本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因豬檢測領域，具體而言，涉及一種轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法、修復方法以及飼料。

背景技術(shù)：

飲食中總脂肪和飽和脂肪的攝入量占總熱量的比例不斷減少，ω-6脂肪酸(ω-6pufas，polyunsaturatedfattyacids)攝入增加和ω-3脂肪酸(ω-3pufas)減少，會導致ω-6和ω-3比例達到18:1以上，這種情況對心血管疾病、慢性疾病具有明顯影響，而且會使超重和肥胖的患病率顯著增加。

紅細胞(rbc)膜磷脂中ω-6脂肪酸和ω-6與ω-3比例提高了肥胖的風險，紅細胞膜磷脂高水平ω-3減少肥胖的風險。通過增加攝入二十碳五烯酸(epa)和二十二碳六烯酸(dha)能夠減少疾病產(chǎn)生，ω-6/ω-3比率平衡對身體健康和肥胖的預防具有重要意義。ω-3pufas能夠降低膜脂中膽固醇含量，增加細胞膜的流動性，降低心腦血管疾病產(chǎn)生的比例，具有抗炎、抗凝血等作用，抑制腫瘤生長，影響多種人類神經(jīng)性疾病。

人和哺乳動物缺少多不飽和脂肪酸脫氫酶，不能夠生成ω-6和ω-3pufas，兩種物質(zhì)必須從食物中獲取。秀麗線蟲fat-1(fattyaciddesaturases，ω-3多聚不飽和脂肪酸脫氫酶)基因編碼的ω-3多聚不飽和脂肪酸脫氫酶具有將ω-6pufas轉(zhuǎn)化生成ω-3pufas的能力。采用轉(zhuǎn)基因動物方法生產(chǎn)長鏈ω-3pufas是解決ω-3pufas食物短缺的有效方法之一，轉(zhuǎn)fat-1基因豬提高豬肉營養(yǎng)價值,具有很好的應用前景。

轉(zhuǎn)fat-1基因豬育種需要采用pcr和southern印跡雜交方法對轉(zhuǎn)fat-1基因原代及傳代生產(chǎn)仔豬進行檢測，確定fat-1基因在豬基因組中的整合情況。轉(zhuǎn)fat-1基因豬外源fat-1基因是否有效表達，表達產(chǎn)物能否到達預期生理效果以及基因整合表達對轉(zhuǎn)基因豬和人體健康有沒有危害，是轉(zhuǎn)基因豬育種和實現(xiàn)商業(yè)應用的重要測試內(nèi)容。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，該評價方法可以對轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物對轉(zhuǎn)基因豬的生長性能的影響進行準確、可靠地評價，有助于在轉(zhuǎn)fat-1基因豬育種過程中準確控制fat-1基因表達。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，該修復方法可消除轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應對轉(zhuǎn)基因豬生長發(fā)育帶來的副作用，恢復轉(zhuǎn)基因豬受損器官的正常生理功能。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，轉(zhuǎn)基因豬食用該飼料后，可消除基因整合位置效應對生長發(fā)育帶來的副作用。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

一種轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，其包括：檢測轉(zhuǎn)fat-1基因豬的血液生理生化指標和尿液生理生化指標。

一種轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，其包括：

將f1代轉(zhuǎn)基因豬與陰性生產(chǎn)豬雜交，得到f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬；

對獲得的f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬飼喂含紅花籽油復合添加劑的飼料。

一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，所述紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，通過檢測轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)的血液生理生化指標和尿液生理生化指標等數(shù)據(jù)，建立生理生化指標與繁殖性能、豬生長發(fā)育情況關聯(lián)分析方法，判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應，規(guī)范檢測實驗操作，有助于更完整、可靠以及準確地對轉(zhuǎn)基因豬的生長性能和發(fā)育情況作出判斷；

