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密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測(cè)裝置、檢測(cè)容器的制造方法

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密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測(cè)裝置、檢測(cè)容器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于核酸檢測(cè)領(lǐng)域,具體涉及一種可用于普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和恒溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)的反應(yīng)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,核酸檢測(cè)已經(jīng)越來(lái)越多地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域。目前常用的核酸擴(kuò)增方法有基于經(jīng)典普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的擴(kuò)增技術(shù)和新興的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(CPA)、環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)、鏈置換擴(kuò)增(SDA)、依賴解旋酶的擴(kuò)增(HDA)等。由于核酸擴(kuò)增技術(shù)的高靈敏度,擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)量很高,因此面臨氣溶膠污染問(wèn)題。
[0003]此外,基于擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)方法,傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)方法需要集成龐大、昂貴、精密的光學(xué)設(shè)備,不利于裝置的小型化開(kāi)發(fā)和應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。目前新興的非光學(xué)檢測(cè)方法如電化學(xué)方法、HNB比色法、濁度法,對(duì)裝置的要求大為簡(jiǎn)化,但這些方法有的需要開(kāi)蓋操作,極容易造成氣溶膠污染,有的檢測(cè)靈敏度不高,結(jié)果不易判斷。申請(qǐng)?zhí)枮?01410431991.9的中國(guó)實(shí)用新型專利申請(qǐng)能夠使得陽(yáng)性樣本反應(yīng)后反應(yīng)液從無(wú)色變?yōu)橛猩?,使核酸擴(kuò)增檢測(cè)變得肉眼可見(jiàn),和傳統(tǒng)的比色方法相比,其顯色更加靈敏,但是這一技術(shù)仍未涉及到檢測(cè)特異性。因此,開(kāi)發(fā)密閉、小型化、便攜式的核酸檢測(cè)裝置,將其與現(xiàn)有的檢測(cè)方法相結(jié)合顯得越來(lái)越重要。
[0004]試紙條法因其檢測(cè)特異性、高靈敏度和簡(jiǎn)單便攜的特性而受到廣泛關(guān)注。但目前商業(yè)化的試紙條檢測(cè)裝置設(shè)計(jì)復(fù)雜,不利于降低成本。因此開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便易行,成本低廉的試紙條檢測(cè)裝置,十分必要。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]本實(shí)用新型的目的之一是提供一種密閉性便攜式試紙條比色法檢測(cè)核酸擴(kuò)增的裝置,可使核酸反應(yīng)體系在不打開(kāi)反應(yīng)容器的情況下,進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)及用試紙條進(jìn)行特異性檢測(cè)。為此,本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:
[0006]一種密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測(cè)裝置,其特征在于它包括反應(yīng)管、檢測(cè)容器;檢測(cè)容器包括供膠體金試紙條放置的空腔,所述檢測(cè)容器的一端為能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu),且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的,在該端具有與所述空腔相通的連通口 ;所述檢測(cè)容器的另一端也具有與所述空腔相通的口,且該端與檢測(cè)容器的蓋相連;檢測(cè)容器中供膠體金試紙條放置的空腔經(jīng)過(guò)所述連通口與反應(yīng)管相通。
[0007]所述檢測(cè)容器的另一端的口為與空腔直通的試紙條裝填口。
