所使用的方案可以是預(yù)編程的，例如， 可以駐留在該裝置上。在實(shí)施方式中，控制器控制裝置的任何一個(gè)或多個(gè)組件或單元的操 作時(shí)所使用的方案可以從另一設(shè)備，或從用戶，或從實(shí)驗(yàn)室，或從網(wǎng)絡(luò)，或從云獲得。在實(shí)施 方式中，控制器控制裝置的任何一個(gè)或多個(gè)組件或單元的操作時(shí)所使用的方案可以根據(jù)來 自另一設(shè)備，或來自用戶，或來自實(shí)驗(yàn)室、或來自網(wǎng)絡(luò)、或來自云的信息或指令而更新，或者 可以是可根據(jù)所述信息或指令來更新的。在實(shí)施方式中，裝置可以經(jīng)由用戶界面來接收信 息，或指令，或更新，或方案。在實(shí)施方式中，裝置可以經(jīng)由通信組裝件來接收信息，或指令， 或更新，或方案。
[0118] 在實(shí)施方式中，裝置以及包括或使用這樣的裝置的系統(tǒng)和方法可以包括顯示器， 該顯示器有效地為用戶提供關(guān)于裝置操作的信息、關(guān)于由裝置進(jìn)行的測(cè)定進(jìn)展的信息或者 關(guān)于由裝置進(jìn)行的測(cè)定結(jié)果的信息。在實(shí)施方式中，顯示器可以包括視覺顯示，或者可以包 括打印顯示，或者可以包括音頻信號(hào)（可以包括如由用戶說出的語(yǔ)音一樣可理解的音頻信 號(hào)）或者可以包括這樣的顯示的任何組合或所有這樣的顯示。在實(shí)施方式中，顯示器可以 包含用戶界面。在顯示器包含用戶界面的實(shí)施方式中，裝置可以例如接收信息、命令、方案 或其他輸入。例如，用戶界面可以通信關(guān)于第二或后續(xù)生物樣品的請(qǐng)求。例如，用戶界面可 以通信關(guān)于獲得第二或后續(xù)生物樣品的指令。
[0119] 在實(shí)施方式中，裝置以及包括或使用這樣的裝置的系統(tǒng)和方法可以包括通信組裝 件，該通信組裝件有效地與用戶、另一裝置、實(shí)驗(yàn)室、網(wǎng)絡(luò)、云或其他通信目標(biāo)中的一個(gè)或多 個(gè)進(jìn)行通信。在實(shí)施方式中，通信組裝件可以向通信目標(biāo)提供關(guān)于裝置操作的信息、關(guān)于由 裝置進(jìn)行的測(cè)定進(jìn)展的信息或者關(guān)于由裝置進(jìn)行的測(cè)定結(jié)果的信息。在實(shí)施方式中，通信 組裝件可被配置用于允許裝置例如接收來自外界來源（舉例而言，諸如用戶、另一裝置、實(shí) 驗(yàn)室、網(wǎng)絡(luò)、云或其他通信源）的信息、命令、方案或其他輸入。
[0120] 在實(shí)施方式中，方案可以包括關(guān)于以下各項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)的指令：一個(gè)樣品的 制備；多個(gè)樣品的制備；進(jìn)行一個(gè)化學(xué)反應(yīng)；進(jìn)行多個(gè)化學(xué)反應(yīng)；進(jìn)行多個(gè)化學(xué)反應(yīng)的順 序；進(jìn)行一個(gè)臨床測(cè)試；進(jìn)行多個(gè)臨床測(cè)試；進(jìn)行多個(gè)臨床測(cè)試的順序；檢測(cè)一種分析物的 存在；檢測(cè)多種分析物的存在；檢測(cè)多種分析物的存在的順序；檢測(cè)一種分析物的濃度；檢 測(cè)多種分析物的濃度；檢測(cè)多種分析物的濃度的順序；預(yù)處理數(shù)據(jù)；以及處理數(shù)據(jù)中步驟 的順序。在實(shí)施方式中，方案信息可以根據(jù)所傳輸?shù)臄?shù)據(jù)而改變，該數(shù)據(jù)根據(jù)所述方案從所 述裝置的所述外殼內(nèi)的所述生物樣品獲得。
[0121] 在以下實(shí)施例中進(jìn)一步描述了本文公開的方法和測(cè)定的實(shí)施方式。 實(shí)施例1-HIV測(cè)宙
