質(zhì)譜分 析條件為：電離方式為EI源，正離子模式;離子源溫度:230°C ;四極桿溫度:均為150°C ;碰撞 氣:氮?dú)猓魉?.5血/min，載氣(氮?dú)?流速為2.25mL/min;多反應(yīng)監(jiān)巧U (MRM)模式，詳細(xì)參數(shù) 列于下表。
[0084] 目標(biāo)物的MRM參數(shù)情況
[0085]
[0086] (5)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及結(jié)果計(jì)算
[0087] 首先，W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中EC與D5-E切農(nóng)度之比為橫坐標(biāo)，W色譜圖中EC與D5-EC峰 面積之比為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。取最低濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液， 做9次平行檢測(cè)分析，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，W3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差對(duì)應(yīng)的濃度，換算得出方法的檢出 限。與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相對(duì)應(yīng)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限等數(shù)據(jù)見(jiàn)下表。
[0088] 分析方法的工作曲線和檢出限
[0089]
[0090] 然后，將相同條件下測(cè)得的樣品溶液中EC與D5-EC色譜峰面積比，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，根據(jù)下列公式求得發(fā)酵食品中痕量EC的含量。
[0091]
[0092] 式中；
[0093] W一一發(fā)酵食品中EC的含量，單位為微克每千克(yg/kg);
[0094] A--EC的峰面積；
[0095] As--D5-EC的峰面積；
[0096] b-標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的截距；
[0097] Ms--添加內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量，單位為微克(yg);
[0098] a--標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率；
[0099] Μ一一發(fā)酵食品的質(zhì)量，單位為支。
[0100] 本實(shí)施例中葡萄酒、酸奶、醬油等不同發(fā)酵食品中氨基甲酸乙醋含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn) 下表：
[0101] 發(fā)酵食品檢測(cè)結(jié)果(yg/kg)
[0102]_
[0103] 實(shí)施例2
[0104] 本實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的精密度和加標(biāo)回收率的檢測(cè)方法如下：
[0105] W實(shí)施例1中所用的酸奶樣品為分析對(duì)象，分別進(jìn)行了日內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)，日內(nèi)精密 度實(shí)驗(yàn)為相同樣品在同一條件下平行測(cè)定6次（同一批次處理），分別計(jì)算6次平行測(cè)定結(jié)果 的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。表中結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)方法的日內(nèi)重復(fù)性的RSD< 10%，對(duì)于痕量物質(zhì)的定量分析來(lái)說(shuō)，表明方法具有良好的精密度。
[0106] 方法的精密度結(jié)果
[0107]
[010 引
[0109] W重復(fù)性試驗(yàn)所用酸奶樣品為分析對(duì)象，按照上述樣品前處理方法進(jìn)行處理，加 入其釋放量相當(dāng)?shù)牡?、中、高Ξ個(gè)不同含量的標(biāo)樣，進(jìn)行基質(zhì)加標(biāo)試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)下表。從表中 可W看出，樣品的加標(biāo)回收率在84.87%~105.43%之間，說(shuō)明方法具有較好的準(zhǔn)確性。
[0110] 表5方法的加標(biāo)回收率結(jié)果
[0111]
[0112] 本實(shí)施例所用到的標(biāo)準(zhǔn)溶液僅W其中的一個(gè)濃度為例進(jìn)行說(shuō)明的，其它濃度值所 制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程與上述實(shí)施例 相同，在此不在一一列舉。所舉實(shí)施例只是為了更好的理解本發(fā)明方法，并不具有任何限制 作用，即上述方法或者等同上述情況的方法均包含在本發(fā)明的技術(shù)方案的保護(hù)范圍中。
[0113] 上面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作了詳細(xì)的說(shuō)明，但是本發(fā)明不 限于上述實(shí)施方式，在所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可W在不脫離 本發(fā)明宗旨的前提下做出各種變化。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述方法包括以下步 驟： (1) 內(nèi)標(biāo)溶液的制備：以D5-氨基甲酸乙酯D5-EC為內(nèi)標(biāo)物，使用乙腈為溶劑，制備內(nèi)標(biāo) 溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：以氨基甲酸乙酯EC標(biāo)準(zhǔn)品為目標(biāo)物，使用乙腈為溶劑，經(jīng)逐 級(jí)稀釋制備成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，然后分別加入一定量的內(nèi)標(biāo)溶液，制備成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 樣品溶液的制備:準(zhǔn)確稱(chēng)取一定質(zhì)量的食物樣品，加一定體積的水進(jìn)行超聲萃取， 得到萃取液;然后使用C18固相萃取柱進(jìn)行凈化，得到凈化液;再以二氯甲烷為溶劑，使用硅 藻土固相萃取柱對(duì)凈化液進(jìn)行反萃取，得到淋洗液;最后對(duì)淋洗液進(jìn)行濃縮，得樣品溶液； (4) 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析：用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀GC-MS/MS對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和 樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)分析； (5) 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制及樣品結(jié)果的計(jì)算。