此外，本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，通過將f1代轉(zhuǎn)基因豬(例如f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬)與陰性生產(chǎn)豬雜交，得到f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬，并飼喂含紅花籽油復合添加劑的飼料來消除外源基因整合位置效應副作用。該修復方法可消除轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)基因整合位置效應對轉(zhuǎn)基因豬生長發(fā)育帶來的副作用，恢復轉(zhuǎn)基因豬受損器官的正常生理功能，為轉(zhuǎn)fat-1基因豬育種改進試驗方法提供可靠材料，增加轉(zhuǎn)基因豬肉食用安全性，有益保障人們的身體健康。

另外，本發(fā)明提供的用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)食用后，可消除基因整合位置效應對生長發(fā)育帶來的副作用，恢復轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)由于基因整合位置效應導致的受損器官的生理功能，使轉(zhuǎn)基因豬正常生長，提高其抗病能力。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發(fā)明實施例1提供的對轉(zhuǎn)fat-1基因豬的pcr鑒定結(jié)果；

圖2為本發(fā)明實施例1提供的對轉(zhuǎn)fat-1基因豬的southern印跡分析結(jié)果。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對本發(fā)明實施例的一種轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法、修復方法以及飼料進行具體說明。

ω-3多聚不飽和脂肪酸(pufas)在預防和治療心血管疾病、關節(jié)炎、癌癥等多種疾病方面有重要作用，參與多種生理病理過程，減少心血管疾病的發(fā)生，對腫瘤具有抑制作用。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在豬基因組中導入fat-1基因，提高豬肉中ω-3多聚不飽和脂肪酸含量，有益于人的身體健康，轉(zhuǎn)fat-1基因豬的培育在提高豬肉營養(yǎng)價值方面有重要研究意義和應用前景。

ω-3pufas生理功能很多，食用量少作用不明顯，食用量過大會抑制免疫力、損害細胞膜功能，促進腫瘤、血管疾病發(fā)展。需要增加檢測項目評價轉(zhuǎn)fat-1基因豬外源基因是否合適高效表達以及得到預期生理功效，多方面評價內(nèi)源性產(chǎn)生的ω-3pufas的生理功能。

目前，用于判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應的材料只有肝功能損傷檢測報道，因此需要增加檢測項目和臨床數(shù)據(jù)，準確判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應對豬腎功能、心血管疾病、胃腸道消化功能的影響程度。建立合理關聯(lián)分析方法，同時需要規(guī)范操作，節(jié)約檢測費用，提高工作效率。

基于此，一方面，本發(fā)明提供了轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，其包括：檢測轉(zhuǎn)fat-1基因豬的血液生理生化指標和尿液生理生化指標。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述血液生理生化指標包括：乳酸(ld)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、乳酸脫氫酶(ldh)、膽堿脂酶(che)、總蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glo)、血糖(glu)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)和低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述尿液生理生化指標包括：膽紅素(bil)、尿膽原(ubg)、酮體(ket)、維生素c(vitc)、尿糖(glu)、尿蛋白(pro)、尿潛血(bld)、ph、亞硝酸鹽(nit)、白細胞(leu)以及比重(sg)。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因豬為轉(zhuǎn)fat-1基因豬。

需要說明的是，本發(fā)明的評價方法不僅限于轉(zhuǎn)fat-1基因豬，也可用于評價其他種類轉(zhuǎn)基因豬的健康狀況和基因整合位置效應。

本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，首次引入尿液生理生化指標，通過檢測轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)的血液生理生化指標(例如乳酸、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、膽堿脂酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、血糖、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇)和尿液生理生化指標(膽紅素、尿膽原、酮體、維生素c、尿糖、尿蛋白、尿潛血、ph、亞硝酸鹽、白細胞以及比重。)等數(shù)據(jù)，建立生理生化指標與繁殖性能、豬生長發(fā)育情況關聯(lián)分析方法，判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應，規(guī)范檢測實驗操作，有助于更完整、可靠以及準確地判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應對豬腎功能、心血管疾病、胃腸道消化功能以及肝功能的影響程度。

