專利名稱：用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒a16型的引物組及檢測體系的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)檢測腸道病毒的引物組、檢測體系、檢測方法及用途。
背景技術(shù)：
柯薩奇病毒(Coxsackievirus，CV)屬于小核糖核酸(RibonucleicAcid, RNA)病 毒科(Picornaviridae)，腸道病毒屬(Enterovirus)，是多種人類疾病的致病病原，致病譜 廣，可引起呼吸道感染、結(jié)膜炎、心肌炎、心肌病及神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，偶爾引起新生兒死亡。 1948年Dolldorf和Sickles在紐約市柯薩奇鎮(zhèn)一次脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus，PV)流 行期間，通過接種乳鼠首次分離出CV。迄今為止，共有30個(gè)血清型，分成A、B兩組；其中， CVA 組 16 型(CV Group A 16Strain, CVA16)是引起兒童手足口病(Hand，F(xiàn)oot，and Mouth Disease, HFMD)的主要病原之一。腸道病毒的傳統(tǒng)檢測方法為先將病毒分離培養(yǎng)，然后進(jìn) 行血清中和試驗(yàn)定型分類，此法繁瑣、耗時(shí)、費(fèi)力，雖然多數(shù)培養(yǎng)結(jié)果可在1周內(nèi)得到，但中 和試驗(yàn)卻十分費(fèi)時(shí)、昂貴，甚至有時(shí)無法定型。PCR方法具有快速、敏感性強(qiáng)、特異性高等諸 多優(yōu)點(diǎn)，已應(yīng)用于腸道病毒的檢測，但由于需要昂貴的儀器設(shè)備和較高檢測費(fèi)用，以及對檢 測人員較高的技術(shù)要求，因而使其不適用于現(xiàn)場快速檢測及和基層普及應(yīng)用。LAMP技術(shù)是由Notomi等于2000年發(fā)明的一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)縮短了 核酸擴(kuò)增時(shí)間，提高了擴(kuò)增效率，并且具有更高的靈敏度、特異性，降低了儀器設(shè)備及檢測 條件的要求，被公認(rèn)為具有較強(qiáng)實(shí)用性的分子檢測技術(shù)。目前，LAMP技術(shù)已經(jīng)成功應(yīng)用于 多種病毒的檢測，如SARS冠狀病毒、登革熱病毒、埃博拉病毒、丙型肝炎病毒等，但尚未見 該方法在柯薩奇病毒A16型檢測方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測 柯薩奇病毒A16型的引物組；本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型 的檢測體系。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型 的方法。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型 的檢測體系的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的引物組，它由序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列、SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列、SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列和SEQ IDN0. 4所示核苷酸序列組成。
用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系，該體系由下述原料組 成IOX 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 5 μ L-1 μ L ；5mol/L 的 Betaine 0. 5 μ L-2 μ L ；10mmol/L 的 dNTP 1 μ L—2 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/y L 的 Bst 酶 0. 5μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的方法，它包括下述步驟(1)提取待檢測樣品中的病毒RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA ；⑵取1. 5 μ L所述cDNA加入 到11 μ L的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的檢測體系中，10000轉(zhuǎn)/分鐘， 離心30秒；(3)加入20 μ L礦物油，于63°C恒溫中進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增1-1. 5小 時(shí)；(4)取出反應(yīng)管，加入SYBR Green I型核酸染料，若反應(yīng)液變成綠色，則說明待測樣品 中存在柯薩奇病毒A16型，若為桔黃色，則說明待測樣品中不存在柯薩奇病毒A16型，所述 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系由下述原料組成10 X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 5 μ L—1 μ L ；5mol/L 的 Betaine 0. 5 μ L-2 μ L ；10mmol/L 的 dNTP 1 μ L_2 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/y L 的 Bst 酶 0. 5μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的檢測體系的用途。本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)1)高特異性4條引物對靶序列6個(gè)特異區(qū)域的識別保證了 LAMP擴(kuò)增的高度特異 性，見圖1。2)高靈敏度LAMP靈敏度比聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)更高，其所需擴(kuò)增模板可達(dá)IO1 拷貝/反應(yīng)，見圖2。3)鑒定簡便擴(kuò)增結(jié)果通過肉眼觀測，向反應(yīng)液中加入SYBR Green I熒光染料 時(shí)，若反應(yīng)液呈綠色，則為陽性；若反應(yīng)液呈桔黃色，則為陰性反應(yīng)，見圖3。4)操作簡單將待測樣品和檢測試劑混合后，只需放入63°C恒溫加熱儀器中進(jìn)行 LAMP反應(yīng)即可。
