本發(fā)明涉及一種利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法，尤其是一種血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：利培酮，化學(xué)名稱為3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并異惡唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氫-2-甲基-4h-吡啶并[1，2-α]嘧啶-4-酮，是苯并異惡唑衍生物，是新一代的抗精神病藥。在體內(nèi)部分代謝為9-羥基利培酮，具有同樣的藥理活性。利培酮是一種具有獨(dú)特性質(zhì)的選擇性單胺能拮抗劑，它與5—羥色胺能的5-ht2受體和多巴胺的d2受體有很高的親和力。利培酮也能與腎上腺素能受體結(jié)合，并且以較低的親和力與h1—組胺能受體和α2-腎上腺素受體結(jié)合。利培酮不與膽堿能受體結(jié)合。利培酮是強(qiáng)有力的d2拮抗劑，可以改善精神分裂癥的陽性癥狀，但它引起的運(yùn)動(dòng)功能抑制，以及強(qiáng)直性昏厥都要比經(jīng)典的抗精神病藥少，對(duì)中樞系統(tǒng)的5—羥色胺和多巴胺拮抗作用的平衡可以減少發(fā)生錐體外系副作用的可能，并將其治療作用擴(kuò)展到精神分裂癥的陰性癥狀和情感癥狀。目前從血漿中提取利培酮和9-羥基利培酮主要有兩種方法，固相萃取法(spe)和液液萃取法。spe方法使用進(jìn)口固相萃取小柱成本較高，液液萃取方法使用乙醚萃取時(shí)發(fā)現(xiàn)乙醚會(huì)使ep管材料中的一些組分溶出，與利培酮保留時(shí)間一致，干擾利培酮的測(cè)定；使用二氯甲烷萃取血漿中的活性成分時(shí)，因二氯甲烷密度較大，二氯甲烷在溶液底部，分離時(shí)較困難；將有機(jī)相中的利培酮和9-羥基利培酮反向萃取到酸性水相溶液中，水相溶液使用ph2.2磷酸鹽緩沖液時(shí)，發(fā)現(xiàn)9-羥基利培酮的萃取率較低，還需要降低溶液的ph值；使用c18反相色譜柱進(jìn)行血漿樣品檢測(cè)時(shí)，血漿中的內(nèi)源物質(zhì)有較多干擾。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：基于此，本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法。本方法成本低，可方便檢測(cè)人或動(dòng)物血漿中的利培酮和9-羥基利培酮，方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可操作性強(qiáng)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：一種血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法，包括如下步驟：(1)將血漿樣品進(jìn)行前處理，得到血漿樣品上樣液；(2)用高效液相色譜法對(duì)步驟(1)得到的血漿樣品上樣液進(jìn)行測(cè)定，并分析血漿樣品上樣液的測(cè)定結(jié)果；其中，高效液相色譜條件為：a)色譜柱：c4柱，4.6mm×250mm，粒徑5μm；b)流動(dòng)相為磷酸二氫鉀溶液與乙腈的混合物，其中，所述磷酸二氫鉀溶液與所述乙腈的體積比為65:35～85:15；流速為0.5～1.5ml/min；檢測(cè)波長為278nm。磷酸二氫鉀與乙腈比例太高，利培酮、9-羥基利培酮及內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間延長，增加分析時(shí)間，磷酸二氫鉀與乙腈比例太少，9-羥基利培酮出峰較快，與血漿中組分不能有效分離，本申請(qǐng)發(fā)明人經(jīng)過大量嘗試，發(fā)現(xiàn)上述體積比的磷酸二氫鉀溶液和乙腈混合，既能有效分離血漿中的組分，又能適當(dāng)控制分析時(shí)間。更優(yōu)選地，所述磷酸二氫鉀溶液與所述乙腈的體積比為77:23。此體積比的磷酸二氫鉀溶液和乙腈混合作為流動(dòng)相，能保證在控制分析時(shí)間的同時(shí)，使血漿中組分的分離效果更好。優(yōu)選地，高效液相色譜的進(jìn)樣量為100μl；柱溫為35℃。