石首魚科hplc指紋圖譜鑒定方法專用處理試劑組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種指紋圖譜種群鑒別分類專用處理試劑組合，尤其涉及石首魚科 HPLC指紋圖譜鑒定方法專用處理試劑組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 大黃魚（crocea (Richardson))屬石首魚科（Sciaenidae)黃魚 屬，是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一。但由于長(zhǎng)期以來的濫捕，大黃魚野生資源量日益減少，20 世紀(jì)70年代后期，大黃魚漁汛已難以形成。為解決大黃魚產(chǎn)量問題，我國(guó)水產(chǎn)工作者積極 開展大黃魚人工養(yǎng)殖技術(shù)研宄，至20世紀(jì)80年代末，大黃魚人工育苗技術(shù)取得突破，網(wǎng)箱 養(yǎng)殖技術(shù)逐漸成熟完善，較好地滿足了人們對(duì)大黃魚產(chǎn)量的需求，但養(yǎng)殖大黃魚的品質(zhì)與 野生大黃魚的品質(zhì)存在較大差別，且不同環(huán)境和養(yǎng)殖方式下的大黃魚品質(zhì)也參差不齊。為 了提高大黃魚養(yǎng)殖質(zhì)量，闡明影響大黃魚品質(zhì)差異的因素，不少研宄者對(duì)大黃魚的肌肉成 分進(jìn)行了比較分析，結(jié)果表明不同生長(zhǎng)模式、不同家系、不同地域的大黃魚所含的營(yíng)養(yǎng)成 分、理化指標(biāo)，特別是脂肪含量差異明顯，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖大黃魚口感差別明顯。
[0003] 舟山漁場(chǎng)地處長(zhǎng)江、錢塘江、甬江入?？冢匕读?、臺(tái)灣暖流和黃海冷水團(tuán)交匯于 此，大黃魚養(yǎng)殖區(qū)域潮流較急，較其他海域大黃魚生長(zhǎng)慢，養(yǎng)殖周期長(zhǎng)，脂肪含量少，肉質(zhì)比 較接近野生魚?；诖?，"舟山大黃魚"地理標(biāo)志證明商標(biāo)于2009年在國(guó)家工商總局商標(biāo)局 正式注冊(cè)成功。但是，舟山大黃魚養(yǎng)殖成本大，價(jià)格較高，在外在形態(tài)上與其他海域養(yǎng)殖大 黃魚無明顯差異，普通消費(fèi)者難以從外在形態(tài)進(jìn)行有效區(qū)分，而部分銷售者以假充真欺騙 消費(fèi)者，致使舟山大黃魚優(yōu)質(zhì)難以優(yōu)價(jià)，影響了舟山大黃魚產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，建立舟山大 黃魚的產(chǎn)地溯源技術(shù)和質(zhì)量評(píng)價(jià)方法指導(dǎo)大黃魚的生產(chǎn)和銷售具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0004] 目前，水產(chǎn)品的產(chǎn)地溯源和鑒別技術(shù)主要依靠性狀鑒別和分子生物學(xué)方法。性狀 鑒別法主要依靠鑒別者的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，易受主觀因素影響；分子生物學(xué)方法所需試劑昂貴、 實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)并要求檢測(cè)者有較高的技術(shù)水平。本實(shí)驗(yàn)采用的HPLC法，準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn) 便、實(shí)驗(yàn)成本較低，且已在中藥材和部分海洋藥物(如紫貽貝eWk)、三班海馬 {Hippocampus trimaculatus)、馬類悔猶XHemicentrotus pulcherrimus)等、飽質(zhì)_量茲努\ 和產(chǎn)地溯源領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。但目前基于魚類化學(xué)成分建立的HPLC指紋圖譜較少。因 此，本文采用HPLC法建立了大黃魚指紋圖譜，結(jié)合數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法，對(duì)不同產(chǎn)地大黃魚進(jìn) 行產(chǎn)地溯源和質(zhì)量鑒定，同時(shí)利用該技術(shù)進(jìn)行了石首魚科部分魚類的種類鑒別，取得了較 好結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)提供一種基于化學(xué)組分對(duì)大黃魚等主要石首魚 科魚類進(jìn)行產(chǎn)地溯源和種類鑒別、結(jié)果穩(wěn)定可靠、操作方便、原料處理簡(jiǎn)單的石首魚科HPLC 指紋圖譜鑒定方法所使用的石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法處理試劑組合物。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方 法專用處理試劑組合物，該處理試劑組合物包括： 提取溶劑：乙酸乙酯； 洗脫溶劑A相：乙腈； 洗脫溶劑B相：濃度為1%的磷酸水。
