋白(BLG)及其胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶解(tryptic-chymotriptic)(TC)肽。與副干酪乳桿菌相關(guān)的酶主要水解酸性TC肽、輕微水解堿性肽且根本不水解BLG。由于BLG的TC水解產(chǎn)物被證實(shí)主要由酸性肽組成(62％)，因此，副干酪乳桿菌酶對(duì)它們的降解是十分有意義的。然而，這種蛋白水解活力無(wú)疑限于氨肽酶或二肽酶，因?yàn)橥ㄟ^(guò)大小排阻層析發(fā)現(xiàn)，由副干酪乳桿菌的降解作用釋放的肽，分子量主要小于500Da。
氨肽酶和二肽酶活性也降解堿性級(jí)分，并且我們還觀察到在副干酪乳桿菌降解后的此級(jí)分中存在分子量大于2000Da的肽。雖然我們并不想被理論所局限，但肽之間的強(qiáng)疏水相互作用能夠解釋這種觀測(cè)現(xiàn)象，因?yàn)閴A性TC肽已通過(guò)C18層析被證實(shí)具有高疏水性。
副干酪乳桿菌提取物對(duì)酸性TC肽的降解導(dǎo)致具有免疫抑制性的肽，該作用對(duì)于口服耐受性的誘導(dǎo)是必需的。
已經(jīng)充分表征的耐受性誘導(dǎo)機(jī)制包括克隆缺失，克隆無(wú)反應(yīng)性和通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而致的主動(dòng)抑制。由于1-型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr-1)能夠產(chǎn)生高水平的免疫抑制性細(xì)胞因子如IL-10等，因此，其具有低增殖能力并能抑制幼稚和記憶T輔助細(xì)胞1-型和2-型應(yīng)答。已發(fā)現(xiàn)IL-10可以下調(diào)CD54、CD80和CD86的表達(dá)，而這些分子是T細(xì)胞活化時(shí)的重要共刺激分子。有趣的是，已發(fā)現(xiàn)IL-10會(huì)響應(yīng)副干酪乳桿菌降解的酸性肽而出現(xiàn)上調(diào)，表明這些肽可以通過(guò)主動(dòng)抑制機(jī)制誘導(dǎo)針對(duì)BLG的口服耐受。
副干酪乳桿菌降解的酸性肽對(duì)口服耐受的這種潛在有益作用(在未接觸過(guò)BLG的小鼠中得以強(qiáng)調(diào))被BLG致敏小鼠(BLG耐受性小鼠)中獲得結(jié)果所加強(qiáng)。使用來(lái)自BLG致敏小鼠的脾細(xì)胞也觀察到對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用，表明降解的肽確實(shí)具有誘導(dǎo)、維持和強(qiáng)化T細(xì)胞的低應(yīng)答性的能力。
副干酪乳桿菌CNCM I-2116通過(guò)其蛋白水解活性和釋放生物活性肽來(lái)刺激調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。我們還證實(shí)了副干酪乳桿菌的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物具有免疫抑制性作用。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈的提示諸如副干酪乳桿菌CNCM I-2116的細(xì)菌，可直接通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用或是通過(guò)降解抗原及死后釋放細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物，誘導(dǎo)免疫抑制性活力。
在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供至少包含可以維持口服耐受性現(xiàn)象(如對(duì)于牛奶蛋白的口服耐受)的物質(zhì)的食品。實(shí)際上，我們已發(fā)現(xiàn)雙岐桿菌屬(Bifidobacterium)菌株對(duì)口服耐受性的維持具有特殊效用。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是把雙岐桿菌當(dāng)作一種佐劑或增補(bǔ)劑添加到食物中，特別是對(duì)于那些已經(jīng)被誘導(dǎo)了口服耐受性的群體。特別地，這些群體可以是乳汁哺乳的嬰兒事實(shí)上，母親食用的部分變應(yīng)原可通過(guò)母乳傳遞給嬰兒；在這樣的群體中，口服耐受性已經(jīng)通過(guò)母乳哺乳得到了促進(jìn)，并且這種耐受性可以通過(guò)給予嬰兒有效量的具有上述性質(zhì)的雙岐桿菌來(lái)維持。
眾所周知，一些嬰兒在首次使用牛奶時(shí)不會(huì)出現(xiàn)牛奶超敏反應(yīng)，然而，當(dāng)他們?cè)诶?個(gè)月大取食其它食品成分時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一些食品超敏反應(yīng)。雖然我們不想局限于理論，但我們認(rèn)為在這些嬰兒中誘導(dǎo)的口服耐受性并未得到維持或是適當(dāng)?shù)木S持。所以，本發(fā)明的一個(gè)目的是通過(guò)添加具有維持以前已經(jīng)誘導(dǎo)的口服耐受性的能力的雙岐桿菌至食物中，維持已經(jīng)誘導(dǎo)的口服耐受性。
