本發(fā)明屬于食品檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高油脂豆制品中桐油的定性檢測方法。

背景技術(shù)：

桐油是桐油樹種子榨取所得的油脂，是一種重要的工業(yè)用植物油。桐油主要含有桐酸、亞油酸、棕桐酸、亞麻酸、硬脂酸等脂肪酸和脂肪酸甘油酯，其中桐酸為9,11,13-十八碳三烯酸，具有多種異構(gòu)體，在桐油中以桐酸甘油三酯的形式存在，對腸胃具有強(qiáng)烈的刺激作用，如果誤食桐油，會引起惡心、嘔吐、腹痛、頭痛、嘔血、便血等中毒癥狀，嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)抽搐、呼吸困難、昏迷和呼吸道痙攣等癥狀。

在平湖一帶流行一種叫“潑漿飯粢”的豆制品中，經(jīng)常檢測發(fā)現(xiàn)有毒桐油。按照傳統(tǒng)工藝，需要將黃豆?jié){潑到圓鍋里，形成一張圓形的飯粢。為了使飯粢不粘到鍋上，在潑豆?jié){時(shí)需要先在鍋里抹一層油。這層油一般使用菜籽油等食用油，但是，有些商家為了賣相好看，制作方便，降低成本，使用含有毒性的桐油。由于桐油在成品中的含量較低，一般針對食用油摻桐油的檢測方法，如硫酸法、亞硫酸法、三氯化銻法和苦味酸法等方法的檢出限和靈敏度都不能達(dá)到檢測要求。因此，需要建立一種靈敏度高、檢出限低的分析方法，用于高油脂豆制品中違法添加桐油的定性檢測。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有檢測技術(shù)的缺點(diǎn)和不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種桐油的提取、甲酯化和氣相色譜儀器分析方法，測定樣品中是否含有桐酸甲酯，并以桐酸甲酯作為鑒別樣品中桐油的特征指示成分，從而實(shí)現(xiàn)豆制品中違法添加桐油的定性檢測。

本發(fā)明的桐油檢測方法，其技術(shù)方案包括以下步驟：

(1)稱取豆制品樣品，加入石油醚和乙醚混合溶劑對油脂進(jìn)行萃取，得到油脂樣品；

(2)皂化油脂樣品后，使用三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行甲酯化；

(3)取上層清液，用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測，若檢測到桐酸甲酯，即判斷該樣品中含有桐油。

步驟(1)中，所述石油醚與乙醚的體積比為1:1～3:1。

步驟(1)中，所述豆制品樣品的質(zhì)量與溶劑體積之比為1:3～1:5g/ml。

步驟(3)中，氣相色譜儀的程序升溫過程如下：100℃保持2min，10℃/min升至280℃保持20min。

本發(fā)明利用甲酯化和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法建立了豆制品中違法添加的桐油的定性檢測方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

(1)本發(fā)明以桐油中的特征成分桐酸和桐酸甘油三酯為指示物，并通過甲酯化技術(shù)將沸點(diǎn)高、在氣相色譜中難以氣化的桐酸和桐酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為桐酸甲酯，沸點(diǎn)變低，在gc-ms中峰型良好，靈敏度高。

(2)本發(fā)明將樣品中的桐油經(jīng)過提取和甲酯化后，再利用gc-ms進(jìn)行檢測，使用面積歸一法，對比nist譜庫，對樣品各組分進(jìn)行定性分析，通過鑒定樣品成分中是否含有桐酸甲酯為依據(jù)，判斷高油脂豆制品中是否含有違法使用的桐油。

(3)本發(fā)明特征成分桐酸甲酯在gc-ms中靈敏度高，方法檢出限低至0.01％。

(4)這種方法的抗干擾性好，適用性廣，避免了硫酸法、亞硫酸法、三氯化銻法和苦味酸法等現(xiàn)有方法可能出現(xiàn)的假陽性現(xiàn)象，而且操作簡單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間短，適用于豆制品中桐油的定性檢測。

