血液樣品收集裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種血液樣品收集裝置，尤其涉及一種用于穩(wěn)定血液樣品中游離核酸 水平及保持游離核酸完整性的血液樣品收集裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 早在1948年，血液中游離的脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱為rfDNA)就被發(fā)現(xiàn)了，但其在臨 床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用還未超過(guò)二十年。具體地的說(shuō)，rfDNA被證明存在于系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的 血清中。
[000引現(xiàn)在對(duì)于C巧NA的研究有兩大熱點(diǎn)：
[0004] -個(gè)是利用癌癥患者中的rfDNA明顯升高來(lái)診斷癌癥，rfDNA水平在癌癥患者的 血清中明顯增高。據(jù)調(diào)查，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、大腸癌、乳腺癌、膜腺癌、頭頸部癌癥患者的rfDNA 濃度都明顯上升。該rfDNA提取自癌癥患者的血漿或血清，呈現(xiàn)出典型特征的腫瘤DM,并 且可W充當(dāng)非侵入性生物標(biāo)記用于癌癥檢測(cè)和管理；
[0005] 另一個(gè)是胎兒C巧NA在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用，臨床應(yīng)用涉及了胎兒rfDNA分析，包 括了性別判定，單基因奈亂，妊娠相關(guān)疾病和非整倍體檢測(cè)。
[0006] 健康人的C巧NA濃度水平極低，平均循環(huán)濃度是30ng/ml，C巧NA通常來(lái)說(shuō)是雙鏈 的，大約為18~21個(gè)堿基大小。其濃度極易受到血細(xì)胞裂解、核酸酶降解等因素影響而波 動(dòng)。
[0007] 影響rfDNA的精確檢測(cè)的主要因素如下：
[000引 （1)血細(xì)胞自然裂解釋放出其基因組DNA，干擾cfDNA的檢測(cè)；
[0009] (2)樣品在抽取、加工過(guò)程中受機(jī)械損傷而導(dǎo)致細(xì)胞裂解，該導(dǎo)致rfDNA濃度水平 增高；
[0010] 做血漿中DNA酶的存化導(dǎo)致CfDNA的降解，因此CfDNA濃度水平降低。
[0011] 為減少細(xì)胞DNA的對(duì)血漿CfDNA的污染，減少DNA酶的降解作用，現(xiàn)階段主要采用 如下技術(shù)：
[0012] (1)選用帶有特殊添加劑的不同類型的血液樣品收集裝置，如帶抗凝血?jiǎng)┣蒁TA、 肝素、巧樣酸鹽）的采血管，W防止全血細(xì)胞凝血，減少來(lái)自白細(xì)胞的DNA釋放；
[001引 0)改善樣品存儲(chǔ)條件，如4°C低溫保存，抑制DNA酶的活性；
[0014] (3)優(yōu)化離也分離條件，W減少分離血漿過(guò)程中，血細(xì)胞裂解釋放DNA。
[0015] 通過(guò)W上技術(shù)處理，對(duì)C巧NA的精確檢測(cè)可得一定的改善。但是由于運(yùn)輸及離也 分離過(guò)程產(chǎn)生機(jī)械振動(dòng)等因素，血細(xì)胞裂解仍然存在；在4C低低溫情況下，DNA酶仍然具 有一定的活性，血液中的核酸水平仍然存在不穩(wěn)定因素，長(zhǎng)期保存的條件下，真正的游離核 酸仍然有大量損失，不利于游離核酸的精確檢測(cè)。同時(shí)現(xiàn)有條件下，血液采集、運(yùn)輸和存儲(chǔ) 都必須在低溫下進(jìn)行，但是低溫給樣品的采集、運(yùn)輸和存儲(chǔ)帶來(lái)了許多不便與困難，同時(shí) 經(jīng)濟(jì)成本較高。
[0016] 李勤在其碩±學(xué)位論文《體外存放和甲酵處理對(duì)孕婦血漿中胎兒DNA水平的影響 的實(shí)驗(yàn)研究》中介紹了一種甲酵處理血樣W減少細(xì)胞裂解、抑制DM酶活性，W延長(zhǎng)血液樣 品體外存儲(chǔ)時(shí)間的方法。然而由于甲酵具有導(dǎo)致核酸斷裂、核酸-蛋白質(zhì)交聯(lián)、核酸交聯(lián)等 作用，甲酵破壞核酸結(jié)構(gòu)的完整性，不利于對(duì)cfDNA的精確檢測(cè)分析。