在此過(guò)程開始時(shí)給予嬰兒或兒童這種雙岐桿菌可能是有用的。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌(Bifidobacteriumlactis)，在最佳實(shí)施方式中可以是熟知的Bb12菌株ATCC 27536，它能夠從Hansen(Chr.Hansen A/S，10-12 Boege Alle，P.O.Box 407，DK-2970Hoersholm，Danemark)得到。由于命名術(shù)語(yǔ)被修改過(guò)多次，Bb12在文獻(xiàn)和商品中也被當(dāng)作兩岐雙岐桿菌(B.bifidum)和B.animalis。
已證實(shí)此微生物具有例如如下特性革蘭氏陽(yáng)性，不運(yùn)動(dòng)、非產(chǎn)孢子的桿菌、抗胃腸道酸性和膽汁鹽。它們?yōu)檫^(guò)氧化氫酶陰性，僅產(chǎn)生L(+)乳酸而非其D(-)異構(gòu)體。它們能夠利用如下的碳水化合物核糖、蔗糖、D-葡萄糖、D-棉子糖、麥芽糖、蜜二糖、苦杏仁苷、和β-龍膽二糖。
這些微生物可以添加到任何類型的嬰兒、幼兒或兒童食品中，如麥乳精、嬰兒配方食品、較大嬰兒配方食品、幼兒谷類食品等等。有時(shí)，早至4月齡即可使嬰兒的營(yíng)養(yǎng)多樣化，并且，雙岐桿菌可添加到4個(gè)月及更大些兒童的嬰兒食品中。由于乳超敏反應(yīng)主要在2-3歲時(shí)消失，因此，這種為了維持口服耐受性而添加雙岐桿菌到嬰兒和幼兒食品中的操作，可以在4個(gè)月的嬰兒到3歲幼兒的每一食品中進(jìn)行。但是，這種補(bǔ)充也可在并非專門用于嬰兒或幼兒營(yíng)養(yǎng)而是作為他們營(yíng)養(yǎng)的一部分的食品中進(jìn)行，如牛奶、酸乳酪、凝乳、奶酪、發(fā)酵乳、基于乳的發(fā)酵品、冰淇淋、基于發(fā)酵的谷物的食品、或奶制品等。
添加到嬰兒食品、幼兒食品或食品中的微生物的量一般應(yīng)為105-108cfu每mL復(fù)水配方食品或cfu每克食品，優(yōu)選105-107，最優(yōu)選106。然而，這些量不應(yīng)理解為是限制性的，而應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)群體進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)節(jié)，如根據(jù)嬰兒或幼兒的體重和年齡，或是根據(jù)特定群體，諸如患有特定疾病的群體(如患有腸道疾病、急性腹瀉或炎性綜合癥等的嬰兒、幼兒或兒童)進(jìn)行調(diào)節(jié)。
上述的雙岐桿菌，尤其是乳酸雙岐桿菌，優(yōu)選乳酸雙岐桿菌Bb12ATCC 27536，也能添加到寵物食品中維持口服耐受性。優(yōu)選添加到塊狀或油炸食品中，并且也能添加到濕食品中，如罐頭食品。其還能夠添加到寵物食用的液體配方食品中，如給小貓或小狗等等的奶。此外，還能添加到寵物的咀嚼型食品中。對(duì)于非濕食品而言，給寵物食品補(bǔ)充的這種微生物的量可在104-108cfu/g之間，對(duì)于濕食品而言，可在105-108cfu/g之間，對(duì)于液體食品在105-108cfu/g之間，這些量均并非限制性的。
我們已證實(shí)乳酸雙岐桿菌Bb12的無(wú)細(xì)胞提取物水解BLG的胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶解肽，并由此減少IgE對(duì)它們的識(shí)別和增強(qiáng)它們?cè)隗w外對(duì)Th1細(xì)胞的刺激。酸性TC肽比堿性肽是更好的脾細(xì)胞增殖誘導(dǎo)劑。然而，當(dāng)用乳酸雙岐桿菌無(wú)細(xì)胞提取物進(jìn)一步水解后，酸性和堿性肽表現(xiàn)出相似的刺激效應(yīng)。這種刺激效應(yīng)在未接觸過(guò)BLG的小鼠中比在BLG耐受性小鼠中更為明顯。
蛋白質(zhì)，如BLG對(duì)蛋白酶的相對(duì)抗性，使得部分蛋白可以在消化后保持完整，從而使得它們具有潛在的高變應(yīng)原性。普遍接受的是蛋白質(zhì)的胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶水解可以降低蛋白的變應(yīng)原性。與此發(fā)現(xiàn)相符，我們發(fā)現(xiàn)IgE對(duì)BLG的胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶解肽的結(jié)合能力比對(duì)天然BLG的結(jié)合能力差。