[0008]進(jìn)一步地,能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)為被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)。所述被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)為反應(yīng)管的蓋。更進(jìn)一步地,所述空腔與反應(yīng)管的軸線垂直,在此結(jié)構(gòu)中,所述檢測(cè)容器可呈長(zhǎng)方體形。
[0009]進(jìn)一步地,所述檢測(cè)容器也可呈筒狀,其一端能被反應(yīng)管插入并密封。在此結(jié)構(gòu)中,所述檢測(cè)容器的蓋可采用活塞式,其內(nèi)側(cè)端具有能連接試紙條的部位,在此結(jié)構(gòu)中,處在空腔中的試紙條可連接在活塞上。
[0010]本實(shí)用新型的目的之二是提供一種試紙條比色法檢測(cè)核酸擴(kuò)增的檢測(cè)容器,能夠應(yīng)用于核酸檢測(cè)裝置中,可使核酸反應(yīng)體系在不打開(kāi)反應(yīng)容器的情況下,進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)及用試紙條進(jìn)行特異性檢測(cè)。為此,本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:
[0011]一種試紙條比色法檢測(cè)核酸擴(kuò)增的檢測(cè)容器,其特征在于其包括供膠體金試紙條放置的空腔,所述檢測(cè)容器的一端為能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu),且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的,在該端具有與所述空腔相通的連通口 ;所述檢測(cè)容器的另一端也具有與所述空腔相通的口,且該端與檢測(cè)容器的蓋相連;檢測(cè)容器中供膠體金試紙條放置的空腔經(jīng)過(guò)所述連通口與反應(yīng)管相通。
[0012]所述檢測(cè)容器的另一端的口為與空腔直通的試紙條裝填口。
[0013]進(jìn)一步地,能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)為被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)。所述被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)為反應(yīng)管的蓋。更進(jìn)一步地,所述空腔與反應(yīng)管的軸線垂直,所述檢測(cè)容器還可以是呈長(zhǎng)方體形。
[0014]進(jìn)一步地,所述檢測(cè)容器也可呈筒狀,其一端能被反應(yīng)管插入并密封。在此結(jié)構(gòu)中,所述檢測(cè)容器的蓋可采用活塞式,在此結(jié)構(gòu)中,處在空腔中的試紙條可連接在活塞上。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比,本實(shí)用新型具有如下有益效果:
[0016]1.本實(shí)用新型將反應(yīng)容器和檢測(cè)容器分開(kāi)但又連通,通過(guò)連通孔相互連接,能將試紙條集成到核酸擴(kuò)增反應(yīng)器中,無(wú)需打開(kāi)反應(yīng)容器就可以實(shí)現(xiàn)顯色反應(yīng),大大降低氣溶膠的污染;
[0017]2.本實(shí)用新型裝置簡(jiǎn)單,能進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),并且不影響后續(xù)的膠體金試紙條檢測(cè),就可簡(jiǎn)便的實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)。
[0018]3.本實(shí)用新型不但保證了試紙條檢測(cè)的快速高效性,而且成本低廉,可在不開(kāi)蓋的情況下完成整個(gè)核酸擴(kuò)增的特異性檢測(cè)。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例1中一種實(shí)施方式的剖視圖。
[0020]圖2為圖1的分解圖。
[0021]圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例1中另一種實(shí)施方式的剖視圖。
[0022]圖4為圖3的分解圖。
[0023]圖5為本實(shí)用新型實(shí)施例2的剖視圖。
[0024]圖6為圖5的分解圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例1,參照?qǐng)D1、2、3、4:
[0026]本實(shí)用新型所提供的密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測(cè)裝置,包括反應(yīng)管5、檢測(cè)容器2 ;檢測(cè)容器2包括供膠體金試紙條放置的長(zhǎng)條型空腔4,所述檢測(cè)容器的一端為能與反應(yīng)管5插入相連的反應(yīng)管的蓋20,且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的,在該端具有與所述空腔相通的