另一方面，本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，其包括：

將f1代轉(zhuǎn)基因豬與陰性生產(chǎn)豬雜交，得到f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬；

對獲得的f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬飼喂含紅花籽油復合添加劑的飼料。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3-3.5kg、魚粉3-3.5kg以及維生素添加劑7-9g。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因豬為轉(zhuǎn)fat-1基因豬。

本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，通過將f1代轉(zhuǎn)基因豬(例如f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬)與陰性生產(chǎn)豬雜交，得到f2代轉(zhuǎn)基因陽性豬，并飼喂含紅花籽油復合添加劑的飼料來消除f2代轉(zhuǎn)基因豬的外源基因整合位置效應副作用。該修復方法可消除轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)基因整合位置效應對轉(zhuǎn)基因豬生長發(fā)育帶來的副作用，恢復轉(zhuǎn)基因豬受損器官的正常生理功能，為轉(zhuǎn)fat-1基因豬育種改進試驗方法提供可靠材料，增加轉(zhuǎn)基因豬肉食用安全性，有益保障人們的身體健康。

再一方面，本發(fā)明提供了一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，所述紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3-3.5kg、魚粉3-3.5kg以及維生素添加劑7-9g。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3.2kg、魚粉3.34kg以及維生素添加劑0.008kg。

進一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因豬為轉(zhuǎn)fat-1基因豬。

本發(fā)明提供的用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)食用后，可消除基因整合位置效應對生長發(fā)育帶來的副作用，恢復轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)由于基因整合位置效應導致的受損器官的生理功能，使轉(zhuǎn)基因豬正常生長，提高其抗病能力。

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

本實施例提供的轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法，如下：

1轉(zhuǎn)fat-1基因豬外源基因整合檢測

1.1采用pcr法檢測轉(zhuǎn)fat-1基因豬

對生產(chǎn)仔豬(f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬)采集耳組織樣品，用美國生命技術(shù)公司基因組總dna提取試劑盒提取總dna。每個樣品取dna120ng，使用引物hfp1和hfp2進行pcr擴增hfat-1基因片段。特異擴增片段長度為600bp，檢測hfat-1基因在豬基因組中整合。

擴增使用引物：

hfp1:5’-gtgatgctattgctttatttgtaac-3’；

hfp2:5’-ggagcagtggtggaatgcct-3’

pcr反應體系：2xpcr反應混合液12.5ul，dna樣品120ng，1ul10umol/l引物hfp1，1ul10umol/l引物hfp2，加ddh2o至總體積25ul。實驗反應條件：94℃2min；94℃30s,62℃40s,72℃45s,30次循環(huán)反應；72℃延伸5min。2％瓊脂糖凝膠電泳檢查擴增結(jié)果。

結(jié)果如圖1所示(圖中：1代表陽性對照，2代表陰性對照，3-16代表樣品，m代表dna分子標記)，3、7、8、9、10、13、15、16號樣品在600bp的位置有條帶，為pcr法檢測出的轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬。

1.2southern印跡雜交分析fat-1基因整合

pcr法檢測得到的轉(zhuǎn)fat-1基因豬，苯酚抽提方法純化dna樣品，使用southern印跡雜交檢測fat-1基因整合情況。用10ul(100iu)限制性內(nèi)切酶xbai37℃消化7h，消化樣品抽真空濃縮到15ul。檢測使用羅氏公司地高辛標記核酸檢測試劑盒完成。pcr擴增fat-1基因600bp片段，回收純化600bp擴增片段產(chǎn)物作為southern印跡雜交探針。陽性豬特異雜交帶為1.8kb，陰性豬沒有雜交帶。

結(jié)果如圖2所示(圖中：1為陽性對照，2位陰性對照，3-6為樣品)，3、4、6號樣品為southern印跡雜交檢測轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬。

2f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬生理生化指標檢測、繁殖性能、豬生長發(fā)育情況測定