[0122] 用于在生物樣品中檢測(cè)人類免疫缺陷病毒（HIV)的測(cè)定通常報(bào)告陰性結(jié)果，即， 在樣品中未檢測(cè)到HIV。然而，由于在生物樣品中檢測(cè)該病毒是如此重要，并且對(duì)于從中獲 得樣品的受試者可能有如此可怕的后果，所以申請(qǐng)人公開了用于在初始測(cè)定為陽(yáng)性結(jié)果的 基礎(chǔ)上進(jìn)行確認(rèn)性跟進(jìn)測(cè)試的方法。在實(shí)施方式中，可以在向醫(yī)療保健提供者或向受試者 報(bào)告陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果之前進(jìn)行這樣的確認(rèn)性跟進(jìn)測(cè)試。在實(shí)施方式中，可以在向醫(yī)療保健提 供者或向受試者報(bào)告陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果的同時(shí)或之后進(jìn)行這樣的確認(rèn)性跟進(jìn)測(cè)試。
[0123] 在實(shí)施方式中，可以對(duì)從受試者獲得的生物樣品進(jìn)行抗HIV抗體篩選測(cè)試；例如， 可以對(duì)從受試者獲得的血液樣品進(jìn)行抗HIV抗體篩選測(cè)試。在實(shí)施方式中，可以對(duì)從受試 者獲得的、除了血液樣品之外的體液樣品進(jìn)行抗HIV抗體篩選測(cè)試；這樣的樣品可以例如 是尿液、痰、精液、淚液、組織液的樣品，從鼻拭子獲得的樣品，從咽喉拭子獲得的樣品，從陰 道拭子獲得的樣品或者其他樣品。在實(shí)施方式中，獲得足量的生物樣品以便在無需獲得進(jìn) 一步樣品以便進(jìn)行進(jìn)一步測(cè)定的情況下允許對(duì)樣品或樣品的一部分的自動(dòng)反射測(cè)試。在實(shí) 施方式中，僅獲得一個(gè)或多個(gè)初始測(cè)定所需要的生物樣品量；在這樣的實(shí)施方式中，如果需 要，必須在稍后獲得進(jìn)一步生物樣品，以便進(jìn)行視初始測(cè)定的結(jié)果而定的進(jìn)一步測(cè)定。
[0124] 例如，基于抗體的測(cè)定可以包括使樣品與底物接觸，靶抗原特異性抗體結(jié)合至該 底物。在這樣的基于抗體的測(cè)定的實(shí)施方式中，可以用包含已知量的標(biāo)記的偶聯(lián)物的試劑 混合或稀釋樣品，其中標(biāo)記的偶聯(lián)物與所結(jié)合的抗體結(jié)合。例如，標(biāo)記的偶聯(lián)物可以是包含 與可檢測(cè)標(biāo)記物共價(jià)連接的目標(biāo)分析物的偶聯(lián)物。繼而可以將樣品和試劑的混合物添加至 包含抗體所結(jié)合的底物的腔室，并為目標(biāo)分析物和分析物-偶聯(lián)物與底物的結(jié)合留有充足 的時(shí)間來溫育。在溫育期之后，可以用洗滌溶液來洗滌該腔室以便洗出任何剩余的未結(jié)合 的分析物和未結(jié)合的分析物-偶聯(lián)物。洗滌之后，可以確定結(jié)合至底物的、標(biāo)記的偶聯(lián)物的 量，并確定樣品中目標(biāo)分析物的量。例如，在缺乏任何目標(biāo)時(shí)通過與所結(jié)合的、標(biāo)記的偶聯(lián) 物的量比較，以及可選地在存在一個(gè)或多個(gè)已知量的目標(biāo)時(shí)通過與所結(jié)合的、標(biāo)記的偶聯(lián) 物的量比較，或者以其他方式通過與對(duì)照值如對(duì)照曲線比較，可以進(jìn)行這樣的確定。例如， 洗滌之后，可以將允許檢測(cè)標(biāo)記物的試劑添加至腔室（例如，在標(biāo)記物是在底物存在時(shí)發(fā) 光的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物時(shí)，允許檢測(cè)該標(biāo)記物的試劑可以包括所需要的底物）。