[0027]所述空腔4與反應(yīng)管的軸線垂直,所述檢測(cè)容器可呈長(zhǎng)方體形。
[0028]根據(jù)反應(yīng)管的蓋與檢測(cè)容器的連通方式的不同,該實(shí)施方案又可以分為兩種:
[0029]第一種:反應(yīng)管的蓋及與其連通的用于放置試紙條的檢測(cè)容器的連通口 21開(kāi)口較小(如圖1、2所示)。該連通口 21的橫截面形狀任意,優(yōu)選為長(zhǎng)方形(包括正方形)和圓形,更優(yōu)選地為圓形,開(kāi)口直徑大小優(yōu)選地小于等于2mm,大于等于1mm,更優(yōu)選地為1.5mm。
[0030]第二種:反應(yīng)管的蓋及與其連通的用于放置試紙條的長(zhǎng)方體檢測(cè)容器的連通口21較大(如圖3、4所示)。優(yōu)選地反應(yīng)管的蓋和放置試紙條的空腔的壁相重疊的部分都去掉,使兩者的連通部分橫截面積盡可能達(dá)到最大。
[0031]上述密閉式核酸檢測(cè)裝置,集成有反應(yīng)管的蓋的檢測(cè)容器為一體成型。
[0032]所述空腔與檢測(cè)容器所要連的反應(yīng)管的軸線垂直,也即所述檢測(cè)容器相對(duì)于反應(yīng)管是臥式的檢測(cè)容器或也可稱為檢測(cè)容器相對(duì)于反應(yīng)管是橫向的容器。所述反應(yīng)管的高度優(yōu)選地,小于等于20mm,大于等于1mm0
[0033]在上述第一種實(shí)施方案中,反應(yīng)工作液的體積優(yōu)選地在50~450 μ L之間,更優(yōu)選地在50~100 μ L之間。在上述第二種實(shí)施方案中,反應(yīng)工作液的體積優(yōu)選地在20~450 μ L之間,更優(yōu)選地在20~50 μ L之間。
[0034]裝配時(shí),可取上述檢測(cè)容器,從口 22處放入針對(duì)待檢測(cè)物質(zhì)的已經(jīng)標(biāo)記好的膠體金試紙條,膠體金試紙條的標(biāo)記端靠近連通口 21,膠體金試紙條的未標(biāo)記端靠近檢測(cè)容器的口 22,再用蓋3將口 22密封。
[0035]本實(shí)用新型的核酸檢測(cè)裝置主要是針對(duì)做大批量核酸擴(kuò)增檢測(cè)時(shí),開(kāi)蓋檢測(cè)形成的氣溶膠污染等問(wèn)題。按照實(shí)際反應(yīng)的需要,向檢測(cè)容器中,加入針對(duì)不同檢測(cè)物的特異性標(biāo)記的膠體金試紙條,使用的時(shí)候,只需將反應(yīng)液加入反應(yīng)管中,與檢測(cè)容器連接后進(jìn)行反應(yīng)和檢測(cè)即可。
[0036]本實(shí)用新型裝置的反應(yīng)容器(反應(yīng)管5)用于盛放核酸擴(kuò)增反應(yīng)液,反應(yīng)容器的材質(zhì)能夠耐高溫,不影響核酸擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)容器具有良好的密閉性,反應(yīng)過(guò)程中不發(fā)生水分蒸發(fā)散失,能夠獨(dú)立進(jìn)行PCR反應(yīng)或其他恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)。在不開(kāi)蓋的情況下,通過(guò)搖晃或是震動(dòng)、顛倒等操作,反應(yīng)容器中的液體能夠通過(guò)連通孔進(jìn)入檢測(cè)容器進(jìn)行試紙條比色法檢測(cè)。
[0037]利用上述核酸檢測(cè)裝置的核酸檢測(cè)方法,具體包括如下步驟:
[0038](I)取加工成型的密閉核酸檢測(cè)裝置的反應(yīng)管,放入PCR擴(kuò)增反應(yīng)液(或CPA、LAMP等恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液)。如檢測(cè)容器采用上述第二種實(shí)施方案中,反應(yīng)液上層用石蠟油密封。
[0039]需要注意的是,對(duì)于用膠體金試紙條來(lái)說(shuō),蠟油和擴(kuò)增反應(yīng)液的比例。石蠟油與擴(kuò)增反應(yīng)液的體積比例應(yīng)小于2.5:1。實(shí)驗(yàn)證明,當(dāng)石蠟油與擴(kuò)增反應(yīng)液的比例為2.5:1時(shí),膠體金試紙條上沒(méi)有條帶出現(xiàn);當(dāng)石蠟油與擴(kuò)增反應(yīng)液的比例為2:1時(shí),膠體金試紙條上偶爾有條帶出現(xiàn),但出現(xiàn)條帶所需反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。當(dāng)石蠟油與擴(kuò)增反應(yīng)液的比例為1.5:1時(shí),膠體金試紙條上有條帶出現(xiàn),并且反應(yīng)速度快,條帶顏色明顯。
[0040]因此優(yōu)選的石蠟油與擴(kuò)增反應(yīng)液的比例應(yīng)小于等于1.5:1,同時(shí)要保證石蠟油在擴(kuò)增反應(yīng)液上層形成密封。
[0041](
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