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5)快速、高效整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)只需1-1. 5小時(shí)即可完成。本發(fā)明的檢測體系可以在等溫條件下，快速、方便、高效、高特異、高靈敏地檢測到 柯薩奇病毒A16型，不需要復(fù)雜儀器，為柯薩奇病毒A16型檢測提供了新的技術(shù)平臺(tái)，易于 大范圍推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。


圖1 柯薩奇病毒A16型LAMP檢測體系的特異性。圖2 :LAMP(A)、PCR(B)檢測柯薩奇病毒A16型的靈敏度比較。圖3 本發(fā)明檢測體系SYBR Green I型熒光檢測法檢測結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 特異性基因組序列查找和LAMP引物設(shè)計(jì)從GenBank中檢索獲得柯薩奇病毒A16型基因組序列，通過BLAST軟件進(jìn)行同源 性分析，找到柯薩奇病毒A16型的特異性的保守靶序列，該保守靶序列的DNA序列為GGCGGAAATGCGAGTTGTTTACCTACATGCGCTTTGATGCTGAATTCACATTTGTCGTAGCCAAACCCA ATGGTGAGCTAGTCCCCCAATTACTGCAGTACATGTATGTCCCACCAGGGGCTCCGAAACCTACTTCCAGAGATTCG TTTGCTTGGCAGACTGCCACCAACCCATCTGTGTTTGTGAAAATGACGGACCCALAMP引物設(shè)計(jì)通過專門的 LAMP 弓I 物軟件 Primer design V3 (http //primerexplorer. ip/ elamp3. 0. 0/index. html)設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)的具體LAMP引物(用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯 薩奇病毒A16型的引物)為序列名稱類型長)
SEQIDΝ0.1F3正向外引物19
SEQIDNO.2B3反向外引物20
SEQIDNO.3FIP正向內(nèi)引物42
SEQIDNO.4BIP反向內(nèi)引物40實(shí)施例2 檢測體系的建立通過設(shè)置不同終濃度的Mg2+(2. 5mmol/L,3mmol/L,3. 5mmol/L,4mmol/L,4. 5mmol/ L, 5mmol/L)、dNTP(0. 8mmol/L>lmmol/L、1. 2mmol/L>1. 4mmol/L、1. 6mmol/L>1. 8mmol/L)、 Betaine(0. 2mol/L、0. 4mol/L、0. 6mol/L、0. 8mol/L、lmol/L、l. 2mol/L)和溫度(60 °C、 61°C、62°C、63°C、64°C、65°C )，優(yōu)化得到最佳反應(yīng)參數(shù)，從而建立柯薩奇病毒A16型LAMP檢 測體系。優(yōu)化的檢測體系(IlyL)之一種如下10 X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 75 μ L ；5mol/L 的 Betaine 1. 5 μ L ；IOmmol/L 的 dNTP 1. 5 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；
5
100 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/ μ L 的 Bst 酶 0. 5 μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。檢測反應(yīng)條件63°C恒溫1小時(shí)。注Mg2+終濃度=(母液濃度25mmol/LX0. 75 μ L+ThermoPol 緩沖液中含 20mmol/ LXl. 25μ L)/12. 5μ L實(shí)施例3 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系，該體系由下 述原料組成10 X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 75 μ L ；5mol/L 的 Betaine 1. 5 μ L ；IOmmol/L 的 dNTP 1. 5 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/ μ L 的 Bst 酶 0. 5 μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。檢測反應(yīng)條件63°C恒溫1小時(shí)。實(shí)施例4:用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系，該體系由下 述原料組成10X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 5 μ L ；5mol/L 的 Betaine 0. 5 μ L ；IOmmol/L 的 dNTP 1 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/ μ L 的 Bst 酶 0. 5 μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。實(shí)施例5 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的檢測體系，該體系由下 述原料組成10 X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 1 μ L ；5mol/L 的 Betaine 2 μ L ；IOmmol/L 的 dNTP 2 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ；
