一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技 術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國血液制品行業(yè)發(fā)展迅速，當(dāng)前，我國在血液制品產(chǎn)業(yè)上的監(jiān)管日益嚴(yán)格，措施 及整治方案頻出。如《關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)人體血液、組織器官管理有關(guān)問題的通知》（衛(wèi)藥發(fā) (1996) 27號(hào)）《艾滋病防治條例》第H十走條規(guī)定；進(jìn)口人體血液、血漿、組織、器官、細(xì)胞、 骨髓等，應(yīng)當(dāng)經(jīng)過國務(wù)院衛(wèi)生主管部口批準(zhǔn)?！锻ㄖ分械谝粭l規(guī)定：人體血液的采集、供應(yīng)、 加工生產(chǎn)和進(jìn)出口均由衛(wèi)生部統(tǒng)一歸口管理；血液和血液制品的進(jìn)出口沒有衛(wèi)生部的批件 或證書，任何單位均不得經(jīng)營，口岸藥檢所不得接受報(bào)驗(yàn)，海關(guān)不予放行。技術(shù)部口需對(duì)進(jìn) 出口物品的生物安全性做技術(shù)審核。
[0003] 但是在國家管理和控制領(lǐng)域仍然存在一些問題?！吨腥A人民共和國進(jìn)出口動(dòng)植物 檢疫條例》雖然涵蓋了動(dòng)物來源的血液樣品的檢疫要求，但沒有給出相關(guān)的檢測(cè)方法。而隨 著科技的發(fā)展，我國對(duì)我國的多樣性的生物資源的保護(hù)也越來越重視?，F(xiàn)階段我國特有和 稀有物種的血液制品存在著流失的可能。而進(jìn)口的血液制品也存在一定隱患。此外沒有管 理控制的進(jìn)口血液制品也有可能成為生物入侵途徑，造成生物安全隱患。因此需要對(duì)我國 的血液制品，特別是進(jìn)出口血液制品做物種來源的分析。但是目前對(duì)于血液制品的物種來 源除了現(xiàn)有的核酸聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)W外，沒有一種快速高效的檢測(cè)手段。而使用核酸聚合 酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在稀有樣品的采樣中存在困難。因此有必要開發(fā)一種快速高效的鑒別血液樣品 物種來源的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)，對(duì)不同物種的抗凝血樣品進(jìn)行預(yù)處理， 利用透射光譜掃描測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)光譜的光吸收，判斷樣品物種來源。
[0007] 優(yōu)選的，所述特定波長(zhǎng)為300nm~700nm。
[0008] 優(yōu)選的，所述特定波長(zhǎng)為344皿、405皿和544皿。
[0009] 優(yōu)選的，所述預(yù)處理為對(duì)抗凝血樣品按30倍~40倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。
[0010] 優(yōu)選的，所述抗凝血樣品為W巧樣酸軸、肝素或邸TA為抗凝劑制備的抗凝血樣 品。
[0011] 優(yōu)選的，所述抗凝血樣品為新鮮采集的樣品。
[0012] 優(yōu)選的，所述抗凝血樣品為全血。
[0013] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)，還包括應(yīng)用不同物種血 液樣品的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品對(duì)檢測(cè)儀器進(jìn)行標(biāo)定的步驟。
[0014] 優(yōu)選的，所述鑒別技術(shù)具體為對(duì)不同物種的W邸TA為抗凝劑的新鮮采集全血按 30倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋，利用透射光譜掃描測(cè)定樣品在344nm、405nm和544nm光譜的光 吸收，判斷樣品物種來源；
[0015] 若在344皿下的光吸收范圍為3. 459 + 0. 170,則為小鼠；
[0016] 若在344皿下的光吸收范圍為2. 882 + 0. 396,則為大鼠；
[0017] 若在344皿下的光吸收范圍為3. 502 + 0. 292,則為恒河猴。
[001引本發(fā)明還提供了一種用于不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別的稀釋液，由pH值為7. 2 的緩沖液、氯化軸、氯化鐘、EDTA、牛血清白蛋白組成。
[0019] 本發(fā)明提供了一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)對(duì)不同物種的抗凝血樣品 進(jìn)行預(yù)處理，利用透射光譜掃描測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)光譜的光吸收，判斷樣品物種來源。本 發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)基于不同物種的血液樣品自身成分的差異，利 用透射光譜掃描測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)位置的光吸收，判斷樣品物種來源，實(shí)現(xiàn)血液樣品的 物種來源的鑒別。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)操作簡(jiǎn) 單、快捷，鑒定結(jié)果穩(wěn)定可靠，應(yīng)用范圍廣，適用于血液制品的管理和海關(guān)進(jìn)出口行業(yè)中不 同物種血液樣品的檢測(cè)。
