一種六神曲的薄層色譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥材檢測領(lǐng)域，尤其設(shè)及六神曲的薄層色譜檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 六神曲又名六曲、神曲，最早收載于《藥性論》，部頒標(biāo)準(zhǔn)其處方組成為辣寥500g， 蒼耳草500g，青葛500g，苦杏仁lOOg，赤小豆lOOg，麥教5000g，面粉2500g，具有健脾和胃、 消食調(diào)中的功效。
[0003] 六神曲臨床主要用于因飲食失節(jié)，食積停滯所引起的腕腹脹滿，嘔吐瀉頻等消化 不良癥狀。僅《中國藥典》2010版中含六神曲的成方制劑就有74個(gè)，而部頒標(biāo)準(zhǔn)中含六神 曲的成方制劑更有326個(gè)之多，是傳統(tǒng)發(fā)酵曲劑中應(yīng)用最為廣泛的一種，市場需求量大。
[0004] 目前對(duì)于六神曲的研究主要集中在消化酶含量及消化功能上，質(zhì)量評(píng)價(jià)方面憑感 觀和經(jīng)驗(yàn)對(duì)六神曲進(jìn)行鑒別，缺乏可量化的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品的質(zhì)量和安全 已成為目前六神曲生產(chǎn)中急需解決的課題。部頒標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)中僅有處方、制法、性狀 及用法用量等簡單描述，缺乏有效成分鑒別及水分、灰分等常規(guī)檢查項(xiàng)目，難W控制藥材質(zhì) 量。 陽〇化]因此，需要一種能更全面、準(zhǔn)確、可靠反映六神曲藥材質(zhì)量的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明提供一種六神曲的薄層色譜檢測方法，包括W下步驟：
[0007] (1)制備供試品溶液：
[0008] 取待檢藥材粉末，加入甲醇提取，過濾，濃縮，甲醇定容，作為供試品溶液；
[0009] 似制備對(duì)照品溶液：
[0010] W東賞窘內(nèi)醋對(duì)照品制備對(duì)照品溶液；
[0011] 或者，W東賞窘內(nèi)醋對(duì)照品和陰性對(duì)照藥材分別制備對(duì)照品溶液；所述陰性對(duì)照 藥材是按照下述方法制備得到的藥材：取六神曲的原料藥，所述原料藥中不包括青葛，按照 六神曲的制備工藝制備；
[001引 做薄層檢測：
[0013] 分別將供試品溶液和對(duì)照品溶液在薄層板上點(diǎn)樣，W石油酸-乙酸乙醋-甲酸= 巧~7) : (3. 5~4.W: (0. 05~0.巧）為展開劑展開，檢視，比對(duì)即可。優(yōu)選的展開劑為為 石油酸-乙酸乙醋-甲酸=6 :4 :0. 1。
[0014] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，所述粉末為過40目篩的粉末。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，提取時(shí)，所述甲醇與待檢藥材的體積質(zhì)量比為5:1血/g。 陽016] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，定容時(shí)，所述甲醇與待檢藥材的體積質(zhì)量比為0.25:1血/ 邑。
[0017] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，所述提取是超聲提取。更進(jìn)一步地，所述超聲提取的時(shí)間 是20分鐘。
[001引進(jìn)一步地，步驟（3)中，所述點(diǎn)樣的點(diǎn)樣量是5yL。
[0019] 進(jìn)一步地，步驟（3)中，所述薄層板是硅膠G板。
[0020] 進(jìn)一步地，步驟（3)中，所述石油酸為沸程60-90°C的石油酸。
[0021] 進(jìn)一步地，步驟（3)中，所述檢視的波長是365nm。
[0022] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，W東賞窘內(nèi)醋對(duì)照品制備對(duì)照品溶液的方法為：取東賞窘 內(nèi)醋對(duì)照品，甲醇溶解；W陰性對(duì)照藥材制備對(duì)照品溶液的方法為：按照制備供試品溶液 相同的方法，取陰性對(duì)照藥材粉末，甲醇提取，過濾，濃縮，甲醇定容。
[0023] 六神曲是傳統(tǒng)發(fā)酵制劑，青葛、辣寥、蒼耳草、苦杏仁、赤小豆為主要原料，組成復(fù) 雜。六神曲的原料藥材質(zhì)量對(duì)六神曲的質(zhì)量有著較大的影響，有必要對(duì)運(yùn)些原料藥材的質(zhì) 量進(jìn)行監(jiān)控。但是上述原料藥材在六神曲中的比例較小，同時(shí)原料藥材在發(fā)酵過程中藥材 成分會(huì)發(fā)生一定的變化，許多成分難W檢測，找到一個(gè)合適的檢測指標(biāo)來監(jiān)控原料藥材的 質(zhì)量是困難的。