[0125] 在實(shí)施方式中，抗HIV抗體篩選測(cè)試可以包括抗HIV-I抗體篩選測(cè)試。在實(shí)施方 式中，抗HIV抗體篩選測(cè)試可以包括抗HIV-2抗體篩選測(cè)試。在實(shí)施方式中，抗HIV抗體篩 選測(cè)試可以包括抗HIV-I和抗HIV-2抗體篩選測(cè)試。在實(shí)施方式中，這樣的測(cè)定的可能結(jié) 果可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-I的存在是陰性的結(jié)果，以及可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-I 的存在是陽(yáng)性的結(jié)果；在這樣的實(shí)施方式中，正常結(jié)果包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-I的存在是 陰性的結(jié)果。在實(shí)施方式中，這樣的測(cè)定的可能結(jié)果可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-2的存在 是陰性的結(jié)果，以及可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-2的存在是陽(yáng)性的結(jié)果；在這樣的實(shí)施方 式中，正常結(jié)果包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-2的存在是陰性的結(jié)果。
[0126] 如本文所公開的，在這樣的測(cè)試的結(jié)果包括樣品針對(duì)HIV-I的存在是陰性或針對(duì) HIV-2的存在是陰性的結(jié)果的情況下，不自動(dòng)進(jìn)行進(jìn)一步HIV測(cè)試。如本文所公開的，在HIV 測(cè)試包括針對(duì)HIV-I和HIV-2的存在的測(cè)試并且這樣的測(cè)試的結(jié)果包括樣品針對(duì)HIV-I的 存在是陰性且針對(duì)HIV-2的存在是陰性的結(jié)果的情況下，不自動(dòng)進(jìn)行進(jìn)一步HIV測(cè)試。
[0127] 如本文所公開的，在這樣的測(cè)試的結(jié)果包括樣品針對(duì)HIV-I的存在是陽(yáng)性或者針 對(duì)HIV-2的存在是陽(yáng)性或者針對(duì)HIV-I和HIV-2的存在都是陽(yáng)性的結(jié)果的情況下，自動(dòng)進(jìn) 行進(jìn)一步HIV測(cè)試?？梢詫?duì)相同樣品或?qū)Ω郊訕悠愤M(jìn)行這樣的進(jìn)一步HIV測(cè)試。在對(duì)附加 樣品進(jìn)行進(jìn)一步HIV測(cè)試的實(shí)施方式中，該附加樣品可以是或可以獲自最初從受試者獲得 的樣品；或者，在實(shí)施方式中，進(jìn)一步樣品可以從受試者獲得并且用于進(jìn)一步HIV測(cè)試。
[0128] 在從初始HIV測(cè)試獲得陽(yáng)性結(jié)果之后自動(dòng)進(jìn)行進(jìn)一步HIV測(cè)試的實(shí)施方式中，該 進(jìn)一步HIV測(cè)試可以包括核酸測(cè)定。例如，在從初始HIV測(cè)試獲得陽(yáng)性結(jié)果之后自動(dòng)進(jìn)行 進(jìn)一步HIV測(cè)試的實(shí)施方式中，該進(jìn)一步HIV測(cè)試可以包括Western印跡法HIV測(cè)試。
[0129] 在實(shí)施方式中，這樣的進(jìn)一步HIV測(cè)試的可能結(jié)果可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-I 的存在是陰性或者針對(duì)HIV-2的存在是陰性或者針對(duì)HIV-I和HIV-2的存在都是陰性的結(jié) 果。在這樣的實(shí)施方式中，正常結(jié)果包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV的存在是陰性的結(jié)果。如本文 所公開的，在進(jìn)一步HIV測(cè)試的結(jié)果包括樣品針對(duì)HIV-I的存在是陰性或者針對(duì)HIV-2的 存在是陰性的結(jié)果的情況下，不自動(dòng)進(jìn)行進(jìn)一步HIV測(cè)試。如果適當(dāng)，可以向醫(yī)療保健提供 者或向受試者報(bào)告這樣的結(jié)果，其指示出從受試者獲得的生物樣品無 HIV。