100 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ；100 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ；8U/y L 的 Bst 酶 0. 5μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。實(shí)施例2-5中，體系為11 μ L，還可以同等倍數(shù)擴(kuò)大或縮小該體系，各組分加入量 也隨擴(kuò)大倍數(shù)或縮小倍數(shù)同比例擴(kuò)大或縮小。實(shí)施例6 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的檢測體系的特異性分 析
以腸道病毒71型、柯薩奇Β3、柯薩奇Β5、埃可30、脊髓灰質(zhì)炎病毒及甲型肝炎病毒 核酸為模板檢測體系的特異性。 (1)反應(yīng)體系(IlyL)配制
6種病 Bst酶
超
純
100 μmol/L)
L) 0. 5
μ L

水
ThermoPol
緩沖液 (8U/y
(10Χ)
Mg:
2+
Betaine
dNTP
F3/B3
FIP/BIP
(25mmo
(5mol/L) (10m (各 10 μ mol/L)(各
1/L)
mol/L)
1. 25μ L
0.75 μ L 1. 5μ L 1. 5μ L # 0. 25 μ L # 0. 2μ L
μ L
(2) LAMP 擴(kuò)增 首先配置出IiyL
種用于檢測柯薩奇病毒A16型的LAMP檢測體系，取1. 5 μ L 制備好的待檢測核酸(已預(yù)先逆轉(zhuǎn)錄為cDNA)加到上述已配制好的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù) 檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系中，使最終反應(yīng)體積為12. 5 μ L，10000轉(zhuǎn)/分鐘，瞬時(shí)離 心30秒，混勻反應(yīng)液后，加入20 μ L礦物油，放于63°C恒溫進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增1 小時(shí)。結(jié)果見圖1。圖1中的各個(gè)泳道分別是M DNA Marker;1 腸道病毒柯薩奇A16 ；2-7 分別為腸道病毒71型、柯薩奇B3、柯薩奇B5、?？?0、脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒 株和甲型肝炎病毒減毒株。上述結(jié)果表明，柯薩奇病毒A16型LAMP檢測法只能擴(kuò)增柯薩奇病毒A16型而不能 檢測到其他非目標(biāo)病毒核酸，故所建立的LAMP檢測方法具有良好的檢測特異性。實(shí)施例7 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系的靈敏度分 析以107_10°拷貝/ μ L的含有柯薩奇病毒Α16型序列的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模版，分別進(jìn)行 LAMP和PCR，比較兩種檢測方法的靈敏度。結(jié)果見圖2。
圖2㈧是LAMP檢測結(jié)果，圖2⑶是PCR檢測結(jié)果，兩圖中的各個(gè)泳道分別是M DNA Marker;1-8 分別以107_10°拷貝/μ L的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模版；9:陰性對照。以上結(jié)果表明，用LAMP體系檢測柯薩奇病毒A16型的效果很好，其靈敏度比普通 PCR法高100倍。實(shí)施例8 用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系的SYBR Green I型熒光檢測LAMP檢測體系和檢測過程同實(shí)施例7，反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)管中加入4. 5 μ L SYBRGreen I型核酸染料，反應(yīng)液變成綠色，則說明反應(yīng)成陽性。若為桔黃色，則反應(yīng)為陰 性，結(jié)果見圖3。
圖3 (A):肉眼觀察。圖3(B)紫外燈下觀察。其中各個(gè)泳道分別是M :DNA Marker ；1-8 分別以107_10°拷貝/μ L的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模板；9:陰性對照。實(shí)施例9 取自實(shí)際環(huán)境水體樣品的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16 型的檢測體系檢測采集天津地區(qū)某處地表水水樣1L，濃縮10000倍，抽提濃縮水樣的總RNA，隨機(jī)引 物逆轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模版?zhèn)溆谩z測體系如下。IOX 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ；25mmol/L 的 Mg2+ 0. 75 μ L ；5mol/L 的 Betaine 1. 5 μ L ；IOmmol/L 的 dNTP 1. 5 μ L ；lOymol/L 的引物 F3 0. 25yL;lOymol/L 的引物 B3 0. 25yL;ΙΟΟμπιοΙ/L 的引物 FIP 0. 2yL;ΙΟΟμπιοΙ/L 的引物 BIP 0. 2yL;8U/y L 的 Bst 酶 0· 5μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。