一種混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于飼料添加劑中成分分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種混合型飼料添加 劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 高效液相色譜法是用高壓輸液栗將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合 溶劑、緩沖液等流動(dòng)相栗入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入待測樣品，由流動(dòng)相帶入柱 內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。這種方法 已成為化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)， 是分析化學(xué)、生物化學(xué)和環(huán)境化學(xué)工作者手中必不可少的工具。
[0003] 新甲基橙皮苷二氫查耳酮，簡稱NHDC，淡黃色粉末，是一種具有苦味抑制和風(fēng)味改 良的功能性甜味劑。甜味來得慢，后味持續(xù)時(shí)間長，甜味清爽且愉快，能有效降低人體和動(dòng) 物體對(duì)動(dòng)物飼料中可能帶有的苦味的敏感程度。NHDC甜度達(dá)到最大值的時(shí)間要比糖精和蔗 糖都長，而且持續(xù)時(shí)間也較長。
[0004] 在飼料添加劑領(lǐng)域，可使飼料口味超甜，增大崽豬食欲，明顯促進(jìn)其生長和降低每 千克增重的飼料消耗。新橙皮苷二氫查耳酮與別的甜味劑復(fù)配使用時(shí)，尤其是與糖精復(fù)配 時(shí)，能產(chǎn)生優(yōu)良的協(xié)同作用，而糖精的金屬余味可能會(huì)造成嚴(yán)重的問題(特別是當(dāng)其用于仔 豬日糧中時(shí)），足夠濃度的NHDC是提供余味掩蓋作用所必須的。然而，目前飼料添加劑中新 甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測沒有國家標(biāo)準(zhǔn)，也沒有現(xiàn)成的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：怎樣提供一種混 合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，用以彌補(bǔ)目前尚沒有相關(guān)檢 測方法的不足，使該方法能夠?qū)旌闲惋暳咸砑觿┲行录谆绕ぼ斩洳槎窟M(jìn)行精 準(zhǔn)定量，且具有無需進(jìn)行復(fù)雜的前處理、檢測結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確、高效、穩(wěn)定的特點(diǎn)。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種混合型飼料添加劑中新 甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，包括如下步驟：
[0007] 1)采用甲醇水溶液作為溶劑，配制梯度濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶 液；
[0008] 2)采用液相色譜法對(duì)步驟1)配制的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測， 得到新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，以新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;其中，色譜條件為采用C 18液相色譜柱、流動(dòng)相為 甲醇水溶液、檢測波長為282nm;
[0009] 3)向混合型飼料添加劑中加入所述流動(dòng)相，并進(jìn)行超聲處理，得到樣品處理液；
[0010] 4)將步驟3)得到的樣品處理液在與步驟2)相同的液相色譜條件下進(jìn)行檢測，得到 新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，根據(jù)步驟2)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品處理液中 的新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度，并結(jié)合所述樣品處理液的體積和樣品質(zhì)量，計(jì)算出混合 型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。
[0011] 相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0012] 1、為了彌補(bǔ)目前尚沒有針對(duì)混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量 檢測方法的不足，本發(fā)明考慮到新甲基橙皮苷二氫查耳酮難溶于水的特性，以甲醇水溶液 作為流動(dòng)相，用該流動(dòng)相對(duì)樣品中新甲基橙皮苷二氫查耳酮進(jìn)行提取，并根據(jù)樣品中各成 分組成的性質(zhì)，選擇C 18柱作為固定相，并通過創(chuàng)造性的研究得出適用于本發(fā)明混合型飼料 添加劑分離的色譜條件，使得各成分在該色譜條件下能充分分離開，在檢測波長282nm條件 下新甲基橙皮苷二氫查耳酮能夠穩(wěn)定出峰，出峰時(shí)間在10~20分鐘之間，出峰不會(huì)拖尾、重 疊，不會(huì)有干擾峰出現(xiàn)，進(jìn)而使本發(fā)明檢測結(jié)果精確，可靠性高。
[0013] 2、本發(fā)明先對(duì)不同濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，避免了單 點(diǎn)計(jì)算帶來的誤差，進(jìn)而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠，制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)更高，為后 續(xù)樣品的檢測奠定了可靠的定量基礎(chǔ)。