[0130] 然而，在實(shí)施方式中，這樣的進(jìn)一步HIV測(cè)試的結(jié)果可以包括報(bào)告樣品針對(duì)HIV-I 的存在是陽(yáng)性或者針對(duì)HIV-2的存在是陽(yáng)性或者針對(duì)HIV-I和HIV-2的存在都是陽(yáng)性的結(jié) 果。
[0131] 然而，在進(jìn)一步HIV測(cè)試的結(jié)果包括樣品針對(duì)HIV-I的存在是陽(yáng)性或者針對(duì)HIV-2 的存在是陽(yáng)性的結(jié)果的情況下，這樣的結(jié)果指示出HIV存在于從受試者獲得的生物樣品 中。因此，這樣的結(jié)果指示出受試者可能患有HIV。如果適當(dāng)，可以向醫(yī)療保健提供者或向 受試者報(bào)告這樣的結(jié)果，其指示出從受試者獲得的生物樣品包含HIV。
[0132] 在針對(duì)HIV-I或HIV-2為陽(yáng)性結(jié)果的情況下可以指示附加測(cè)試。例如，由于HIV 是免疫系統(tǒng)的病癥，所以可以視陽(yáng)性HIV結(jié)果而進(jìn)行針對(duì)血液尤其是白細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè) 試，其中從患者獲得血液樣品中的血細(xì)胞。本文在后續(xù)實(shí)施例中提供了細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)試的實(shí) 施例。 實(shí)施例2-白細(xì)朐計(jì)數(shù)測(cè)宙
[0133] 在實(shí)施方式中，初始測(cè)定可以是確定從受試者獲得的血液樣品的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的測(cè) 定。例如，可以獲得白細(xì)胞計(jì)數(shù)作為全血細(xì)胞計(jì)數(shù)的部分。白細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定可以確定從受試 者獲得的血液的白細(xì)胞計(jì)數(shù)落在正常范圍之外，例如，可以低于每微升（yL)約2000個(gè)細(xì) 胞。在初始白細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定結(jié)果確定了血液樣品的白細(xì)胞計(jì)數(shù)在正常范圍之外的情況下， 可能需要反射血液測(cè)試。因此，申請(qǐng)人公開了用于在白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果落在預(yù)定范圍之外的 基礎(chǔ)上進(jìn)行確認(rèn)性跟進(jìn)測(cè)試的方法。在實(shí)施方式中，可以在向醫(yī)療保健提供者或受試者報(bào) 告初始白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果之前進(jìn)行這樣的確認(rèn)性跟進(jìn)測(cè)試。