[0007] 采用上述試劑組合的進(jìn)行HPLC指紋圖譜鑒定石首魚科魚類的種群，由于其能出 現(xiàn)較多的檢測(cè)峰值，能較好的再現(xiàn)石首魚科魚類組織化學(xué)成分的優(yōu)點(diǎn)，使得其測(cè)試方法具 有穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，且避免認(rèn)為目測(cè)、鑒定的識(shí)別錯(cuò)誤，具有極強(qiáng)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
[0008] 為優(yōu)化上述技術(shù)方案，采取的措施還包括：乙腈的濃度為1%~3%，3%，3%~10%， 30%~45%，45%~55%，55%~60%，60%~70%，70%~85%，85%~87%，87%~90%，90%-95%，95%~100%， 100% 〇
[0009] 乙腈的濃度還與HPLC洗脫時(shí)間存在如下對(duì)應(yīng)關(guān)系：0~5 min，1%~3% ;5~8 min，3% ; 8~10 min, 3%~10°/〇 ； 15-20 min, 30%~45°/〇 ；20-23 min, 45%~55°/〇 ；23-25 min, 559^60% ；25-30 min, 60%~70°/〇 ；30-35 min, 70%~85°/〇 ；35-40 min, 85%~87°/〇 ；40~43 min, 87%~90°/〇 ；43~45 min, 90%-95°/〇 ；45-47 min, 95%~100°/〇 ；47~60 min, 100%〇
[0010] 由于本發(fā)明采用了方法采用提取溶劑：乙酸乙酯；洗脫溶劑A相：乙腈；洗脫溶劑 B相：濃度為1%的磷酸水作為試劑組合。采用本試劑的特定鑒定方法能使用石首魚科魚 類肌肉的化學(xué)成分HPLC圖譜結(jié)合石首魚科鑒定數(shù)字方程式組鑒定石首魚科魚的產(chǎn)地或物 種。采用HPLC指紋圖譜鑒定石首魚科魚類的種群，具有穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，且避免認(rèn)為目測(cè)、 鑒定的識(shí)別錯(cuò)誤，具有極強(qiáng)的重復(fù)性。因而本發(fā)明具有能基于化學(xué)組分對(duì)大黃魚等主要石 首魚科魚類進(jìn)行產(chǎn)地溯源和種類鑒別、結(jié)果穩(wěn)定可靠、操作方便、原料處理簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例乙腈-水作為流動(dòng)相洗脫液的圖譜； 圖2為本發(fā)明實(shí)施例乙腈-1%磷酸水作為流動(dòng)相洗脫液的圖譜； 圖3為本發(fā)明實(shí)施例水作為提取溶劑的圖譜； 圖4為本發(fā)明實(shí)施例乙酸乙酯作為提取溶劑的圖譜； 圖5為為本發(fā)明實(shí)施例大黃魚對(duì)照指紋圖譜及18個(gè)共有峰標(biāo)識(shí)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下結(jié)合附實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0013] 實(shí)施例：參照?qǐng)D1至圖5,石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法專用處理試劑組合物， 該處理試劑組合物包括： 提取溶劑：乙酸乙酯； 洗脫溶劑A相：乙腈； 洗脫溶劑B相：濃度為1%的磷酸水。
[0014] 采用上述試劑組合的進(jìn)行HPLC指紋圖譜鑒定石首魚科魚類的種群，由于其能出 現(xiàn)較多的檢測(cè)峰值，能較好的再現(xiàn)石首魚科魚類組織化學(xué)成分的優(yōu)點(diǎn)，使得其測(cè)試方法具 有穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，且避免認(rèn)為目測(cè)、鑒定的識(shí)別錯(cuò)誤，具有極強(qiáng)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
[0015] 為優(yōu)化上述技術(shù)方案，采取的措施還包括：乙腈的濃度為1%~3%，3%，3%~10%， 30%~45%，45%~55%，55%~60%，60%~70%，70%~85%，85%~87%，87%~90%，90%-95%，95%~100%， 100% 〇
[0016] 乙腈的濃度還與HPLC洗脫時(shí)間存在如下對(duì)應(yīng)關(guān)系：0~5 min，1%~3% ;5~8 min，3% ; 8~10 min, 3%~10°/〇 ； 15-20 min, 30%~45°/〇 ；20-23 min, 45%~55°/〇 ；23-25 min, 559^60% ；25-30 min, 60%~70°/〇 ；30-35 min, 70%~85°/〇 ；35-40 min, 85%~87°/〇 ；40~43 min, 87%~90°/〇 ；43~45 min, 90%-95°/〇 ；45-47 min, 95%~100°/〇 ；47~60 min, 100%〇
[0017] 通過對(duì)眾多提取物組合或單純方式進(jìn)行試驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)水、50%甲醇+50%水、甲醇、 乙醇、乙酸乙酯作為溶劑結(jié)果較好，但對(duì)提取物的影響差異