用全自動生化分析儀檢測檢測20頭f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬的血液生理生化指標(乳酸(ld)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、乳酸脫氫酶(ldh)、膽堿脂酶(che)、總蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glo)、血糖(glu)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)和低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c))，用自動尿液分析儀(德國科寶)檢測其尿液生理生化指標(膽紅素(bil)、尿膽原(ubg)、酮體(ket)、維生素c(vitc)、尿糖(glu)、尿蛋白(pro)、尿潛血(bld)、ph、亞硝酸鹽(nit)、白細胞(leu)以及比重(sg))，判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應對豬腎功能、心血管疾病、胃腸道消化功能以及肝功能的影響程度，以生產(chǎn)場陰性豬作為對照。

結(jié)果顯示：f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬生理生化指標檢測、繁殖性能、豬生長發(fā)育情況測定表明部分轉(zhuǎn)基因陽性豬的肝功能受到輕度損傷。同生產(chǎn)場陰性試驗對照豬相比，受損傷豬比例度超過25～50％，說明這種損傷是外源基因?qū)朐斐傻?。f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬的這種疾病是來源于親代陽性公豬的遺傳性疾病，數(shù)據(jù)表明親代陽性公豬繁殖性能輕度下降也是由外源基因?qū)胂嗤蛞鸬?。fat-1基因在豬基因組中的整合影響了其它基因的表達，產(chǎn)生了整合位置效應副作用。

3f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬生理生化指標檢測、繁殖性能、豬生長發(fā)育情況測定

3.1血液生理生化指標檢測

用全自動生化分析儀檢測f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬血漿乳酸、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、血糖、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇、白蛋白、乳酸脫氫酶、膽堿脂酶血液生理生化指標，其中谷丙轉(zhuǎn)氨酶1頭低于正常值，血糖2頭低于正常值，總膽固醇5頭低于正常值；高密度脂蛋白膽固醇2頭高于正常值、低密度脂蛋白膽固醇3頭高于正常值，乳酸脫氫酶2頭高于正常值，其它指標為正常。血液生化指標中少數(shù)指標不正常是由疾病感染引起的，轉(zhuǎn)基因陽性豬與陰性豬之間沒有顯著性差別?？偰懝檀?頭豬低于正常值表明有5頭轉(zhuǎn)基因陽性豬基因表達取得好的生理效果。f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬腎功能、心血管疾病、胃腸道消化功能、肝功能基本正常。

3.2尿液生理生化指標檢測

采集23頭生產(chǎn)場陰性豬、5頭f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬新鮮尿液，用自動尿液分析儀(德國科寶)測試膽紅素、尿膽原、酮體、維生素c、尿糖、尿蛋白、尿潛血、ph、亞硝酸鹽、白細胞、比重共11項尿液生理生化指標，結(jié)果見下表1所示。

表1

表1的檢測結(jié)果表明：陰性豬有6個項目表現(xiàn)為陽性，分別是：維生素c為43％，尿蛋白為35％，ph為50％，亞硝酸鹽為10％，白細胞為5％，比重為17％；而f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬僅有2個項目表現(xiàn)為陽性，分別是：尿蛋白為20％，ph為60％。f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬尿液生理生化指標陽性項目數(shù)量和比率明顯低于生產(chǎn)場陰性豬，說明f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬的泌尿系統(tǒng)健康狀況有明顯改善。

對比例1

對轉(zhuǎn)fat-1基因豬血液生理生化指標測試及健康診斷

21頭陰性試驗對照豬和20頭轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬15項血液生理生化指標測試數(shù)據(jù)見下表，采用全自動生化分析儀完成，結(jié)果如表2所示。