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述 的內(nèi)標(biāo)溶液的制備包括以下步驟： (1) 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱(chēng)取〇. 5g D5-EC，精確至0. lmg，于lOOmL的容量瓶中，用乙腈溶解 并定容至刻度； (2) 內(nèi)標(biāo)溶液:準(zhǔn)確移取0 . lmL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于lOOmL的容量瓶中，用乙腈稀釋并定容至 刻度。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備包括以下步驟： (1) 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱(chēng)取〇. 5g EC，精確至0. lmg，于lOOmL的容量瓶中，用乙腈溶 解并定容至刻度； (2) 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確移取O.lmL-級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于lOOmL的容量瓶中，用乙腈稀 釋并定容至刻度； (3) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別準(zhǔn)確移取二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液15yL、30yL、60yL、120yL、240yL、480y L和960yL，至lOOmL的容量瓶中，再分別準(zhǔn)確加入500yL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈稀釋并定容至刻 度，得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述 的樣品溶液的制備包括以下步驟： (1) 樣品萃取:準(zhǔn)確稱(chēng)取1 〇g食物樣品，于1 OOmL錐形瓶中，并加入40mL超純水和200yL內(nèi) 標(biāo)溶液，使用漩渦混合器將樣品分散均勻，再置于超聲波發(fā)生器內(nèi)超聲萃取20min，得到萃 取溶液； (2) 萃取液凈化:預(yù)先對(duì)規(guī)格為2g/10mL的C18SPE小柱進(jìn)行活化，即先加入10mL甲醇，抽 干，然后再加入10mL超純水，快速抽下，并使C18小柱上篩板留有少量水，待準(zhǔn)備好C18SPE小 柱后，移入10mL萃取液，使其保持1滴/秒左右的速度滴下，待小柱上篩板留有少量溶液時(shí)， 再加入10mL混合溶劑9mL超純水+lmL甲醇進(jìn)行淋洗，使其保持1滴/秒左右的速度滴下，收集 淋洗液，視為凈化液； (3) 凈化液反萃取:預(yù)先對(duì)填料為20g的硅藻土 SPE小柱進(jìn)行活化，即移入50mL二氯甲烷 進(jìn)行淋洗活化，盡量抽干，待SPE小柱準(zhǔn)備好后，將上述凈化液全部移入SPE小柱，用一濃縮 瓶接收淋洗液;然后再用70mL二氯甲烷多次對(duì)小柱進(jìn)行淋洗，依靠二氯甲烷密度比水大的 特征，自行滴下，收集所有留下來(lái)的液體，視為淋洗液； (4)淋洗液濃縮:在55 °C、常壓條件下，對(duì)淋洗液濃縮到lmL左右，得到樣品進(jìn)樣溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述 的GC-MS/MS分析，其儀器分析條件為:采用規(guī)格為30m X 0.25mm X 0.25μπι的HP-INNOWAX毛細(xì) 管色譜柱;載氣為氦氣，恒流速度為1. OmL/min;進(jìn)樣方式:進(jìn)樣量為lyL，脈沖不分流，進(jìn)樣 脈沖壓力為25psi，時(shí)間為lmin;進(jìn)樣口溫度為240°C ;傳輸線溫度為260°C ;升溫程序?yàn)槌跏?溫度為50°C，以5°C/min的速率升高至150°C，再以10°C/min的速率升高至240°C，保持5min， 其質(zhì)譜分析條件為：電離方式為EI源，正離子模式;離子源溫度:230°C ;四極桿溫度:均 為150 °C ;碰撞氣:氮?dú)?，流?.5mL/min，載氣氦氣流速為2.25mL/min;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM模式， 詳細(xì)參數(shù)列于下表： 目標(biāo)物的MRM參數(shù)情況6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，所述 的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及結(jié)果計(jì)算如下：以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中EC與D5-EC濃度之比為橫坐標(biāo)，以色譜 圖中EC與D5-EC峰面積之比為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，將相同條件 下測(cè)得的樣品溶液中EC與D5-EC色譜峰面積比，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，根據(jù)下列公式求得發(fā)酵 食品中痕量EC的含量： 式中：W一一發(fā)酵食品中EC的含量，單位為微克每千克yg/kg; A--EC的峰面積； As--D5-EC的峰面積； b--標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的截距； Ms--添加內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量，單位為微克yg; a一一標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率； Μ一一發(fā)酵食品的質(zhì)量，單位為支。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯EC的方法，具體來(lái)說(shuō)是涉及一種基于氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的方法，包括內(nèi)標(biāo)溶液、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品溶液的制備，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析，以及測(cè)定結(jié)果的計(jì)算等步驟。本發(fā)明采用目標(biāo)物的氘代物為內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行定量，經(jīng)優(yōu)化后的檢測(cè)方法響應(yīng)靈敏、定量分析準(zhǔn)確，有效地減少了因樣品基質(zhì)復(fù)雜帶來(lái)的干擾，所采用的分析儀器條件使得目標(biāo)物具有較好的信號(hào)響應(yīng)，并且具有較好的線性相關(guān)性，檢出限為0.0259？ng/g，重復(fù)性（RSD）為9.10%，加標(biāo)回收率在84.87%～105.43%之間，說(shuō)明本方法的靈敏度高，重復(fù)性和回收率較好，適合于發(fā)酵食品中痕量氨基甲酸乙酯的定量分析。
【IPC分類(lèi)】G01N30/02, G01N30/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105628815
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511010260
【發(fā)明人】廖惠云, 莊亞?wèn)|, 王晨輝, 劉獻(xiàn)軍, 熊曉敏, 石懷, 王珂清, 李朝建, 張媛, 韓開(kāi)冬, 尤曉娟, 張華
【申請(qǐng)人】江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
【公開(kāi)日】2016年6月1日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日