本發(fā)明采用c4色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，與c18色譜柱相比，減少了血漿中內(nèi)源性物質(zhì)干擾。與使用spe固相萃取柱相比，大大節(jié)省了成本，同時(shí)采用常規(guī)hplc檢測(cè)，避免了儀器的限制。優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述血漿樣品的前處理過程為：在血漿樣品中加入強(qiáng)堿溶液調(diào)節(jié)酸度至溶液的ph值為12以上，然后加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取、抽提，得到乙酸乙酯層；用鹽酸溶液對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提，得到下層水相，將下層水相吹干；用鹽酸溶液復(fù)溶，得到血漿樣品上樣液。由于采用spe方法處理血漿樣品成本高，本發(fā)明采用液液萃取方法提取血漿中的利培酮和9-羥基利培酮，優(yōu)化了提取條件及樣品檢測(cè)的色譜條件，利培酮和9-羥基利培酮的萃取率提高，同時(shí)消除了血漿中內(nèi)源物質(zhì)干擾，可方便、快速檢測(cè)血漿中的利培酮和9-羥基利培酮，方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精確度良好。優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述血漿樣品在進(jìn)行前處理前，還加入內(nèi)標(biāo)物。更優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)物為氯氮平，所述氯氮平與所述血漿樣品的重量體積比為0.1μg/ml，即每毫升血漿樣品中加入0.1μg氯氮平。優(yōu)選地，所述乙酸乙酯與所述血漿樣品的體積比為4:1。用乙酸乙酯旋渦振蕩萃取抽提其中的利培酮和9-羥基利培酮，與使用乙醚相比，避免了ep、pp管(離心管)材質(zhì)中可溶出組分對(duì)利培酮測(cè)定的干擾，利培酮和9-羥基利培酮的萃取率均在80％以上，上述體積比的乙酸乙酯，對(duì)利培酮和9-羥基利培酮的萃取效果更好。優(yōu)選地，所述對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提的鹽酸溶液中，鹽酸的濃度為0.5mol/l～5mol/l，所述鹽酸溶液與所述乙酸乙酯的體積比為1:100～1:20。更優(yōu)選地，所述對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提的鹽酸溶液中，鹽酸的濃度為2mol/l，所述鹽酸溶液與所述乙酸乙酯的體積比為3：80。發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，上述濃度及體積的鹽酸，可以將乙酸乙酯中利培酮和9-羥基利培酮提取到hcl溶液中，有效去除其中脂溶性物質(zhì)，減少干擾，提高提取效果。優(yōu)選地，所述對(duì)下層水相進(jìn)行復(fù)溶的鹽酸溶液中，鹽酸的濃度為0.1mol/l。更優(yōu)選地，所述鹽酸溶液與所述血漿樣品的體積比為3：20。優(yōu)選地，所述強(qiáng)堿溶液為氫氧化鈉溶液，所述氫氧化鈉溶液中氫氧化鈉的濃度為2mol/l。更優(yōu)選地，所述氫氧化鈉溶液與所述血漿樣品的體積比為1:1。優(yōu)選地，所述磷酸二氫鉀溶液的ph值為2.0～6.0。本申請(qǐng)發(fā)明人經(jīng)過大量嘗試發(fā)現(xiàn)，磷酸二氫鉀溶液的ph在上述范圍之外時(shí)，利培酮和9-羥基利培酮和內(nèi)標(biāo)溶液保留時(shí)間均明顯延后，樣品分析時(shí)間變長，其中利培酮和內(nèi)標(biāo)峰變寬，拖尾，造成積分困難。更優(yōu)選地，所述磷酸二氫鉀溶液的ph值為4.0。本申請(qǐng)發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，當(dāng)磷酸二氫鉀溶液的ph值為4.0時(shí)，峰型較好，與血漿中組分無干擾，各組分能有效分離，色譜條件最優(yōu)。