小兒感冒寧糖漿水提液hplc標準指紋圖譜的建立方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及小兒感冒寧糖漿水提液指紋圖譜的建立方法，具體地說，涉及小兒感 冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜的建立方法、標準指紋圖譜及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 小兒感冒寧糖漿是由吉林益民堂制藥有限公司生產(chǎn)的原中藥保護品種，主要由薄 荷、荊芥穗、苦杏仁、牛蒡子、黃芩、桔梗、前胡、白芷、炒梔子、焦山楂、六神曲（焦）、焦麥芽、 蘆根、金銀花、連翹原料藥組成，根據(jù)臨床前藥理及毒理研宄，具有疏散風熱、清熱止咳的 功效，主要用于治療小兒外感風熱所致的感冒，癥見發(fā)熱、汗出不爽、鼻塞流涕、咳嗽咽痛。
[0003] 感冒是由生活起居不慎或氣候突變，或體質(zhì)素虛，衛(wèi)外不足，外邪冒犯人體而發(fā)生 的肺系疾病。本病的發(fā)生，常因氣溫驟變之時，寒熱失常，感受外邪，外邪從皮毛、口鼻而入， 侵襲肺衛(wèi)，表衛(wèi)不和所致。因小兒的生理和病理特點，可表現(xiàn)為，熱證多，感邪之后，易從熱 化，臨床發(fā)熱較重；易挾痰，小兒肺臟尤嬌，外邪犯肺，肺使宣降，而出現(xiàn)咳嗽痰多；易挾滯， 小兒脾常不足，感受外邪之后，常導(dǎo)致脾胃失調(diào)，不能運化水谷，而出現(xiàn)不思飲食，脘腹脹 滿；易挾驚，小兒心肝有余，感受外邪，易化熱化火，動風擾心，而出現(xiàn)煩躁哭鬧。
[0004] 本方為風熱感冒所設(shè)。風熱侵于肺衛(wèi)，則見惡寒發(fā)熱；風熱犯肺，肺使宣降，則鼻塞 流涕、咳嗽；風熱上擾于喉，則咽喉腫痛。小兒感冒寧糖漿，為古代治療感冒（風熱型）之名 方，"銀翹散"化裁而來。方中金銀花、連翹氣味芳香，疏散風熱，清熱解毒。金銀花甘寒，芳 香疏散，善于散肺經(jīng)熱邪，透熱達表；連翹苦寒，長于清心火，散上焦風熱，二者治風熱感冒， 常相須為用，故重用為君藥。薄荷、牛蒡子疏散風熱，清頭明目利咽。薄荷辛散之性較強，是 治療風熱感冒藥中最能宣散表邪之藥；牛蒡子升散之中具有清降之性，長于宣肺祛痰，利咽 消腫，為治療咽喉腫痛常用藥。荊芥穗解表散邪。白芷發(fā)散表邪，宣通鼻竅，治感冒頭痛鼻 塞不通，濁涕不止，為治"陽明頭痛、鼻淵頭痛之要藥"。上四藥相合，即可助君藥疏散風熱， 又可治咽痛，鼻塞流涕。感冒易挾痰，故用黃芩、桔梗、前胡、蘆根清肺化痰，止咳。黃芩注入 肺經(jīng)，善清瀉肺火，而化痰止咳；桔梗開宣肺氣，祛痰止咳，并可利咽消腫，古有"諸藥舟楫， 載藥上浮"為肺經(jīng)引經(jīng)藥。上七藥合用即可助君藥疏散風熱，又可止咳化痰，利咽消腫，共為 臣藥。感冒易挾滯，故復(fù)用焦山楂、六神曲、焦麥芽消食化積，開胃健脾，即可治療小兒不思 飲食，又可增強食欲，以利體力恢復(fù)，提高正氣，驅(qū)邪外出。梔子瀉火除煩，以防小兒感冒挾 驚，本品能淸瀉三焦火，瀉心火而除煩，為治熱病心煩，躁擾不寧之要藥。上四味藥物相合， 共為佐藥。諸藥合用，共奏疏散風熱，清熱止咳之功效。
[0005] 目前，小兒感冒寧糖漿處方為薄荷80g、荊芥穗67g、苦杏仁80g、牛蒡子80g、黃芩 80g、桔梗67g、前胡80g、白芷27g、炒梔子40g、焦山楂27g、六神曲（焦）27g、焦麥芽27g、蘆 根120g、金銀花120g、連翹80g ;制法為取以上十五味，薄荷、荊芥穗提取揮發(fā)油，苦杏仁壓 榨去油，加五倍水，37°C浸漬3小時，浸漬液水蒸氣蒸餾，用90%乙醇液20ml收集蒸餾液至 60ml，過濾，密封儲存；其余牛蒡子等十二味加水煎煮二次，第一次2小時，第二次1小時，煎 液濾過，濾液合并，靜置48小時，取上清液濃縮至適量，加入蔗糖450g及羥苯乙酯0. 25g，苯 甲酸鈉 3g，煮沸使溶解，加入杏仁水混勻，靜置，取上清液，加入揮發(fā)油及檸檬香精、香蕉香 精適量，加水至1000 ml，攪勻，濾過，分裝，即得。
[0006] 其中牛蒡子、黃芩、桔梗、前胡、白芷、炒梔子、焦山楂、六神曲（焦）、焦麥芽、蘆根、 金銀花、連翹十二味的水提液的制法為：加水（5-6倍量）煎煮二次，第一次2小時，第二次 1小時，煎液濾過，濾液合并，靜置48小時，取上清液濃縮至適量?，F(xiàn)有方法采用水提、靜置 沉淀的方法處理，既浪費人力、物力，也浪費能源。因此，尋找新的小兒感冒寧糖漿水提液的 沉淀方法及其質(zhì)量檢查方法成為亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜的建立方法、標 準指紋圖譜及其應(yīng)用，目的是解決目前小兒感冒寧糖漿水提液質(zhì)量評價和成分分析中不能 較全面綜合反映和控制水提液整體質(zhì)量的問題。