雖然我們不想局限于理論中，但我們認(rèn)為這些具有潛在抗過(guò)敏作用的菌株的干預(yù)作用似乎在于，通過(guò)增強(qiáng)IFN-γ(一種與Th1細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子)的形成來(lái)調(diào)節(jié)促Th1/抗Th2應(yīng)答。IFN-γ是一種有效的免疫調(diào)節(jié)和炎性細(xì)胞因子，其在新生兒中以低水平存在，在對(duì)食品過(guò)敏的患者中缺乏。IFN-γ在食物過(guò)敏預(yù)防中起到至關(guān)重要的作用，其抑制Th2分化、降低IL-4水平，并由此抑制IgE的產(chǎn)生。我們發(fā)現(xiàn)單獨(dú)來(lái)自乳酸雙岐桿菌Bb12的無(wú)細(xì)胞提取物可以誘導(dǎo)脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈地提示，諸如乳酸雙岐桿菌Bb12的細(xì)菌可以在細(xì)胞裂解并釋放細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物到腸道內(nèi)后通過(guò)降解潛在的變應(yīng)原性蛋白或直接地增強(qiáng)Th1應(yīng)答。
除了上述提到的IFN-γ作用外，據(jù)報(bào)道，IFN-γ可增加跨腸道粘膜對(duì)完整抗原的吸收，提示乳酸雙岐桿菌Bb12對(duì)具有降低的針對(duì)奶蛋白的應(yīng)答性的個(gè)體有潛在的不利影響。然而，IFN-γ同樣也增強(qiáng)跨淋巴集結(jié)的抗原運(yùn)輸。由于淋巴集結(jié)是口服抗原暴露后分泌型IgA的形成位點(diǎn)，乳酸雙岐桿菌Bb12對(duì)IFN-γ產(chǎn)生的局部刺激可以通過(guò)免疫排斥機(jī)制，抑制潛在有害性食物抗原的滲透。與這種發(fā)現(xiàn)相符，當(dāng)嬰兒食用含有乳酸雙岐桿菌Bb12的較大嬰兒配方食品后，觀測(cè)到糞便中IgA的水平增加。
我們的結(jié)果表明，乳酸雙岐桿菌Bb12通過(guò)免疫偏離機(jī)制(可以增強(qiáng)促Th1/抗Th2細(xì)胞應(yīng)答)，并通過(guò)水解和免疫排斥潛在有害食物性抗原的機(jī)制，而表現(xiàn)出抗過(guò)敏的特性。我們研究了Bb12是否能夠在以前從未接觸過(guò)BLG的年幼小鼠(“幼稚” 小鼠)中誘導(dǎo)IFN-γ的形成。未接觸過(guò)BLG的小鼠的脾細(xì)胞，與通過(guò)喂食富含BLG的飼料而獲得耐受的小鼠的脾細(xì)胞相比，應(yīng)答乳酸雙岐桿菌降解的級(jí)分時(shí)，IFN-γ的產(chǎn)生更顯著，表明乳酸雙岐桿菌Bb12能維持在用奶瓶喂養(yǎng)的嬰兒和較大幼兒中的Th1應(yīng)答，從而平衡新生兒中被極化的Th2免疫。
第三方面，本發(fā)明提供包含可以促進(jìn)和維持口服耐受現(xiàn)象(如對(duì)牛奶蛋白)的物質(zhì)的食品。相應(yīng)地，食品可以包含乳桿菌和雙岐桿菌的聯(lián)合以同時(shí)促進(jìn)和維持口服耐受，特別是對(duì)牛奶的口服耐受。在優(yōu)選實(shí)施方案中，為了達(dá)到此期望的目的，該食品包含副干酪乳桿菌和乳酸雙岐桿菌。例如這種聯(lián)合可以包括副干酪乳桿菌CNCM I-2116和乳酸雙岐桿菌ATCC27536。這種促進(jìn)和維持口服耐受性的方式可以是一種或幾種乳桿菌與一種或幾種雙岐桿菌的聯(lián)合。如可以是副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)，鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)和乳酸雙岐桿菌(Bifidobacterium lactis)的聯(lián)合，隨攝入補(bǔ)充了這些微生物的食品的群體不同，乳桿菌和雙岐桿菌的比例是可變的。如對(duì)于從未接觸過(guò)牛奶的嬰兒群體，乳桿茵∶雙岐桿菌的比例可在10∶1和1∶1之間。對(duì)于以前已經(jīng)食用過(guò)牛奶(或任何其它變應(yīng)原或抗原)的嬰兒、幼兒或兒童的群體，乳桿菌∶雙岐桿菌的比例可在1∶10和1∶1之間。
當(dāng)1種以上的雙岐桿菌被添加到食品中時(shí)，1種雙岐桿菌與另一種的比例可從0.01到99.9％，并且這同樣適用于制品中有1種以上乳桿菌的情況。
本發(fā)明的微生物聯(lián)合可添加到本發(fā)明第一、二方面列舉的任何食品中，同樣也可添加到任何其它的食品中，如巧克力、巧克力粉、涂抹食品、糕點(diǎn)、果凍、果醬、餅干、零食、果汁、奶制品、谷類早餐食品以及更一般地嬰兒、幼兒或兒童所食用的任何食品，以及任何寵物食品。
根據(jù)本發(fā)明，食品中微生物的量，對(duì)于添加到濕的或液體的食品中而言，優(yōu)選為104-108cfu/g食品或cfu/ml復(fù)水產(chǎn)品，對(duì)于添加到非濕的或較不濕的食品中而言，在104-109cfu/g食品之間。乳桿菌∶雙岐桿菌比例不妨礙食品中添加的微生物量。
特別的是，單獨(dú)或聯(lián)合使用本發(fā)明微生物，均有助于預(yù)防和維持對(duì)攝入的抗原的耐受性。這特別適用于食物變態(tài)反應(yīng)，如對(duì)包括蝦、小龍蝦、龍蝦、螃蟹在內(nèi)的甲殼類動(dòng)物，以及對(duì)花生、蛋、木本堅(jiān)果(如胡桃或腰果)、大豆、小麥、魚的變態(tài)反應(yīng)和任何其它已知的食品變態(tài)反應(yīng)。它同樣也適用于其它變態(tài)反應(yīng)，如對(duì)螨、花粉或灰塵等等的變態(tài)反應(yīng)。