表2

從表2中統(tǒng)計數(shù)據(jù)可知，有4頭陽性豬乳酸濃度升高，2頭陽性豬谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平下降。10頭陽性豬高密度脂蛋白膽固醇含量低于正常豬，1頭陽性豬低密度脂蛋白膽固醇含量低于正常豬。5頭陽性豬乳酸脫氫酶濃高于正常值，并且高密度脂蛋白膽固醇濃度低于正常值。5頭陽性豬γ-球蛋白水平正常偏低，4頭陽性豬膽堿脂酶正常偏低，其它指標都為正常。

生理生化指標測試結(jié)果表明部分轉(zhuǎn)基因陽性豬的肝功能受到輕度損傷。同生產(chǎn)場陰性試驗對照豬相比，受損傷豬比例度超過25～50％，說明這種損傷是外源基因?qū)朐斐傻?。f1代轉(zhuǎn)fat-1基因豬的這種疾病是來源于親代陽性公豬的遺傳性疾病，數(shù)據(jù)表明親代陽性公豬繁殖性能輕度下降也是由外源基因?qū)胂嗤蛞鸬摹?/p>

綜上，現(xiàn)有評價轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應對轉(zhuǎn)基因豬生長發(fā)育的影響通常只檢測血液生理生化指標，不檢測尿液生理生化指標，因此這種評價方法具有局限性，從數(shù)據(jù)中只能判斷出基因整合位置效應對肝功能的影響，不能完整、全面地判斷基因整合位置效應對其他器官的影響。

而本發(fā)明實施例1提供的轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應和表達產(chǎn)物生理功能的評價方法不僅檢測血液生理生化指標，還引入了尿液生理生化指標，因此，通過尿液生理生化指標的結(jié)果，還可以判斷出基因整合位置效應對豬泌尿系統(tǒng)的影響程度，進而更加全面完整地評價轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合位置效應對轉(zhuǎn)基因豬生長發(fā)育的影響。

因此，通過檢測轉(zhuǎn)基因豬(例如轉(zhuǎn)fat-1基因豬)的血液生理生化指標和尿液生理生化指標等數(shù)據(jù)，建立生理生化指標與繁殖性能、豬生長發(fā)育情況關聯(lián)分析方法，判斷轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應，規(guī)范檢測實驗操作，有助于更完整、可靠以及準確地對轉(zhuǎn)基因豬的生長性能和發(fā)育情況作出判斷。

實施例2

本實施例提供了轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應副作用的修復方法，其包括：用含有紅花籽油復合添加劑的飼料飼喂轉(zhuǎn)fat-1基因豬，紅花籽油復合添加劑由紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑組成。

其中，所用飼料按100kg計，其含有：全價育肥豬飼料93.452kg(購自武漢正達飼料有限公司)、紅花籽食用油3.2kg、魚粉3.34kg以及維生素添加劑0.008kg(購自武漢多維科技飼料有限公司)。

全價育肥豬飼料購自武漢正達飼料有限公司，多維復合添加劑購自武漢多維科技飼料有限公司，各種維生素含量見產(chǎn)品說明書。

實施例3

按實施例2提供的修復方法，對實施例1中的f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬進行飼喂，飼喂結(jié)束后，通過檢測血液生理生化指標和尿液生理生化指標判斷基因整合位置效應副作用的修復效果。

1f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬飼喂前后血液生理生化指標檢測

用全自動生化分析儀檢測15頭陽性豬血漿乳酸(ld)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、總蛋白(tp)、血糖(glu)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、總膽固醇(tc)、白蛋白(alb)、乳酸脫氫酶(ldh)、膽堿脂酶(che)、甘油三脂(tg)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)、白細胞介素-12(il-12)共十三項指標，結(jié)果如表3所示。

