本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)器具領(lǐng)域，具體涉及一種抗體孵育試劑盒及其使用方法。
背景技術(shù)：
生物實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用westernblotting、southernblotting等印跡雜交方法檢測(cè)目的條帶。雜交的孵育過程，傳統(tǒng)方法是將分子所在的膜完全浸泡在含有抗體的液體中，經(jīng)過>1小時(shí)的時(shí)間使得抗體與膜上的目的分子結(jié)合。
westernblotting中，一般將膜與抗體置于小盒中，搖床上孵育，此方法每次所需的抗體量較大；難以應(yīng)對(duì)多抗體孵育；抗體回收不完全，根據(jù)小盒的材質(zhì)不同，回收的效率不盡相同。目前另一種抗體孵育的方法，是將膜和抗體置于塑封膜做成的小袋中，此方法在加樣和抗體回收時(shí)造成時(shí)間和抗體的大量浪費(fèi)，并且難以除去對(duì)實(shí)驗(yàn)有極大影響的氣泡；另外一次性的使用塑封膜，造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。
因此很有必要提供一種方便快捷、效果穩(wěn)定并且節(jié)約成本的試劑盒及其使用方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡單、效果好、成本低的抗體孵育試劑盒及其使用方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種抗體孵育試劑盒，包含盒體和盒蓋，所述盒體包含硅橡膠、不透水薄膜、濕巾和凹槽；所述盒體中裝有硅橡膠，不透水薄膜平鋪于硅橡膠上，不透水薄膜上設(shè)置有凹槽，盒體的內(nèi)壁圍有濕巾。
進(jìn)一步，所述硅橡膠為聚甲基乙烯基硅氧烷。
進(jìn)一步，所述硅橡膠的厚度≥5mm。
進(jìn)一步，所述不透水薄膜為錫箔紙、保鮮膜或封口膜。
進(jìn)一步，所述凹槽的數(shù)量為一個(gè)以上。
進(jìn)一步，所述凹槽為多邊形，圓形或不規(guī)則形狀；優(yōu)選地，所述凹槽為契合雜交膜的多邊形，圓形或不規(guī)則形狀。
本發(fā)明還提供了一種上述抗體孵育試劑盒的使用方法：在平鋪于硅橡膠的不透水薄膜上制造出低于硅橡膠平面的凹槽，將雜交膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、漂洗后，雜交膜含蛋白的一面向上，另一面向凹槽底部，水平鋪于凹槽內(nèi)，滴加抗體稀釋液，使雜交膜浸潤于抗體稀釋液中，進(jìn)行雜交反應(yīng)。
進(jìn)一步，所述凹槽通過在不透水薄膜上施加一定壓力形成，使不透水薄膜與凹槽緊密貼合，凹槽的深度為2-3mm，凹槽面積大于雜交膜的面積。
進(jìn)一步，所述抗體稀釋液的添加量為3～4ml抗體稀釋液/(6cm×8cm)雜交膜。
進(jìn)一步，所述雜交膜為pvdf膜或nc膜。
一般情況下，實(shí)驗(yàn)采用小盒孵育6cm×8cm雜交膜需10ml以上抗體稀釋液，本發(fā)明抗體稀釋液的添加量為3～4ml抗體稀釋液/(6cm×8cm)雜交膜，大大減少了抗體用量，有效節(jié)約了試劑成本。
本發(fā)明所述抗體孵育試劑盒在盒體內(nèi)壁圍有一圈濕巾，可以有效防止稀釋液的蒸發(fā)。
本發(fā)明利用硅橡膠的流動(dòng)性和可塑性，使平鋪于硅橡膠上的不透水薄膜制造出低于硅橡膠平面的凹槽，用于對(duì)抗體孵育提供空間。
本發(fā)明所述試劑盒簡便高效，使用方法簡單，可根據(jù)需要設(shè)置多個(gè)凹槽，同時(shí)進(jìn)行不同抗體的孵育。凹槽可根據(jù)雜交膜的大小和形狀制作，可為圓形、多邊形或不規(guī)則圖形，所形成的空間極小，正合適探針稀釋液的施用，極大節(jié)省抗體量。
孵育多種抗體時(shí)，可以在同一個(gè)密封盒內(nèi)的硅橡膠平面中，做出多個(gè)凹槽，同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?？贵w只存于凹槽中，無交叉污染。可放置搖床孵育以獲得更好的雜交效果。
由于形成了一定的凹槽，在搖床上孵育時(shí)，抗體稀釋液不會(huì)流出，孵育效果好。
凹槽便于抗體的直接回收，加之不透水薄膜的疏水性，因此本發(fā)明的抗體試劑盒的抗體稀釋液的回收率良好，可達(dá)99％。
本發(fā)明抗體孵育試劑盒的使用方法與用密封袋孵育抗體的方法相比，取pvdf膜和回收抗體均較為便捷和完全，節(jié)約了兩倍以上的時(shí)間成本和試劑成本。使用后所有器具和材料均可清洗后回收利用。
本發(fā)明抗體孵育試劑盒可用于westernblotting、southernblotting等印跡雜交實(shí)驗(yàn)。
附圖說明
圖1為試劑盒俯視圖；
其中：盒體1，硅橡膠2，濕巾3，不透水薄膜4，凹槽5，雜交膜6。
具體實(shí)施方式
下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實(shí)施例1抗體試劑盒的制備
1、取一個(gè)可密封的盒子，在其內(nèi)部鋪設(shè)5mm厚度的硅橡膠2使在盒體1內(nèi)形成一水平面。
2、裁剪長、寬均略大于pvdf膜6的不透水薄膜4，將不透水薄膜4安排于硅橡膠2平面上合適的位置平鋪。利用聚甲基乙烯基硅氧烷的可塑性，向不透水薄膜4面中部施加壓力，使得底面下沉2-3mm。至此不透水薄膜4底部成平面，形成凹槽5，凹槽5與不透水薄膜4緊密貼合。
3、在密封盒內(nèi)壁圍一圈濕巾3，以防止抗體稀釋液的蒸發(fā)。
實(shí)施例中不透水薄膜可為封口膜、保鮮膜或錫箔紙。
實(shí)施例中硅橡膠為聚甲基乙烯基硅氧烷。
實(shí)施例2抗體試劑盒的使用
以westernblotting為例：
雜交膜6轉(zhuǎn)膜、漂洗過后，將pvdf膜的含蛋白一面向上，水平鋪于實(shí)施例1試劑盒中的凹槽5內(nèi)，直接滴加抗體稀釋液?？贵w稀釋液的添加量為3～4ml抗體稀釋液/(6cm×8cm)雜交膜?？贵w稀釋液的體積不應(yīng)大于凹槽5。使雜交膜6浸潤于抗體稀釋液中，進(jìn)行雜交反應(yīng)。孵育過程可以保持水平放置，也可以以小角度緩慢搖動(dòng)。
抗體回收：提起一角取走雜交膜后，抗體溶液留存于不透水薄膜4形成的凹槽5中，可以直接使用移液槍快速吸取。
實(shí)施例中雜交膜為pvdf膜或nc膜。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，在無因操作不當(dāng)導(dǎo)致抗體流失的情況下，此方法的抗體稀釋液的回收率可達(dá)99％。此方法所用器具和材料均可清洗后反復(fù)利用，節(jié)約耗材成本。
盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。