第四方面，本發(fā)明提供一種包含益生菌的可預(yù)防移植排斥危險(xiǎn)的食品。該食品可以包含至少一個(gè)可以誘導(dǎo)口服耐受性的乳酸細(xì)菌家族成員，和/或至少一個(gè)可以維持以前誘導(dǎo)的口服耐受性的雙岐桿菌屬成員。優(yōu)選乳桿菌屬的乳酸細(xì)菌，特定是副干酪乳桿菌，并且更特別的是副干酪乳桿菌CNCM I-2116。所用雙岐桿菌優(yōu)選是乳酸雙岐桿菌，特別是乳酸雙岐桿菌Bb12株系A(chǔ)TCC27536。
實(shí)際上，雖然我們不想局限于理論中，但我們認(rèn)為這兩種細(xì)菌具有通過(guò)促進(jìn)口服耐受性特異刺激免疫系統(tǒng)的能力。因此，由單獨(dú)或聯(lián)合的這兩種細(xì)菌與免疫系統(tǒng)一起形成的去除變態(tài)反應(yīng)的機(jī)制并不特異針對(duì)牛奶變態(tài)反應(yīng)或超敏反應(yīng)，而且這種機(jī)制還能夠幫助需要移植的患者或已經(jīng)接受移植的患者不排斥移植物。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面在于通過(guò)在移植前和移植后幫助誘導(dǎo)和維持對(duì)移植物的口服耐受，從免疫學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)看，通過(guò)獲得對(duì)將要移植的抗原的口服耐受性來(lái)幫助患者支持移植，從而預(yù)防移植物抗宿主疾病出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明中添加到食品中的微生物優(yōu)選是活體，但也可以是死的或可以通過(guò)，如凍干，滅活。事實(shí)上，死細(xì)菌的外膜似乎至少部分地與活細(xì)菌以相同方式激活免疫系統(tǒng)。因此，在本發(fā)明的任何實(shí)施方案中，細(xì)菌或細(xì)菌聯(lián)合可使用死生物體來(lái)實(shí)現(xiàn)。在這種情況下，添加到食品中的微生物的量?jī)?yōu)選相對(duì)于上述給定量增加5％到250％。
實(shí)施例下述的實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明范圍內(nèi)的一些產(chǎn)品及其制備方法。它們不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為以任何方式限制本發(fā)明。對(duì)本發(fā)明而言，可以進(jìn)行改變和修飾。即，本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識(shí)到，為了針對(duì)各種應(yīng)用合理地調(diào)節(jié)本發(fā)明化合物的天然水平，可以在這些實(shí)施例中實(shí)施許多變化以包括寬范圍的配方食品、成分、加工工藝和混合物。
實(shí)施例1口服耐受性的誘導(dǎo)本實(shí)驗(yàn)使用3組各20只無(wú)菌3-5周齡C3H/HeJ雌性小鼠，和1組3周齡常規(guī)BALB/c雌性小鼠。兩種益生菌株用于本研究一種來(lái)自the NestléCulture Collection(洛桑，瑞士)，是從健康嬰兒糞便中分離的副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)NCC 2461(CNCM I-2116)，一種是從ChrisHansen(法國(guó))購(gòu)買的人源乳酸雙岐桿菌(Bifidobacterium lactis)Bb12 NCC362菌株使用胃管經(jīng)口給無(wú)菌小鼠接種0.3ml包含大約5×108cfu/mL的副干酪乳桿菌或乳酸雙岐桿菌菌株的24小時(shí)細(xì)菌培養(yǎng)物。在喂食細(xì)菌后兩周實(shí)施口服誘導(dǎo)。在每一組中，根據(jù)每克體重3mg乳清蛋白，給10只小鼠口服乳清蛋白，以誘導(dǎo)口服耐受性。通過(guò)對(duì)酸性乳清超濾獲得乳清蛋白，蛋白含量為80％，其中，大約62％為β-乳球蛋白。剩余的10只小鼠單次口服喂給鹽水作為陰性對(duì)照(未引起耐受的小鼠)。
5天后，所有小鼠皮下用100μm 3次結(jié)晶的β-乳球蛋白(BLG)和100μg級(jí)別為V的卵清蛋白(OVA)進(jìn)行免疫。管飼后28天或50天，處死小鼠，分別評(píng)價(jià)耐受性的誘導(dǎo)和維持。每次處死5只喂食乳清蛋白的小鼠和5只喂食鹽水的小鼠。在21天和35天給第50天處死的小鼠額外增加2次皮下注射BLG和OVA。通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中BLG特異的IgE和BLG特異的IgG1及IgG2a的水平。
在口服乳清蛋白后28天處死且用BLG免疫的小鼠中評(píng)價(jià)常規(guī)、無(wú)菌和單相關(guān)小鼠中的口服耐受性誘導(dǎo)，見圖1A。結(jié)果清晰地表明，在常規(guī)、無(wú)菌和與副干酪乳桿菌有關(guān)聯(lián)的小鼠中，喂食乳清蛋白顯著抑制(P＜0.05)BLG特異的IgE、IgG1及IgG2a抗體應(yīng)答，表明Th1和Th2型體液應(yīng)答受到抑制。而與乳酸雙岐桿菌有關(guān)聯(lián)的小鼠中，僅有抗BLG特異性IgE應(yīng)答受到顯著抑制抗BLG IgG1應(yīng)答受到抑制，但不顯著(P＜0.2)。因此，在這組小鼠中，只有Th2型體液應(yīng)答對(duì)耐受性敏感。