[0134] 例如，針對(duì)成年男性受試者（例如，12歲以上的男性受試者）的正常范圍可以是 3200個(gè)白細(xì)胞/ μ L與10600個(gè)白細(xì)胞/ μ L之間。如果初始測(cè)試的結(jié)果是血液樣品具有少 于2000個(gè)白細(xì)胞/ μ L的白細(xì)胞計(jì)數(shù)（例如，1800個(gè)細(xì)胞/微升的白細(xì)胞計(jì)數(shù)），則可以進(jìn) 行反射血液測(cè)試。這樣的反射血液測(cè)試可以包括對(duì)受試者的血液的細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查，諸如對(duì) 來自受試者的血液樣品中的白細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查。在實(shí)施方式中，反射測(cè)定中檢查的血 液樣品可以是初始測(cè)試中檢查的血液樣品的一部分，例如，其中保留了樣品的一部分以供 進(jìn)一步測(cè)試。在實(shí)施方式中，反射測(cè)定中檢查的血液樣品可以是與初始測(cè)試中檢查的血液 樣品同時(shí)獲得的血液樣品，例如，其中獲得了第二血液樣品并將其保留以供進(jìn)一步測(cè)試。在 實(shí)施方式中，可以在獲得初始血液樣品的時(shí)間之后從受試者獲得后續(xù)的血液樣品以供反射 測(cè)試。在實(shí)施方式中，可以在確定初始測(cè)定的結(jié)果之后獲得后續(xù)的血液樣品。
[0135] 如以下實(shí)施例中更詳細(xì)地討論的，自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定可以用于鑒別、量化和分類 樣品中的白細(xì)胞。可以預(yù)處理血液樣品以便避免被紅細(xì)胞和血小板干擾，例如，通過導(dǎo)致紅 細(xì)胞和血小板的膨脹和裂解，從而允許白細(xì)胞沉淀并附接至底物，或者通過其他方式。白細(xì) 胞可以與一種或多種細(xì)胞標(biāo)志物特異性的標(biāo)記物相接觸，因此有助于鑒別和分類白細(xì)胞。 這樣的標(biāo)記物可以包括諸如熒光標(biāo)記物等標(biāo)記物，以便于檢測(cè)標(biāo)記物和由其標(biāo)記的細(xì)胞。 實(shí)施例3-細(xì)朐計(jì)數(shù)法
[0136] 可以是視初始測(cè)試的結(jié)果而定的測(cè)定和測(cè)試可以包括觀察和描述生物樣品中的 細(xì)胞的測(cè)定和測(cè)試，包括鑒別細(xì)胞、確定一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)目或者確定是否存在 異常細(xì)胞或者是否存在一種或多種細(xì)胞類型的異常數(shù)目的測(cè)定和測(cè)試。這樣的測(cè)試和測(cè)定 可以利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法。
[0137] 細(xì)胞計(jì)數(shù)法可以包括制備和分析生物樣品中細(xì)胞的二維圖像，其中細(xì)胞受到標(biāo)記 (例如，用熒光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、酶標(biāo)記物或其他標(biāo)記物來標(biāo)記）并板涂（例如，使 其沉淀于底物上）并且由相機(jī)成像。該相機(jī)可以包括鏡頭，并且可以附接至顯微鏡或與顯 微鏡結(jié)合使用。細(xì)胞可以通過其所附接的標(biāo)記物（例如，從由標(biāo)記物發(fā)射的光）在二維圖 像中得以鑒別。
[0138] 將通過手指針刺獲得的80微升全血加載至預(yù)裝載有2mg/mlEDTA的帶蓋器皿內(nèi)。 該帶蓋器皿以1200x g離心5分鐘，以使血細(xì)胞與血漿分離。帶蓋器皿的離心導(dǎo)致該帶蓋 器皿中的血液樣品分離成兩個(gè)主要的組分（從帶蓋器皿的上部到底部）：1)血漿，和2)壓 積的血細(xì)胞。該過程確保了沒有血液小滴保持分離，而是與液體的主體合并在一起。另外， 該過程將細(xì)胞與血漿的元素分離開來，從而減少代謝并允許樣品的更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。
[0139] 將離心后的帶蓋器皿加載至包含多種流體隔離的試劑、端頭和細(xì)胞計(jì)數(shù)容槽的筒 匣內(nèi)。該筒匣包含測(cè)定所需的所有試劑。將筒匣加載到至少配備有離心機(jī)、移液管和用來 加載容槽的平臺(tái)的設(shè)備內(nèi)。該設(shè)備內(nèi)的移液管具有多個(gè)管嘴，一些管嘴與其他一些管嘴具 有不同的尺寸。