[0017] 中國(guó)發(fā)明專利"常溫保存核酸的采集容器"（申請(qǐng)公布號(hào)CN103789202A ;申請(qǐng)公布 日2014.05. 14)，其公開(kāi)了如下的技術(shù)方案，"一種常溫保存核酸的采集容器，包括采集管和 膠塞，膠塞密封在采集管的管口上，膠塞的外面設(shè)有保護(hù)帽，采集管內(nèi)設(shè)置有添加劑，所述 添加劑由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細(xì)胞膜穩(wěn)定劑 混合而成。所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃為娃測(cè)玻璃或石英玻璃；塑料為聚對(duì)苯 二甲酸己二醇醋（PET)、聚對(duì)苯二甲酸了二醇醋（PBT)或聚蔡二甲酸己二醇醋（陽(yáng)腳。所述 膠塞是用橡膠制作，橡膠為下基橡膠。所述膠塞可W用鉛塑膜替代"，該添加劑含有甲酵。
[0018] 因此有必要提供一種可W穩(wěn)定血液樣品中游離核酸水平及保護(hù)游離核酸的完整 性的血液樣品收集裝置，W消除甲酵對(duì)核酸的結(jié)構(gòu)完整性的不利影響，最小化細(xì)胞核酸物 質(zhì)的影響，最小化運(yùn)輸、存儲(chǔ)、加工處理?xiàng)l件對(duì)游離核酸水平影響，比如機(jī)械震蕩導(dǎo)致的DNA 鏈的損傷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0019] 本發(fā)明目的是為了克服現(xiàn)有血液樣品收集裝置無(wú)法穩(wěn)定血液樣品中游離核酸水 平及保護(hù)游離核酸的完整性的缺陷，發(fā)明一種血液樣品收集裝置，該裝置可在常溫下長(zhǎng)期 保存（7~14天）血液樣品，穩(wěn)定血液樣品中游離核酸水平，保護(hù)游離核酸的完整性，有利 于對(duì)rfDNA的精確檢測(cè)分析。
[0020] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0021] 血液樣品收集裝置，包括一容器，容器內(nèi)設(shè)有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑、 血細(xì)胞核酸穩(wěn)定劑、血漿核酸穩(wěn)定劑、抑緩沖液組成。
[0022] 具體的，上述血液樣品收集裝置的容器有兩種實(shí)現(xiàn)方案。
[0023] 方案一，容器包括采集管，其管口處設(shè)有密封膠塞，膠塞的外面設(shè)有保護(hù)帽。
[0024] 方案二，根據(jù)權(quán)利要求1所述的血液樣品收集裝置，其特征在于，所說(shuō)容器包括采 集管，其管口與密封膠塞可拆的相連，膠塞的外面設(shè)有保護(hù)帽，保護(hù)帽上固定設(shè)有可截留細(xì) 胞并允許血漿通過(guò)的微孔濾膜制成的膜囊。
[0025] 較佳的，所說(shuō)的采集管由玻璃或塑料制成。
[0026] 較佳的，所說(shuō)的玻璃為娃測(cè)玻璃或石英玻璃；塑料為聚對(duì)苯二甲酸己二醇醋、聚對(duì) 苯二甲酸下二醇醋或聚蔡二甲酸己二醇醋中的一種。
[0027] 較佳的，所說(shuō)膠塞由橡膠制成。更進(jìn)一步的，所說(shuō)的橡膠為下基橡膠。
[0028] 所說(shuō)膠塞可由鉛塑膜替代。
[0029] 較佳的，所說(shuō)血液抗凝劑選自草酸鹽、肝素鹽、構(gòu)稼酸鹽中的一種或多種；
[0030] 所說(shuō)抑緩沖液為甘氨酸-氨氧化軸-鹽酸緩沖液、H輕甲基氨基甲焼-鹽酸緩沖 液中的一種；
[0031] 所說(shuō)血細(xì)胞核酸穩(wěn)定劑選自尿囊素、5, 5-二甲基海因、嗯哇焼中的一種或多種； [003引所述血漿核酸穩(wěn)定劑選自N-己酸甲亞胺、N-(3-己酸-戊胺）的一種或多種； [0033] 其中，血液抗凝劑按1.0~4. Omg/ml血液的劑量添加；血細(xì)胞核酸穩(wěn)定劑按 0.0 Olg~3. 5g/ml血液的劑量添加；血細(xì)胞核酸穩(wěn)定劑與血漿核酸穩(wěn)定劑的摩爾比為 1:0. 01~1:5