就脾細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子產(chǎn)生而言的耐受性誘導(dǎo)為了進(jìn)一步驗(yàn)證通過(guò)益生菌可以調(diào)節(jié)耐受性的誘導(dǎo)，對(duì)脾細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞增殖(表1)和培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子譜(圖2A)。
表1常規(guī)的(Conv)、單相關(guān)的和無(wú)菌的(GF)小鼠在口服飼喂乳清蛋白后28或50天處死，其脾細(xì)胞經(jīng)BLG或PHA激活引起的增殖反應(yīng)。
實(shí)施例2 副干酪乳桿菌NCC 2461的免疫抑制作用對(duì)β-乳球蛋白口服耐受性誘導(dǎo)的影響天然BLG及其TC級(jí)分在用副干酪乳桿菌提取物降解前后的分子量大小為了評(píng)價(jià)是否副干酪乳桿菌提取物水解BLG及其TC級(jí)分，比較用副干酪乳桿菌提取物降解前后肽的分子大小。副干酪乳桿菌提取物根本不降解天然BLG，但降解酸性和堿性TC級(jí)分。強(qiáng)烈降解具有高分子量(1000-5000Da)的酸性肽，釋放出分子量低于1000Da的小肽。小肽在降解的級(jí)分中占75％以上(在降解前為36％)，42％的釋放的肽分子量小于500Da。堿性級(jí)分降解的程度較小。此級(jí)分中500-1000Da的肽減少，形成分子量小于500Da的肽，這種小于500Da的肽在降解后占級(jí)分的43％，而降解前占37％，令人吃驚的是，降解后的此級(jí)分中分子量高于2000Da的肽增加。
被副干酪乳桿菌提取物降解的或未降解的BLG和其TC級(jí)分對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響無(wú)論濃度如何，甚至在用副干酪乳桿菌提取物進(jìn)行水解后，天然BLG和堿性TC級(jí)分對(duì)淋巴細(xì)胞增殖也無(wú)影響。相反，酸性TC級(jí)分當(dāng)以大于1,000μg/ml的濃度使用時(shí)，正如刺激指數(shù)大于1.8并在2,000μg/ml時(shí)達(dá)到2.5所證實(shí)的那樣，可以刺激淋巴細(xì)胞增殖。用副干酪乳桿菌提取物降解后，這種刺激效應(yīng)顯著受到抑制(p＜0.05)，在2,000μg/ml時(shí)觀察到最強(qiáng)的抑制作用。另外，發(fā)現(xiàn)在使用以前從未接觸過(guò)BLG的小鼠的脾細(xì)胞時(shí)，經(jīng)副干酪乳桿菌降解后的酸性級(jí)分的免疫抑制效應(yīng)比用接觸過(guò)BLG的小鼠時(shí)更為明顯，刺激指數(shù)降低分別為0.7和0.4。
用副干酪乳桿菌提取物降解的或來(lái)降解的BLG及其TC級(jí)分對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響應(yīng)答用副干酪乳桿菌提取物降解的或未降解的天然BLG及堿性TC級(jí)分，脾細(xì)胞產(chǎn)生低水平的IFN-γ和IL-10。酸性TC級(jí)分則被發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo)高水平IFN-γ和低水平IL-10，而當(dāng)用副干酪乳桿菌提取物降解后酸性TC級(jí)分誘導(dǎo)相反的應(yīng)答。無(wú)論哪種級(jí)分，均發(fā)現(xiàn)IL-4以低水平產(chǎn)生。但是，BLG和酸性級(jí)分的降解降低了該因子的分泌，水平接近本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)限度。
副干酪乳桿菌提取物對(duì)淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響為了更好的理解副干酪乳桿菌通過(guò)何種機(jī)制誘導(dǎo)小鼠對(duì)BLG的口服耐受性，研究了單獨(dú)細(xì)胞質(zhì)提取物對(duì)淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。副干酪乳桿菌提取物以劑量依賴方式抑制有絲分裂原誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖，最大抑制作用出現(xiàn)在低稀釋倍數(shù)(1/10)，而在高稀釋倍數(shù)(1/1000)時(shí)無(wú)作用。但是，即使是在高劑量(1/10稀釋)，副干酪乳桿菌提取物也不影響缺乏PHA時(shí)所觀測(cè)到的細(xì)胞增殖，提示所使用的濃度對(duì)細(xì)胞是無(wú)毒的。此外，當(dāng)細(xì)胞增殖被強(qiáng)烈抑制時(shí)，產(chǎn)生高數(shù)量的IL-10，而IFN-γ的產(chǎn)生不受影響仍然保持非常低水平。