取1. 5 μ L上述eDNA加入到IlyL的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16 型的檢測體系中，10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心30秒，加入20 μ L礦物油，于63°C恒溫中進(jìn)行LAMP 擴(kuò)增1. 5小時(shí)，取出反應(yīng)管，加入5μ L SYBR Green I型核酸染料，反應(yīng)液變成綠色，說明所 測水樣中存在柯薩奇病毒A16型。采用實(shí)施例4-5的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系對實(shí) 施例9同樣的實(shí)際環(huán)境水體樣品進(jìn)行檢測，檢測步驟也同實(shí)施例9，各檢測體系的結(jié)果也分 別使反應(yīng)液變成綠色，說明實(shí)施例4-5的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的 檢測體系可用于檢測柯薩奇病毒A16型。
權(quán)利要求
用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的引物組，其特征是它由序列表中SEQID NO.1所示核苷酸序列、SEQ ID NO.2所示核苷酸序列、SEQ ID NO.3所示核苷酸序列和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列組成。
2.用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系，其特征是該體系由下述 原料組成IOX 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ； 25mmol/L 的 Mg2+ 0. 5 μ L-I μ L ； 5mol/L 的 Betaine 0. 5 μ L-2 μ L ； 10mmol/L 的 dNTP 1 μ L_2 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ； 10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ； 100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ； 100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ； 8U/ μ L 的 Bst 酶 0. 5 μ L ； 加超純水至總體積為11 μ L。
3.用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的方法，其特征是它包括下述步驟 (1)提取待檢測樣品中的病毒RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA ； (2)取1. 5 μ L所述cDNA加入到IlyL的用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系中，10000轉(zhuǎn)/分鐘，離 心30秒；(3)加入20 μ L礦物油，于63°C恒溫中進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增1-1. 5小時(shí)； (4)取出反應(yīng)管，加入SYBR Green I型核酸染料，若反應(yīng)液變成綠色，則說明待測樣品中存 在柯薩奇病毒A16型，若為桔黃色，則說明待測樣品中不存在柯薩奇病毒A16型，所述用環(huán) 介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的檢測體系由下述原料組成 10X 的 ThermoPol 緩沖液 1. 25 μ L ； 25mmol/L 的 Mg2+ 0. 5 μ L-I μ L ； 5mol/L 的 Betaine 0. 5 μ L-2 μ L ； 10mmol/L 的 dNTP 1 μ L_2 μ L ；10 μ mol/L的序列表中SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列0. 25 μ L ； 10 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列0. 25 μ L ； 100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列0. 2 μ L ； 100 μ mol/L的序列表中SEQ ID N0. 4所示核苷酸序列0. 2 μ L ； 8U/ μ L的Bst酶0. 5 μ L ；加超純水至總體積為11 μ L。
4.用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒Α16型的檢測體系的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的引物組及檢測體系，用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測柯薩奇病毒A16型的引物組由序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列、SEQ ID NO.2所示核苷酸序列、SEQ ID NO.3所示核苷酸序列和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列組成。本發(fā)明的檢測體系可以在等溫條件下，快速、方便、高效、高特異、高靈敏地檢測到柯薩奇病毒A16型，不需要復(fù)雜儀器，為柯薩奇病毒A16型檢測提供了新的技術(shù)平臺(tái)。
文檔編號C12N15/11GK101892322SQ201010217270
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月5日
發(fā)明者孟斌, 尹光雅, 張國輝, 李國良, 王俊虹, 王毅錚, 趙化冰, 趙國平, 趙宏, 高宏生, 黃愛華 申請人:中國人民武裝警察部隊(duì)醫(yī)學(xué)院