[0140] 在該設(shè)備內(nèi)，移液管上的管嘴降至容槽承載工具上，使之接合該承載工具上的對(duì) 應(yīng)孔。隨后將該工具移動(dòng)至筒匣并降至細(xì)胞計(jì)數(shù)器容槽上。繼而該工具上的針腳能夠接合 容槽上的對(duì)應(yīng)孔并將其提起。將容槽轉(zhuǎn)移至該設(shè)備中其他位置的加載站。
[0141] 接下來，在設(shè)備內(nèi)部，使移液管的較大管嘴降至筒匣內(nèi)，以與儲(chǔ)存在該筒匣中的移 液管端頭相接合。然后該移液管和端頭一起使用，以通過將移液管端頭定位于帶蓋器皿中 的樣品內(nèi)并反復(fù)將物質(zhì)吸入端頭及從端頭排出該物質(zhì)，從而混合帶蓋器皿內(nèi)的細(xì)胞和血 漿。一旦細(xì)胞在血漿中重懸浮，使得全血樣品充分混合，就吸取5微升混合的全血以提供整 分試樣用于測(cè)量該血液樣品的性質(zhì)。這5微升整分試樣用于針對(duì)樣品中的紅細(xì)胞和血小板 的測(cè)量。如下所述，除去這5微升整分試樣后剩余的樣品部分被用于針對(duì)樣品中的白細(xì)胞 的測(cè)量。
[0142] 將5微升全血分配到包含磷酸鹽緩沖鹽水和按重量計(jì)占2%的牛血清白蛋白的 混合物的器皿內(nèi)，以將全血稀釋20倍（產(chǎn)生100微升的稀釋樣品）。劇烈混合后，將5微 升該樣品轉(zhuǎn)移至另一器皿內(nèi)，該器皿包含以下標(biāo)記抗體試劑的混合物：與alexa fluor 647 (AF647)偶聯(lián)的抗-⑶235a、與藻紅蛋白（PE)偶聯(lián)的抗-⑶41和抗-⑶61。將該混合物 溫育5分鐘。隨后，將10微升該混合物與90微升包含〈0. 1重量％的兩性離子表面活性劑 的緩沖液相混合。該表面活性劑分子改變紅細(xì)胞膜的彎曲性質(zhì)，使得所有細(xì)胞都呈現(xiàn)穩(wěn)定 的球形形狀。這種變化是等體積的，因?yàn)樗玫木彌_液與細(xì)胞質(zhì)等滲；跨細(xì)胞膜不能發(fā)生流 體交換。再次溫育2分鐘后，將30微升該溶液與包含戊二醛、固定劑和IOum直徑的非熒光 微珠的溶液相混合。該混合物具有〇. 1 %戊二醛和每微升1000個(gè)微珠的最終濃度。戊二醛 快速固定細(xì)胞，從而防止細(xì)胞裂解和其他活性生物過程。
[0143] 移液管隨后與筒匣內(nèi)的端頭相接合，吸取7微升上述混合物，并將7微升混合物加 載至容槽中的通道內(nèi)，該容槽與承載工具一起放置在平臺(tái)上。將混合物加載至容槽中后，移 液管從筒匣中的器皿內(nèi)吸取10微升礦物油，并將一滴礦物油滴在加載的容槽通道的兩個(gè) 開口端。將礦物油添加至開放通道的末端，以防止液體從加載的容槽通道揮發(fā)。接下來，設(shè) 備水平的樣品處理裝置與容槽承載體/容槽組合相接合，并將該容槽承載體/容槽組合從 包含筒匣的模塊傳送至該設(shè)備的細(xì)胞計(jì)數(shù)模塊。在該細(xì)胞計(jì)數(shù)模塊處，設(shè)備水平的樣品處 理裝置將容槽承載體/容槽組合放置在細(xì)胞計(jì)數(shù)模塊的顯微鏡載物臺(tái)上。這些操作所需的 時(shí)間，加上2分鐘的等待時(shí)間，使膨脹細(xì)胞在成像前沉降在容槽的底部。
[0144] 將容槽承載體/容槽組合放置在顯微鏡載物臺(tái)上之后，該載物臺(tái)移動(dòng)到預(yù)先確定 的位置，以使細(xì)胞計(jì)數(shù)器的光學(xué)系統(tǒng)能夠觀察包含樣品的通道的一端。在該位置處，該光學(xué) 系統(tǒng)中繼通過來自環(huán)形燈的暗視野照射而獲得的樣品圖像。這些圖像與該光學(xué)系統(tǒng)在垂直 于容槽平面的軸線上的致動(dòng)相耦合，用來找到最佳焦平面。一旦對(duì)焦成功，該光學(xué)系統(tǒng)即用 來在不同波長(zhǎng)下獲取樣品的熒光圖像，該波長(zhǎng)與所用的熒光團(tuán)相稱。例如，為了使得已用偶 聯(lián)至alexa f Iuor 647的抗-⑶235標(biāo)記的紅細(xì)胞可視化，使用紅光（630nm波長(zhǎng)）光源來 激發(fā)樣品，并使用650nm與700nm之間的波長(zhǎng)來對(duì)樣品進(jìn)行成像。多色鏡與帶通發(fā)射濾光 器的組合用來從光信號(hào)中濾掉不需要的波長(zhǎng)。由于細(xì)胞已經(jīng)沉降在容槽的底部，因此在單 一焦平面上的圖像足以使該區(qū)域內(nèi)的所有細(xì)胞可視化。