附圖說明

圖1是實(shí)施例1中的不含桐油的豆制品1的gc-ms總離子流圖(tic)；

圖2是實(shí)施例2中0.01％桐油加標(biāo)豆制品2的gc-ms總離子流圖(tic)，其中箭頭所指的分別是7號和8號峰；

圖3是實(shí)施例2中7號峰桐酸甲酯質(zhì)譜圖；

圖4是實(shí)施例2中8號峰桐酸甲酯質(zhì)譜圖；

圖5是實(shí)施例3中疑似含有桐油豆制品3的gc-ms總離子流圖(tic)，其中箭頭所指的分別是9號、10號和11號峰；

圖6是實(shí)施例3中9號峰桐酸甲酯質(zhì)譜圖；

圖7是實(shí)施例3中10號峰桐酸甲酯質(zhì)譜圖；

圖8是實(shí)施例3中11號峰桐酸甲酯質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1：

廣州市百佳超市油豆腐豆制品1的定性檢測，包括以下步驟：

(1)將油豆腐樣品剪碎至0.5cm²以下的小塊，稱取樣品1.0g于具塞離心管中，加入體積比1:1的石油醚/乙醚混合溶劑3.0ml，蓋上塞子，超聲1min，于渦旋器上渦旋30s，使油脂完全溶解，用濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至另一具塞離心管中，靜置待溶劑揮發(fā)，得到油脂樣品。

(2)往油脂樣品中，加入1ml0.5mol/l的氫氧化鈉-甲醇混合溶液，超聲1min，在60℃水浴中皂化10min，待溶液澄清后，加入2ml14％三氟化硼-甲醇溶液，在65℃水浴上煮沸2min，冷卻，加入1ml乙醚，震蕩混合，待上層溶液澄清后，加入2ml飽和氯化鈉溶液，取上層清液進(jìn)行檢測。

(3)用進(jìn)樣針吸取上層清液，注入gc-ms中進(jìn)行檢測，儀器型號為日本島津qp2010，色譜柱db-5ms(30.0m×250μm,0.25μmthickness)，載氣he，進(jìn)樣體積為2μl，不分流進(jìn)樣，柱流量1ml/min；前進(jìn)樣口溫度為280℃，質(zhì)譜端溫度為280℃；程序升溫過程如下：100℃保持2min，10℃/min升至280℃保持20min。離子源ei，溫度230℃，電離能70ev，掃描模式為scan模式，掃描范圍為50-500m/z。

(4)樣品溶液總離子流圖如圖1所示，使用面積歸一法，并對比nist譜庫，各組分的定性結(jié)果和相對含量如表1所示。樣品溶液不含9,11,13-十八碳三烯酸甲酯，即桐酸甲酯，因此樣品豆制品1中不含有桐油。

表1豆制品1氣相色譜質(zhì)譜分析結(jié)果

實(shí)施例2：

在廣州市百佳超市油豆腐豆制品1中加入0.01％桐油，制成加標(biāo)樣品豆制品2，驗(yàn)證方法檢出限，加標(biāo)方法與檢測方法如下：

準(zhǔn)確稱取0.01g桐油于10ml容量瓶中，加入乙醚定容，混合均勻，配制成1mg/ml的桐油溶液。稱取1.0g油豆腐樣品豆制品1于具塞離心管中，加入100μl桐油溶液，則樣品中含有0.01％桐油，等乙醚揮發(fā)后，按實(shí)施1的操作進(jìn)行提取和分析。

樣品溶液總離子流圖如圖2所示，各組分的定性結(jié)果和相對含量如表2所示。峰號7和8為桐酸甲酯，即9,11,13-十八碳三烯酸甲酯的順反異構(gòu)體，都屬于桐油的特征指示物，其順反異構(gòu)體的個(gè)數(shù)和相對豐度與桐油品種和產(chǎn)地有關(guān)，從圖2可以看出，樣品中含有0.01％桐油的時(shí)候，經(jīng)過本方法處理后，可見非常明顯的桐油甲酯峰，且峰型尖銳，響應(yīng)靈敏，可用于定性，因此，本方法檢出限完全可達(dá)到0.01％。

表2豆制品2氣相色譜質(zhì)譜分析結(jié)果

實(shí)施例3：

浙江省嘉興市海寧市農(nóng)副產(chǎn)品批發(fā)市場某疑似添加桐油的“潑漿飯粢”豆制品3，按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行檢測，樣品溶液總離子流圖如圖所示，使用面積歸一法，并對比nist譜庫，各組分的定性結(jié)果和相對含量如表3所示。峰號9-11為桐酸甲酯，即9,11,13-十八碳三烯酸甲酯的順反異構(gòu)體，都屬于桐油的特征指示物，因此樣品豆制品3中含有桐油。

表3豆制品3氣相色譜質(zhì)譜分析結(jié)果

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。