實(shí)施例3 口服耐受性的維持本實(shí)驗(yàn)為實(shí)施例1的繼續(xù)。
在喂食已經(jīng)形成耐受性的小鼠乳清蛋白后，持繼7周監(jiān)測(cè)小鼠體內(nèi)特異抗體反應(yīng)抑制作用的維持(圖1)。常規(guī)小鼠中BLG特異的IgE、IgG1和IgG2a反應(yīng)被維持在受到抑制的狀態(tài)(p＜0.01)。在無(wú)菌小鼠和副干酪乳桿菌關(guān)聯(lián)小鼠中對(duì)抗BLG IgG2a效價(jià)的抑制作用未得到維持，而特異性IgE和IgG1水平卻相反。在乳酸雙岐桿菌定居的小鼠中，發(fā)現(xiàn)BLG特異性IgE應(yīng)答持續(xù)受到抑制且抗BLG IgG1效價(jià)顯著降低。結(jié)果，在常規(guī)小鼠中Th1和Th2型體液免疫應(yīng)答持繼受到抑制，而在無(wú)菌的、乳酸雙岐桿菌相關(guān)的和副干酪乳桿菌相關(guān)的小鼠中僅維持了對(duì)Th1型抗體效價(jià)的消除作用。
在誘導(dǎo)口服耐受后50天處死的小鼠中脾細(xì)胞的IFN-γ產(chǎn)生與28天后獲得的相似，除了無(wú)菌小鼠與乳酸雙岐桿菌相關(guān)小鼠中這種降低分別為不顯著的和顯著的降低(圖2B)。Th1細(xì)胞活力在所有小鼠組中也仍保持受到抑制(圖2B)。相反，IL-10僅在喂食乳清蛋白的常規(guī)小鼠中維持高產(chǎn)量(圖2B)。然而，如有BLG存在時(shí)分別達(dá)到131、61和38的高刺激指數(shù)所清楚顯示的，已發(fā)現(xiàn)無(wú)菌小鼠和乳酸雙岐桿菌相關(guān)小鼠的脾細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)期持續(xù)耐受表現(xiàn)敏感(表1)。BLG存在時(shí)在常規(guī)小鼠和副干酪乳桿菌定居的小鼠中獲得較低刺激指數(shù)。但是來(lái)自所有實(shí)驗(yàn)組小鼠的細(xì)胞均對(duì)PHA產(chǎn)生良好應(yīng)答(表1)。
實(shí)施例4 乳酸雙岐桿菌Bb12對(duì)β-乳球蛋白的抗過(guò)敏特性。
對(duì)BLG的TC級(jí)分的表征-乳酸雙岐桿菌驅(qū)動(dòng)的水解對(duì)BLG及其TC肽的分子大小的影響乳酸雙岐桿菌提取物降解酸性和堿性級(jí)分，而不降解天然的BLG。在乳酸雙岐桿菌降解之前，酸性級(jí)分含有36％的分子量在2000到5000Da的肽。乳酸雙岐桿菌降解后，這些肽的百分?jǐn)?shù)降到21％，同時(shí)低分子量肽(＜500Da)從19％增加到46％。水解堿性級(jí)分后同樣也釋放小肽。分子量在500到2000Da之間的堿性肽被分解，產(chǎn)生具有滯后的停留時(shí)間的小肽。
BLG及其TC級(jí)分的IgE結(jié)合能力。
BLG及其堿性TC級(jí)分的結(jié)合能力不隨乳酸雙岐桿菌提取物的降解而明顯降低。相反，酸性TC肽與血清IgE的結(jié)合由于乳酸雙岐桿菌驅(qū)動(dòng)的水解而輕微下降。
乳酸雙岐桿菌提取物降解的BLG及其TC級(jí)分對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響在乳酸雙岐桿菌降解之前，當(dāng)酸性級(jí)分濃度為1,000μg ml-1或更高時(shí)，顯著刺激淋巴細(xì)胞增殖；但存在BLG和堿性級(jí)分時(shí)，無(wú)論濃度多少均不顯著刺激增殖。相反，經(jīng)乳酸雙岐桿菌提取物降解后，BLG和其TC級(jí)分均以劑量依賴方式刺激淋巴細(xì)胞增殖。當(dāng)濃度為1,000μg ml-1或更高時(shí)，BLG和堿性級(jí)分誘導(dǎo)顯著的細(xì)胞增殖；而酸性級(jí)分在濃度為2,000μg ml-1時(shí)誘導(dǎo)顯著的細(xì)胞增殖。再者，對(duì)于BLG、酸性級(jí)分和堿性級(jí)分，在2,000μg ml-1時(shí)達(dá)到相似的刺激指數(shù)。雖然酸性和堿性TC肽有不同的刺激作用，但用乳酸雙岐桿菌提取物降解后在高劑量時(shí)產(chǎn)生會(huì)聚效果。
由于經(jīng)乳酸雙岐桿菌提取物水解的BLG，不像酸性和堿性級(jí)分，隨后不進(jìn)行過(guò)濾以除去酶，所以，作為對(duì)照評(píng)估單獨(dú)提取物對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響。稀釋到1/100倍時(shí)(關(guān)于BLG水解，含有2000μg ml-1的BLG及含有40μg ml-1細(xì)胞提取物蛋白的孔)，提取物強(qiáng)烈地刺激淋巴細(xì)胞增殖，表明BLG的刺激效應(yīng)可能主要由濃度在40μg ml-1的無(wú)細(xì)胞提取物引起。相反地，正如C18層析后所證實(shí)的一樣，超濾乳酸雙岐桿菌提取物本身產(chǎn)生基本無(wú)蛋白的透過(guò)物，表明過(guò)濾后在酸性和堿性級(jí)分中僅保留了痕量的提取物。在低濃度時(shí)(1/1000或4μg ml-1細(xì)胞提取物蛋白)，提取物不可能刺激淋巴細(xì)胞增殖，說(shuō)明其對(duì)觀察到的酸性和堿性級(jí)分的作用無(wú)貢獻(xiàn)。