表3

飼喂試驗后1頭豬谷丙轉(zhuǎn)氨酶低于正常值，血糖2頭豬低于正常值，5頭豬總膽固醇低于正常值(接近正常最低值)。高密度脂蛋白膽固醇2頭高于正常值、低密度脂蛋白膽固醇3頭高于正常值,乳酸脫氫酶2頭豬高于正常值,其它指標為正常。血液生化指標中少數(shù)指標不正常是由疾病感染引起的，轉(zhuǎn)基因陽性豬與陰性豬之間沒有顯著性差別?？偰懝檀?頭豬低于正常值(接近正常最低值)表明有5頭轉(zhuǎn)基因陽性豬基因表達取得好的生理效果。15頭豬總膽固醇平均值低于飼喂前試驗豬，處于正常低值水平，f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬腎功能、心血管疾病、胃腸道消化功能、肝功能基本正常。5頭豬tnf-α濃度正常值低值、6頭豬il-12濃度正常值高值，部分轉(zhuǎn)基因豬抗病能力得到提高。紅花籽油復合添加劑能夠提高轉(zhuǎn)基因豬體質(zhì)，恢復試驗豬器官正常生理功能。

2f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬飼喂前后尿液生理生化指標檢測

采集23頭生產(chǎn)場陰性豬、5頭外型體質(zhì)較差的轉(zhuǎn)fat-1基因f2代陽性豬新鮮尿液，用德國科寶自動尿液分析儀測試膽紅素、尿膽原、酮體、維生素c、尿糖、尿蛋白、尿潛血、ph、亞硝酸鹽、白細胞、比重共11項生理生化指標。結(jié)果如表4(飼喂前)、表5(飼喂后)所示。

表4

表5

檢測結(jié)果表明：采用含紅花籽油復合添加劑的飼料飼喂前，如表4所示，陰性豬與轉(zhuǎn)fat-1基因豬尿液生理生化指標陽性指標數(shù)據(jù)接近，兩組試驗豬腎功能、消化吸收功能情況基本相同。

采用含紅花籽油復合添加劑的飼料飼喂后，如表5所示，陰性豬有6個項目表現(xiàn)為陽性，分別是：維生素c為43％，尿蛋白為35％，ph為50％，亞硝酸鹽為10％，白細胞為5％，比重為17％；f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬有2個項目表現(xiàn)為陽性，分別是：尿蛋白為20％，ph為60％。f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬尿液生理生化指標陽性項目數(shù)量和比率明顯低于生產(chǎn)場陰性豬，說明f2代轉(zhuǎn)fat-1基因陽性豬的泌尿系統(tǒng)健康狀況有明顯改善。

飼喂前后陰性豬尿液生理生化指標陽性指標數(shù)據(jù)接近，紅花籽油復合添加劑對陰性豬泌尿系統(tǒng)健康、消化吸收能力沒有提高功能。而采用含紅花籽油復合添加劑的飼料飼喂f2代轉(zhuǎn)fat-1基因豬，豬血液尿液生理生化指標檢測結(jié)果表明，使用該紅花籽油復合添加劑后能夠克服基因整合位置效應產(chǎn)生的生理健康副作用，恢復豬正常生理功能，提高豬抗病能力。

實施例4

本實施例提供一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，該紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

具有地，該飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3.2kg、魚粉3.34kg以及維生素添加劑0.008kg，其余組分為全價肥育豬飼料。紅花籽食用油3.2kg、魚粉3.34kg以及維生素添加劑0.008kg組成該紅花籽油復合添加劑。

采用本實施例提供的飼料可以修復轉(zhuǎn)fat-1基因豬基因整合位置效應副作用，恢復豬正常生理功能，提高豬抗病能力(效果如實施例3所示)。

實施例5

本實施例提供一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，所述紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

所述飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3kg、魚粉3kg以及維生素添加劑7g。

本實施例提供的用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料的效果同實施例4。

實施例6

本實施例提供一種用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料，其含有紅花籽油復合添加劑，該紅花籽油復合添加劑包括：紅花籽食用油、魚粉以及維生素添加劑。

該飼料按100kg計含有：紅花籽食用油3.5kg、魚粉3.5kg以及維生素添加劑9g；其余組分為全價肥育豬飼料。

本實施例提供的用于修復轉(zhuǎn)基因豬基因整合位置效應副作用的飼料的效果同實施例4。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。