【附圖說明】
[0020] 圖1示實(shí)施例2中10倍倍比稀釋的血液樣品的透射光譜掃描圖；
[0021] 圖2示實(shí)施例2中30倍倍比稀釋的血液樣品的透射光譜掃描圖；
[0022] 圖3示實(shí)施例3中小鼠30倍倍比稀釋的血液樣品的透射光譜掃描圖；
[0023] 圖4示實(shí)施例3中大鼠30倍倍比稀釋的血液樣品的透射光譜掃描圖；
[0024] 圖5示實(shí)施例4中不同抗凝劑采集的大鼠血液30倍倍比稀釋的血液樣品的透射 光譜掃描圖；
[00巧]圖6示實(shí)施例6中洗涂處理對(duì)血液樣品透射光譜掃描影響的結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 本發(fā)明實(shí)施例公開了一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可 W借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本 領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過較 佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的 方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0027] 血液是在循環(huán)系統(tǒng)、也臟和血管腔內(nèi)循環(huán)流動(dòng)的一種組織，由血漿和血細(xì)胞組成。 血漿內(nèi)含血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原)、脂蛋白等各種營養(yǎng)成分W及無機(jī)鹽、氧、 激素、酶、抗體和細(xì)胞代謝產(chǎn)物等。血細(xì)胞有紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。該些血液成分在不 同物種的血液中存在可鑒別光譜學(xué)差異。
[0028] 但是用分光光度計(jì)對(duì)血液制品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，一束單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液 后，一部分光被體系吸收。由于樣品溶液的本身性質(zhì)不同，便可測(cè)得該物種特定波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng) 的光吸收。將不同波長(zhǎng)的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí)，如W波長(zhǎng)（A)為橫坐標(biāo)， 吸收強(qiáng)度（A)為縱坐標(biāo)，就可繪出該樣品的吸收光譜曲線。
[0029] 對(duì)于不同物種的血液樣品由于其自身成分存在差異，不同物種血液樣品就有其特 異的吸收光譜曲線，不同血液樣品在特定波長(zhǎng)位置可能存在物種差異，利用此差異可W實(shí) 現(xiàn)血液樣品的物種來源的鑒別。
[0030] 因此本發(fā)明提供了一種不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)，對(duì)不同物種的抗凝血 樣品進(jìn)行預(yù)處理，利用透射光譜掃描測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)光譜的光吸收，判斷樣品物種來 源。
[0031] 不同物種的血液樣品其透射光譜存在一定差異，其中本發(fā)明所述不同物種血液樣 品光譜學(xué)鑒別技術(shù)所述特定波長(zhǎng)為300nm~700nm。
[0032] 進(jìn)一步的，本申請(qǐng)使用邸TA抗凝法，分別無菌采集大鼠、小鼠和恒河猴的血液樣 品，利用透射光譜掃描測(cè)定樣品的光吸收，結(jié)果顯示，不同物種的血液樣品在344nm、405nm 和544nm存在著透射光譜的差異，該些差異在特定波長(zhǎng)有一定統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此本發(fā)明所 述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)所述特定波長(zhǎng)為344nm、405nm和544nm。
[0033] 在一些實(shí)施例中所述特定波長(zhǎng)為344nm。在一些實(shí)施例中所述特定波長(zhǎng)為405nm。 在一些實(shí)施例中所述特定波長(zhǎng)為544nm。