[0145] 來自圖像的數(shù)據(jù)由與樣品處理設(shè)備相關(guān)聯(lián)的控制器處理。此處使用的圖像處理算 法采用細(xì)胞的熒光圖像，利用適應(yīng)性取閾和邊緣檢測(cè)的組合對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)?；诰植繌?qiáng)度 和強(qiáng)度梯度，在每個(gè)細(xì)胞周圍創(chuàng)建感興趣區(qū)域（RoI)。使用暗視野圖像，還鑒別樣品中的微 珠，并在微珠周圍創(chuàng)建RoI。對(duì)每個(gè)視野中的所有RoI進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算其在該視野的每幅 圖像中的強(qiáng)度。由該圖像處理算法輸出的信息由每個(gè)RoI的形狀或形態(tài)學(xué)測(cè)量值以及熒光 和暗視野強(qiáng)度組成。該信息使用統(tǒng)計(jì)方法分析以將每個(gè)物體分類為紅細(xì)胞（CD235a陽(yáng)性， 但⑶41/⑶61陰性）、血小板（⑶41/⑶61陽(yáng)性且⑶235a陰性）或微珠。使用諸如周長(zhǎng)、直 徑和圓度的形狀描述指標(biāo)來計(jì)算每個(gè)紅細(xì)胞和血小板的體積。由于微珠是以已知濃度添加 的，所以使用整個(gè)通道上微珠與細(xì)胞的平均比例來計(jì)算細(xì)胞濃度，其單位為個(gè)細(xì)胞/微升。 基于為處理樣品而進(jìn)行的步驟，該濃度針對(duì)稀釋度進(jìn)行校正，以獲得原始全血樣品中的細(xì) 胞的濃度。由樣品計(jì)算以下量：1)容槽中紅細(xì)胞的數(shù)目；2)容槽中紅細(xì)胞的平均體積；3) 容槽中紅細(xì)胞的紅細(xì)胞分布寬度（RDW) ;4)容槽中血小板的數(shù)目；以及5)該容槽中血小板 的平均體積。基于這些計(jì)算，對(duì)原始血液樣品計(jì)算出以下結(jié)果：
[0146] 在移取5微升整分試樣用于RBC和血小板信息的分析后，使用剩余的75微升樣品 分析全血樣品的白細(xì)胞群體。剩余的75微升全血也通過使用移液管在同一器皿內(nèi)反復(fù)吸 取和排出樣品來進(jìn)行混合。將剩余的75微升混合后的全血中的約40微升吸至移液管端頭 內(nèi)，并用移液管轉(zhuǎn)移至筒匣中的離心管內(nèi)。包含血液樣品的離心管被移液管接合，并且轉(zhuǎn)移 至并放置在該模塊中的離心機(jī)內(nèi)的搖擺式吊桶內(nèi)。該離心機(jī)以1200x g旋轉(zhuǎn)3分鐘，從而 將血液分離為作為上清液的含有Η)ΤΑ的血漿和作為沉淀物的壓積的細(xì)胞。
[0147] 離心后，將離心管從離心機(jī)中取出并返回至筒匣。血漿上清液用移液管移出，并 轉(zhuǎn)移至筒匣中的單獨(dú)的反應(yīng)器皿內(nèi)。利用移液管從筒匣中的反應(yīng)器皿中吸取16微升重懸 浮緩沖液，并將其添加至離心管中的細(xì)胞沉淀物中。然后通過用移液管在離心管中反復(fù)吸 取和排出混合物，將細(xì)胞沉淀物重懸浮在重懸浮緩沖液中。接下來，移液管吸取21微升重 懸浮后的全血，并將其添加至含有2微升抗⑶14-Pacific Blue和DRAQ5_?的另一器皿 中，混合，并溫育2分鐘。然后將20微升該混合物添加至80微升裂解緩沖液中。該裂解緩 沖液是與諸如低聚甲醛等固定劑結(jié)合在一起的溫和的表面活