[0008] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜的 建立方法，包括HPLC測定；優(yōu)選地，所述HPLC測定的色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A、以0. 3 %磷酸為流動相B進行梯度洗脫；
[0009] 優(yōu)選地，取多批次待測樣品溶液分別按照所述HPLC色譜條件進行測定，對各供試 品的指紋圖譜進行分析，生成小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜；優(yōu)選地，紫外檢 測波長為320nm ;和/或流速為1.0 mL/min ;和/或柱溫為30°C ;和/或進樣量為10 μ L ;
[0010] 一般地，可選用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，例如Agilent ZORBAX SB-C18 (5 μ m，4. 6 X 250mm);
[0011] 優(yōu)選地，所述流動相按梯度洗脫梯度變化為：
【主權(quán)項】
1. 小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜的建立方法，包括HPLC測定，其特征在 于，所述HPLC測定的色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流 動相A、以0. 3%磷酸為流動相B進行梯度洗脫。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立方法，其特征在于，取多批次待測樣品溶液分別按照所 述HPLC色譜條件進行測定，對各供試品的指紋圖譜進行分析，生成小兒感冒寧糖漿水提液 HPLC標準指紋圖譜。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脫為：
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的建立方法，其特征在于，紫外檢測波長為320nm ;和 /或流速為1.0 mL/min ;和/或柱溫為30°C ;和/或進樣量為10 μ L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，還包括供試品溶液的制備；所述 供試品溶液的制備為：由以下重量份的原料藥經(jīng)水提獲得，牛蒡子80、黃芩80、桔梗67、前 胡80、白芷27、炒梔子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麥芽27、蘆根120、金銀花120、連翹 80 ;優(yōu)選取以上十二味，加水煎煮二次，第一次2小時，第二次1小時，煎液濾過，濾液合并， 靜置48小時，取上清液即得；進一步優(yōu)選將所得上清液再于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取 離心后的上清液，即得；更優(yōu)選第一次煎煮，水的加入量為藥材總重量的6倍，煎煮2小時， 第二次煎煮，水的加入量為藥材總重量的5倍，煎煮1小時。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1)供試品溶液的制備：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黃芩80、桔梗67、前胡80、白 芷27、炒梔子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麥芽27、蘆根120、金銀花120、連翹80,加 水煎煮二次，第一次2小時（加水量藥材總重量的6倍），第二次1小時（加水量藥材總重 量的5倍），煎液濾過，濾液合并，靜置48小時，取上清液，再于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘， 取離心后的上清液，即得； ⑵HPLC測定：將多批次供試品溶液各10 μ L注入到高效液相色譜儀中進行測定，得到 指紋圖譜； 色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α、以0. 3%磷 酸為流動相B進行梯度洗脫；紫外檢測波長為320nm ;流速為1.0 mL/min ;柱溫為30°C;進樣 量10 μ L ;流動相按梯度洗脫梯度變化為：