幼稚小鼠和具耐受性的小鼠的淋巴細(xì)胞增殖本段涉及乳酸雙岐桿菌提取物對(duì)用于體外刺激淋巴細(xì)胞增殖的因子的效應(yīng)，其中所用淋巴細(xì)胞來(lái)自幼稚的年幼小鼠和每天取食富含BLG飼料的小鼠。經(jīng)乳酸雙岐桿菌提取物降解之前，酸性級(jí)分對(duì)來(lái)自幼稚小鼠的淋巴細(xì)胞比對(duì)那些來(lái)自耐受性對(duì)應(yīng)小鼠的淋巴細(xì)胞有更大刺激作用，而BLG和堿性肽則不如此。經(jīng)乳酸雙岐桿菌提取物降解之后，BLG及其TC級(jí)分均刺激來(lái)自幼稚小鼠的淋巴細(xì)胞比那些來(lái)自耐受性小鼠的淋巴細(xì)胞獲得顯著更強(qiáng)的增殖，這可以由指數(shù)相較于3達(dá)到4而得以說(shuō)明。然而，已經(jīng)證實(shí)，單獨(dú)乳酸雙岐桿菌提取物(稀釋到1/100)可以在幼稚小鼠中如前述針對(duì)耐受性小鼠一樣刺激淋巴細(xì)胞增殖，表明乳酸雙岐桿菌提取物降解的天然BLG對(duì)于細(xì)胞增殖并無(wú)真實(shí)的刺激作用。
細(xì)胞因子的產(chǎn)生本段涉及在BLG及其TC級(jí)分(被乳酸雙岐桿菌提取物水解或未被水解時(shí))存在下，來(lái)自幼稚小鼠和耐受性小鼠的脾細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生情況。在幼稚小鼠和耐受性小鼠的脾細(xì)胞培養(yǎng)物中，存在未經(jīng)處理的BLG、酸性和堿性TC級(jí)分時(shí)，IFN-γ以低水平表達(dá)，應(yīng)答酸性級(jí)分得到最高產(chǎn)量400pg ml-1。當(dāng)經(jīng)乳酸雙岐桿菌提取物水解后，BLG及各級(jí)分強(qiáng)烈誘導(dǎo)幼稚小鼠和耐受性小鼠的脾細(xì)胞分泌IFN-γ，其中幼稚小鼠具有更高產(chǎn)量。觀測(cè)到IL-10的分泌具有相同的應(yīng)答情況，但生產(chǎn)水平比IFN-γ低10倍。無(wú)論是BLG樣品或小鼠，在細(xì)胞培養(yǎng)上清中均未檢測(cè)到IL-4或IL-5，表明無(wú)強(qiáng)Th2型細(xì)胞因子誘導(dǎo)。正如在淋巴細(xì)胞增殖方面觀察到的，應(yīng)答乳酸雙岐桿菌提取物降解的BLG所引起的IFN-γ產(chǎn)生主要是由保留于樣本中的提取物所致。
實(shí)施例5 促進(jìn)和誘導(dǎo)口服耐受性的嬰兒配方食品我們將如下成分根據(jù)所示比例進(jìn)行混合制備嬰兒配方食品。最終產(chǎn)品100g包含519卡，均為粉劑。
脂肪27.7g來(lái)自乳的脂肪0.7g脂肪混合物(150) 26.8g卵磷脂 0.2g亞油酸 4.1gα-亞麻酸 525mg蛋白質(zhì) 9.5g游離糖 57.9g乳糖57.9g礦物質(zhì)(灰分)1.9g鈉 120mg鉀 460mgChlorure330mg鈣 320mg磷 160mg鎂 36mg錳 40μg
硒 10.4μg總固體 97.0g水分含量3.0g按照每100g 106副干酪乳桿菌和102乳酸雙岐桿菌，向以上制備的配方產(chǎn)品添加副干酪乳桿菌和乳酸雙岐桿菌。
實(shí)施例6 促進(jìn)和誘導(dǎo)口服耐受的貓糧該飼料混合物由約58％重量玉米、約6％重量玉米麩質(zhì)、和約23％重量的雞肉粉、鹽、維生素和礦物質(zhì)(構(gòu)成剩余部分)組成。
將飼料混合物加入預(yù)處理器(preconditioner)中并潤(rùn)濕。潤(rùn)濕的飼料然后加入擠壓-蒸煮器中并糊化。迫使正在離開擠壓機(jī)的糊化基質(zhì)通過(guò)模具并擠出，將這種擠壓物切成適合喂食貓的塊，在約110℃干燥約20分鐘，冷卻形成顆粒飼料。在此，將以下的一種或多種菌株的凍干粉末加入顆粒飼料副干酪乳桿菌和乳酸雙岐桿菌。因此，提供足夠量的粉末以便貓的相應(yīng)膳食攝入量大約為每天107-109cfu。將一些粉末混合在第一份顆粒飼料中并進(jìn)行包裝。第二份量的粉末稱量后與脂質(zhì)載體混合，然后噴霧到第二份顆粒飼料上。在50-60℃充分干燥包衣數(shù)分鐘后包裝這些飼料。
權(quán)利要求
1.至少包含可以維持口服耐受性的物質(zhì)的食品，所述物質(zhì)由雙岐桿菌屬菌株組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的食品，其中雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的食品，其中雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌ATCC27536。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一項(xiàng)的食品，其中添加的細(xì)菌是已滅活的或死的細(xì)菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之任一項(xiàng)的食品，其中該食品不旨在用于過(guò)敏群體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之任一項(xiàng)的食品，其中該食品是嬰兒配方食品。