[0034] 本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中所述預(yù)處理為對(duì)抗凝血樣品進(jìn) 行有限稀釋。而不同稀釋倍數(shù)的血液樣品的透射光譜掃描結(jié)果存在差異。本申請(qǐng)采用稀釋 劑對(duì)血液樣品進(jìn)行有限稀釋，然后對(duì)不同稀釋倍數(shù)的血液樣品進(jìn)行透射光譜掃描，結(jié)果顯 示較低稀釋倍數(shù)時(shí)（1倍~10倍)，不同來源的血液樣品均無明顯的檢測(cè)特征，光線透過率 差。在稀釋倍數(shù)在30倍~40倍時(shí)，不同來源的血液樣品有明顯的特異性光吸收，可作為物 種來源的鑒別檢測(cè)特征。而在較高稀釋倍數(shù)時(shí)（50倍~100倍時(shí))，不同來源的血液樣品的 特異性光吸收消失，無法物種來源的鑒別檢測(cè)特征。因此，本發(fā)明所述不同物種血液樣品光 譜學(xué)鑒別技術(shù)中所述預(yù)處理優(yōu)選為對(duì)抗凝血樣品按30倍~40倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。在 一些實(shí)施例中為按30倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。在一些實(shí)施例中為按35倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行 稀釋。在一些實(shí)施例中為按40倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。
[0035] 本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中所述預(yù)處理中所述稀釋的稀釋 液為包含抗凝劑的稀釋液。
[0036] 進(jìn)一步的，上述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中，所述稀釋液還包括抑值為 7. 2的緩沖液。所述緩沖液優(yōu)選為磯酸鹽緩沖液。所述磯酸鹽緩沖液可W為磯酸軸緩沖液、 磯酸鐘緩沖液或磯酸二氨鐘-磯酸氨二軸緩沖液。
[0037] 在一些實(shí)施方案中，上述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中，所述稀釋液由抑 值為7. 2的緩沖液、氯化軸、氯化鐘、邸TA、牛血清白蛋白（BSA)組成。
[0038] 在某些具體實(shí)施例中，上述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中，所述稀釋的稀 釋液每升含有：
[0039]
o
[0040] 本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中不同物種血液樣品的透射光譜 掃描測(cè)定數(shù)據(jù)還受到血液樣品的抗凝方式的影響。本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒 別技術(shù)中所述抗凝血樣品優(yōu)選為W巧樣酸軸、肝素或邸TA為抗凝劑制備的抗凝血樣品。
[0041] 進(jìn)一步的，本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中所述抗凝血樣品為W 邸TA為抗凝劑制備抗凝血樣品。
[0042] 按照本發(fā)明，上述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中，所述預(yù)處理的稀釋液中 的抗凝劑優(yōu)選為巧樣酸軸、肝素或邸TA。更優(yōu)選為邸TA。
[0043] 進(jìn)一步的，血液樣品的新鮮度也會(huì)對(duì)本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技 術(shù)中血液樣品的透射光譜掃描測(cè)定數(shù)據(jù)造成影響。本申請(qǐng)使用邸TA作為抗凝劑采集大鼠 血液，將抗凝血做30倍稀釋，利用透射光譜掃描分別測(cè)定新鮮采集的樣品、放置過夜后的 樣品和放置2-3天的樣品在特定波長(zhǎng)光譜的光吸收，結(jié)果顯示，大鼠邸TA抗凝血新鮮采集 的樣品（1小時(shí)內(nèi)測(cè)定)其透射光在344nm處光吸收較高，而低溫放置過夜后（24小時(shí)內(nèi)）再 測(cè)量，在344皿處的光吸收明顯下降。放置2-3天的樣品光吸收數(shù)據(jù)較穩(wěn)定，與低溫放置過 夜后的樣品光吸收結(jié)果相似。因此，本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技術(shù)中所述 抗凝血樣品優(yōu)選為新鮮采集的樣品。
[0044] 進(jìn)一步的，血漿成分對(duì)于血液樣品的透射光譜數(shù)值也會(huì)造成影響，血液樣品的洗 涂處理會(huì)干擾血液樣品的透射光譜信息。因此本發(fā)明所述不同物種血液樣品光譜學(xué)鑒別技 術(shù)中，所述抗凝血樣品優(yōu)選為未經(jīng)洗涂處理的全血。
[0045] 按照本發(fā)明，在一些實(shí)施方案中，對(duì)不同物種的W邸TA為抗凝劑的新鮮采集全血 按30倍的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋，利用透射光譜掃描測(cè)定樣品在344nm、405nm和544nm光譜的 光吸收，判斷樣品物種來源；
[0046] 若在344皿下的光吸收范圍為3. 459 + 0. 170,則為小鼠；
[0047] 若在344皿下的光吸收范圍為2. 882 + 0. 396,則為大鼠；
[004引若在344皿下的光吸收范圍為3. 502 ±0. 292,則為恒河猴。