[0014] 3、本發(fā)明無需進(jìn)行復(fù)雜的樣品前處理，只需采用甲醇水流動(dòng)相對(duì)混合型飼料添加 劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮進(jìn)行提取，前處理過程更加簡單，本發(fā)明還研究出提取過程 中最佳料液比和超聲時(shí)間，在此條件下新甲基橙皮苷二氫查耳酮提取最完全，能夠保證良 好的提取效果，進(jìn)而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。
[0015] 4、本發(fā)明檢測方法使用的設(shè)備和試劑均為通用設(shè)備，適用于飼料廠進(jìn)行大批量自 檢，具有良好的應(yīng)用推廣前景。
【附圖說明】
[0016] 圖1為本發(fā)明方法新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實(shí)施例和說明書附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。本實(shí)施案例在以 本發(fā)明技術(shù)為前提下進(jìn)行實(shí)施，現(xiàn)給出詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，來說明本發(fā)明 具有創(chuàng)造性，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于以下的實(shí)施例。
[0018] 本實(shí)施例主要設(shè)備有分析天平、高效液相色譜和一些常見實(shí)驗(yàn)室玻璃儀器;所用 的試劑有色譜級(jí)甲醇、二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)品，所用的其它試劑均為色譜純級(jí)試劑，所用水為純 水。
[0019] -、本發(fā)明混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，包括 如下步驟：
[0020] 1)采用甲醇水溶液作為溶劑，配制梯度濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶 液；
[0021] 2)采用液相色譜法對(duì)步驟1)配制的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測， 得到新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，以新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;其中，色譜條件為采用C 18液相色譜柱、流動(dòng)相為 甲醇水溶液、檢測波長為282nm;
[0022] 3)向混合型飼料添加劑中加入所述流動(dòng)相，并進(jìn)行超聲處理，得到樣品處理液；
[0023] 4)將步驟3)得到的樣品處理液在與步驟2)相同的液相色譜條件下進(jìn)行檢測，得到 新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，根據(jù)步驟2)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品處理液中 的新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度，并結(jié)合所述樣品處理液的體積和樣品質(zhì)量，計(jì)算出混合 型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。
[0024] 上述步驟1)中為配制濃度依次為0 ·1、0·2、0·3、0· 4和0 · 5mg/mL的新甲基橙皮苷二 氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，這樣得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性更好，使得樣品的檢測計(jì)算結(jié)果更加 準(zhǔn)確。
[0025] 上述甲醇水溶液中甲醇和水的體積比為40~60:60~40,過濾后備用。選擇這樣的 流動(dòng)相，有利于樣品中各組分充分分離開，且新甲基橙皮苷二氫查耳酮的出峰時(shí)間合適，為 10~20分鐘。
[0026] 上述C18液相色譜柱規(guī)格為250mm長X 4.6mm內(nèi)徑，填料粒度為5μπι。
[0027] 上述液相色譜檢測過程中控制柱溫為室溫，流動(dòng)相流速為0.8~1.5mL/miη，進(jìn)樣 量為20~30yL。
[0028] 上述步驟3)將混合型飼料添加劑與所述流動(dòng)相按照3~5g:100mL的質(zhì)量體積比混 合，并進(jìn)行超聲處理20~60min，得到樣品處理液。這樣的提取條件，使得待檢測樣品中新甲 基橙皮苷二氫查耳酮提取更加完全，檢測結(jié)果更加真實(shí)可靠。
[0029] 上述混合型飼料添加劑為以二氧化硅和/或蛭石為載體的混合型飼料添加劑，特 別是指甜味劑。
[0030] 上述得到的樣品處理液如果經(jīng)過本發(fā)明液相色譜方法檢測，檢測的282nm處吸光 度值最大大于〇. 8，則對(duì)樣品處理液進(jìn)行一定的濃度稀釋后再重新進(jìn)行檢測，這樣檢測結(jié)果 更加準(zhǔn)確可靠。
[0031] 本發(fā)明檢測原理:采用新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇水流動(dòng)相配制成 梯度濃度的二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，用液相色譜儀在本發(fā)明設(shè)定的色譜條件下對(duì)各濃度的標(biāo) 準(zhǔn)溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量進(jìn)行測定，并得到新甲基橙皮苷二氫