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一項(xiàng)的食品，其中細(xì)菌在食品中以每ml復(fù)水產(chǎn)品或每g食品105-108cfu，優(yōu)選105-107cfu，最優(yōu)選106cfu的量存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5之任一項(xiàng)的食品，其中該食品是寵物食品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的食品，其中細(xì)菌以104-108cfu/g非濕食品，105-108cfu/g濕食品，以及105-108cfu/g液體食品的量存在。
10.至少包含可以促進(jìn)口服耐受性的物質(zhì)和可以維持口服耐受性的物質(zhì)的食品，其中所述可以促進(jìn)口服耐受性的物質(zhì)由乳桿菌屬的乳酸細(xì)菌組成，而所述可以維持口服耐受性的物質(zhì)由雙岐桿菌屬的乳酸細(xì)菌組成。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的食品，其中乳桿菌是副干酪乳桿菌，而雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的食品，其中副干酪乳桿菌是副干酪乳桿菌CNCM I-2116，而乳酸雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌ATCC 27536。
13.根據(jù)權(quán)利要求10-12之任一項(xiàng)的食品，其中該食品不旨在用于過(guò)敏群體。
14.根據(jù)權(quán)利要求10-13之任一項(xiàng)的食品，其中該食品是嬰兒配方食品。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的食品，其中對(duì)于從未接觸過(guò)各種新食品抗原的嬰兒群體，乳桿菌與雙岐桿菌的比例是10∶1-1∶1。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的食品，其中對(duì)于已經(jīng)接觸過(guò)食品抗原的嬰兒、幼兒、兒童群體，乳桿菌與雙岐桿菌的比例是1∶10-1∶1。
17.根據(jù)權(quán)利要求10-13之任一項(xiàng)的食品，其中該食品是寵物食品。
18.根據(jù)權(quán)利要求10-17之任一項(xiàng)的食品，其中微生物在本發(fā)明食品中的量，當(dāng)微生物摻入濕產(chǎn)品或液體產(chǎn)品中時(shí)，優(yōu)選為104-108cfu/g食品或cfu/ml復(fù)水產(chǎn)品，而當(dāng)微生物摻入到非濕產(chǎn)品或較不濕的產(chǎn)品中時(shí)，為104-109cfu/g食品。
19.包含可以預(yù)防變態(tài)反應(yīng)和/或降低移植物排斥危險(xiǎn)的益生菌的食品。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的食品，其包含至少一個(gè)可以誘導(dǎo)口服耐受性的乳酸細(xì)菌家族成員，和/或至少一個(gè)可以維持以前已誘導(dǎo)的口服耐受性的乳酸細(xì)菌家族成員。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的食品，其中誘導(dǎo)口服耐受性的乳酸細(xì)菌屬于乳桿菌屬，優(yōu)選為副干酪乳桿菌，在優(yōu)選實(shí)施方案中為副干酪乳桿菌CNCM I-2116。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的食品，其中維持口服耐受性的乳酸細(xì)菌屬于雙岐桿菌屬，優(yōu)選是乳酸雙岐桿菌，在優(yōu)選實(shí)施方案中是Bb 12菌株ATCC27536。
23.根據(jù)權(quán)利要求19-22之任一項(xiàng)的食品，其中所述變態(tài)反應(yīng)是食物變態(tài)反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及至少包含可以促進(jìn)口服耐受性的物質(zhì)(副干酪乳桿菌)的食品、至少包含可以維持口服耐受性的物質(zhì)(乳酸雙岐桿菌)的食品、以及包含可以促進(jìn)和維持口服耐受性物質(zhì)的(乳桿菌和雙岐桿菌的聯(lián)合)的食品。該食品旨在用于嬰兒、幼兒、兒童以及寵物。本發(fā)明涉及不旨在用于過(guò)敏群體的食品。
文檔編號(hào)A23C9/127GK1662154SQ03814536
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2003年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月24日
發(fā)明者G·普里烏特, S·佩凱 申請(qǐng)人:雀巢技術(shù)公司