[0024] 然而，本發(fā)明的六神曲薄層色譜檢測方法，選擇到了合適的對(duì)照品和展開條件，不 但將六神曲中的多個(gè)成分有效分離開來，還找到了東賞窘內(nèi)醋運(yùn)樣一個(gè)可W被檢測并且檢 測結(jié)果穩(wěn)定的指標(biāo)。同時(shí)，東賞窘內(nèi)醋還是青葛的主要藥效成分之一，可W通過東賞窘內(nèi)醋 來準(zhǔn)確反映處方中的青葛質(zhì)量，從而可W準(zhǔn)確、可靠地監(jiān)控六神曲藥材的質(zhì)量，為臨床療效 提供了有效保障。
[0025]由于六神曲是W多種中藥材為原料制得的發(fā)酵產(chǎn)品，沒有標(biāo)準(zhǔn)品。為了更全面地 監(jiān)控六神曲藥材的質(zhì)量并且證明本發(fā)明的專屬性，發(fā)明人自制了不含青葛的陰性對(duì)照藥 材，可W與東賞窘內(nèi)醋對(duì)照品共同作為對(duì)照，從而更全面地監(jiān)控六神曲藥材的質(zhì)量。
[00%] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可W做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0027] W下通過實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[00測圖1為實(shí)施例1檢測條件下，待檢藥材和對(duì)照品的薄層色譜圖：1-10為不同批次 六神曲樣品；S:東賞窘內(nèi)醋；Y:陰性對(duì)照藥材。
[0029] 圖2為對(duì)比例1檢測條件下，待檢藥材和對(duì)照品的薄層色譜圖：1-3為不同批次六 神曲樣品；S:東賞窘內(nèi)醋。
[0030] 圖3為對(duì)比例2檢測條件下，待檢藥材和對(duì)照品的薄層色譜圖：1-3為不同批次六 神曲樣品；S:東賞窘內(nèi)醋。
【具體實(shí)施方式】 陽03U材料與試劑：東賞窘內(nèi)醋（中國食品藥品檢定研究院批號(hào)：110768-200504);甲 醇、石油酸（沸程60-90°C)、二氯甲燒、乙酸乙醋、冰乙酸均為分析純；水為超純水。表1為 10批六神曲樣品的來源。 陽0巧表1樣品來源
[0033]
[0034] *注輔正：四川輔正藥業(yè)有限責(zé)任公司千方：四川千方中藥飲片有限公司
[0035]陰性對(duì)照藥材是按照下述方法制備得到的藥材：取六神曲的原料藥，所述原料藥 中不包括青葛，按照六神曲的制備工藝制備。具體制備方法如下：取凈制的寥子草、蒼耳草 各50g加6倍量水，煎煮0.化，過濾，濃縮成清膏，另取苦杏仁lOg和赤小豆lOg粉碎成粗 粉，與面粉500g、麥教250g混和均勻，再將藥汁加入與藥粉攬拌均勻，W手捏成團(tuán)，擲之即 散為宜，制成方塊，發(fā)酵，干燥，即得。 陽〇36] 實(shí)施例1
[0037] (1)制備供試品溶液：
[0038]取待檢藥材粉末20g(過40目篩），加5倍量（100血）甲醇超聲20min，過濾，濾液 水浴濃縮，加甲醇定容至5mU作為供試品溶液。
[0039] (2)制備對(duì)照品溶液：
[0040] 取東賞窘內(nèi)醋對(duì)照品，用甲醇制成每ImL含0.Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0041]取陰性對(duì)照藥材粉末20g(過40目篩），加5倍量（lOOmL)甲醇超聲20min，過濾， 濾液水浴濃縮，加甲醇定容至5mU作為陰性對(duì)照藥材溶液。
[00創(chuàng) 做薄層檢測
[0043] 照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版1部附錄附錄VIB薄層色譜法）試驗(yàn)，分別 吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照藥材溶液5μ以分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W 石油酸（沸程60-90°C)-乙酸乙醋-甲酸=6 :4 :0. 1 (體積比）為展開劑，展開，取出，驚 干，在365nm下檢視，結(jié)果如圖1所示。
[0044] 從圖1可W看出，斑點(diǎn)清晰可見，分離度良好。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0045] 同時(shí)，陰性對(duì)照藥材的色譜上沒有明顯的東賞窘內(nèi)醋斑點(diǎn)，說明了東賞窘內(nèi)醋是 由青葛帶來的，從而我們選擇東賞窘內(nèi)醋為對(duì)照品是合適的，可W用來檢測六神曲中的青 葛質(zhì)量，進(jìn)而最終反映六神曲的質(zhì)量。
[0046] 對(duì)比例1
[0047] 按照實(shí)施例1相同的方法，區(qū)別在于步驟（3)的展開劑為環(huán)己燒-二氯甲燒-乙 酸乙醋-甲酸=6 :10 :7 :0. 1 (體積比），結(jié)果如圖2所示。
[0048] 從圖2可W看出，在該展開劑條件下，斑點(diǎn)擴(kuò)散，不能將各成分進(jìn)行有效的分離 W例 對(duì)比例2 W50] 按照實(shí)施例1相同的方法，區(qū)別在于步驟（3)的展開劑為石油酸（沸程 60-90°C)-乙酸乙醋-甲酸=7 :2 :0. 1 (體積比），結(jié)果如圖3所示。
[00川從圖3可w看出，在該展開劑條件下，斑點(diǎn)擴(kuò)散，Rf值較小，不能將各成分進(jìn)行有 效的分離。