(3)標準指紋圖譜的建立：采用軟件（中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件）對各 供試品的指紋圖譜進行分析，生成小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜。
7. 權(quán)利要求1-6任一項所述的方法建立的小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜。
8. 權(quán)利要求1-6任一項所述方法建立的HPLC標準指紋圖譜在檢測小兒感冒寧糖漿水 提液質(zhì)量的應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：按上述方法建立小兒感冒 寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜；取小兒感冒寧糖漿水提液待檢樣品，優(yōu)選取采用以上述 方法于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘的上清液，按上述HPLC測定同法操作，得到小兒感冒寧 糖漿水提液待檢樣品指紋圖譜，采用軟件（中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件）對所 得小兒感冒寧糖漿水提液待檢樣品指紋圖譜和上述HPLC標準指紋圖譜進行分析。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，包括以下步驟： (1)供試品溶液的制備：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黃芩80、桔梗67、前胡80、白 芷27、炒梔子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麥芽27、蘆根120、金銀花120、連翹80,加 水煎煮二次，第一次2小時（加水量藥材總重量的6倍），第二次1小時（加水量藥材總重 量的5倍），煎液濾過，濾液合并，靜置48小時，取上清液，再于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘， 取離心后的上清液，即得； ⑵HPLC測定：將多批次供試品溶液各10 μ L注入到高效液相色譜儀中進行測定，得到 指紋圖譜； 色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α、以0. 3%磷 酸為流動相B進行梯度洗脫；紫外檢測波長為320nm ;流速為1.0 mL/min ;柱溫為30°C;進樣 量10 μ L ;流動相按梯度洗脫梯度變化為：
(3)標準指紋圖譜的建立：采用軟件（中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件）對各 供試品的指紋圖譜進行分析，生成小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜； (4)樣品檢測：取小兒感冒寧糖漿水提液待檢樣品，優(yōu)選取采用以上述方法于4000轉(zhuǎn) /分鐘離心10分鐘的上清液，按上述HPLC測定同法操作，得到小兒感冒寧糖漿水提液待檢 樣品指紋圖譜，采用軟件（中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件）對所得小兒感冒寧糖 漿水提液待檢樣品指紋圖譜和上述HPLC標準指紋圖譜進行分析； 優(yōu)選地，所述的應(yīng)用，還包括對照品溶液的制備：即分別稱取黃芩苷和綠原酸置同一量 瓶中，加入甲醇制成分別含0. 03-0. 05mg/mL的溶液，更優(yōu)選加入甲醇制成分別含0. 04mg/ mL的溶液；將對照品溶液按上述HPLC測定同法操作，得到對照品溶液HPLC指紋圖譜。
【專利摘要】本發(fā)明提供小兒感冒寧糖漿水提液HPLC標準指紋圖譜的建立方法、標準指紋圖譜及其應(yīng)用，包括對照品和供試品溶液的制備、HPLC測定、標準指紋圖譜的建立以及樣品檢測等步驟。該法能有效表征小兒感冒寧糖漿水提液的工藝和質(zhì)量，有利于監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；具有方法簡便、穩(wěn)定性好、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104833751
【申請?zhí)枴緾N201510207830
【發(fā)明人】潘雅輝, 趙景龍, 羅敏, 杜麗爽, 王春榮, 丁愛英, 徐陽, 李艷茹
【申請人】吉林益民堂制藥有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月28日