[0052] 綜上所述，本發(fā)明的六神曲薄層色譜檢測方法，選擇到了合適的對(duì)照品和展開條 件，將六神曲中的多個(gè)成分有效分離開來，找到了穩(wěn)定可靠的指標(biāo)成分東賞窘內(nèi)醋，可W準(zhǔn) 確、可靠地監(jiān)控六神曲藥材的質(zhì)量，為臨床療效提供了有效保障。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種六神曲的薄層色譜檢測方法，包括以下步驟： (1) 制備供試品溶液： 取待檢藥材粉末，加入甲醇提取，過濾，濃縮，甲醇定容，作為供試品溶液； (2) 制備對(duì)照品溶液； 以東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品制備對(duì)照品溶液； 或者，以東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品和陰性對(duì)照藥材分別制備對(duì)照品溶液；所述陰性對(duì)照藥材 是按照下述方法制備得到的藥材：取六神曲的原料藥，所述原料藥中不包括青蒿，按照六神 曲的制備工藝制備； (3) 薄層檢測： 分別將供試品溶液和對(duì)照品溶液在薄層板上點(diǎn)樣，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸=(5~ 7) : (3. 5~4. 5) : (0. 05~0. 15)為展開劑展開，檢視，比對(duì)即可。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，所述展開劑是 石油醚-乙酸乙酯-甲酸=6 :4 :0. 1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，所述粉末 為過40目篩的粉末。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，提取時(shí)， 所述甲醇與待檢藥材的體積質(zhì)量比為5:lmL/g。5. 根據(jù)權(quán)利要求1、2或4所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，定容時(shí)， 所述甲醇與待檢藥材的體積質(zhì)量比為〇. 25:lmL/g。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，所述提取 是超聲提取。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（3)中，所述點(diǎn)樣 的點(diǎn)樣量是5μL。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（3)中，所述石油 醚為沸程60-90°C的石油醚。9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（3)中，所述檢視 的波長是365nm〇10. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層色譜檢測方法，其特征在于：步驟（2)中， 以東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品制備對(duì)照品溶液的方法為：取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品，甲醇溶解； 以陰性對(duì)照藥材制備對(duì)照品溶液的方法為：按照制備供試品溶液相同的方法，取陰性 對(duì)照藥材粉末，甲醇提取，過濾，濃縮，甲醇定容。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種六神曲的薄層色譜檢測方法，包括以下步驟：(1)制備供試品溶液：取待檢藥材粉末，加入甲醇提取，過濾，濃縮，甲醇定容，作為供試品溶液；(2)制備對(duì)照品溶液：以東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品制備對(duì)照品溶液；或者，以東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品和陰性對(duì)照藥材分別制備對(duì)照品溶液；(3)薄層檢測：分別將供試品溶液和對(duì)照品溶液在薄層板上點(diǎn)樣，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸＝(5～7)：(3.5～4.5)：(0.05～0.15)為展開劑展開，檢視，比對(duì)即可。本發(fā)明的六神曲薄層色譜檢測方法，能將六神曲中的多個(gè)成分有效分離開來，找到了穩(wěn)定可靠的指標(biāo)成分東莨菪內(nèi)酯，可以準(zhǔn)確、可靠地監(jiān)控六神曲藥材的質(zhì)量，為臨床療效提供了有效保障。
【IPC分類】G01N30/90
【公開號(hào)】CN105403653
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510819795
【發(fā)明人】吳珊珊, 胡昌江, 李夢琪, 龔曉猛, 陳志敏, 胡麟
【申請(qǐng)人】成都中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年11月23日