優(yōu)選地，所述磷酸二氫鉀溶液的濃度為0.05mol/l。當(dāng)磷酸二氫鉀溶液的濃度低于0.05mol/l時(shí)，9-羥基利培酮和血漿中組分分離度達(dá)不到要求(小于1.5)，當(dāng)磷酸二氫鉀溶液的濃度大于0.05mol/l時(shí)，與0.05mol/l的濃度相比分離度沒有明顯改善，故磷酸二氫鉀溶液的濃度選擇為0.05mol/l。優(yōu)選地，所述血漿樣品中，利培酮和9-羥基利培酮的濃度分別為5～100ng/ml。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明采用液液萃取方法提取血漿中的利培酮和9-羥基利培酮，采用c4色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)化了提取條件及樣品檢測(cè)的色譜條件，利培酮和9-羥基利培酮的萃取率提高，同時(shí)消除了血漿中內(nèi)源物質(zhì)干擾，可方便、快速檢測(cè)血漿中的利培酮和9-羥基利培酮，方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精確度良好。附圖說明圖1為本發(fā)明所述血漿樣品的液相色譜圖；圖2為本發(fā)明所述空白血漿的液相色譜圖；圖3為利用無水乙醚提取血漿樣品后的液相色譜圖；圖4為利用c18色譜柱對(duì)血漿樣品進(jìn)行測(cè)試的液相色譜圖；圖5為9-羥基利培酮與氯氮平的峰面積比與含藥濃度的關(guān)系曲線圖；圖6為利培酮與氯氮平的峰面積比與含藥濃度的關(guān)系曲線圖。具體實(shí)施方式為更好的說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。其中，實(shí)施例中的儀器為：安捷倫1260高效液相色譜儀vwd檢測(cè)器，色譜柱為資生堂proteonavi4.6mm×250mm，c4蛋白分析用色譜柱(孔徑)；實(shí)施例中的試劑為：磷酸二氫鉀分析純天津大茂化學(xué)試劑廠；乙腈色譜純美國天地；利培酮、氯氮平對(duì)照品均購自中國食品與藥品檢定研究院；9-羥基利培酮對(duì)照品購自u(píng)sp藥典。實(shí)施例1本發(fā)明所述血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述方法包括如下步驟：(1)將血漿樣品進(jìn)行前處理：在血漿樣品中，按照氫氧化鈉溶液與血漿樣品的體積比為1:1，加入氫氧化鈉濃度為2mol/l的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)酸度至溶液的ph值為12以上，然后按照乙酸乙酯與血漿樣品的體積比為4:1，加入乙酸乙酯，漩渦振蕩5min，10000rpm離心10min，進(jìn)行萃取、抽提，得到乙酸乙酯層；按照鹽酸溶液與乙酸乙酯的體積比為1：100，用鹽酸的濃度為0.5mol/l的鹽酸溶液對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提，漩渦振蕩5min，靜置，得到下層水相，將下層水相吹干；按照鹽酸溶液與血漿樣品的體積比為3：20，用鹽酸的濃度為0.1mol/l的鹽酸溶液復(fù)溶，得到血漿樣品上樣液。(2)用高效液相色譜法對(duì)步驟(1)得到的血漿樣品上樣液進(jìn)行測(cè)定，并分析血漿樣品上樣液的測(cè)定結(jié)果；其中，高效液相色譜條件為：色譜柱為資生堂proteonavi4.6mm×250mm，c4蛋白分析用色譜柱(孔徑粒徑5μm)；流動(dòng)相為0.05mol/l的磷酸二氫鉀溶液(磷酸二氫鉀溶液的ph值為2.0)和乙腈按照體積比為65:35進(jìn)行混合的混合溶液，流速為0.5ml/min；檢測(cè)波長為278nm；進(jìn)樣量為100μl；柱溫為35℃。實(shí)施例2本發(fā)明所述血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述方法包括如下步驟：(1)將血漿樣品進(jìn)行前處理：在血漿樣品中，按照每毫升血漿樣品中加入0.1μg氯氮平的比例，加入氯氮平混合均勻；按照氫氧化鈉溶液與血漿樣品的體積比為1:1，加入氫氧化鈉濃度為2mol/l的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)酸度至溶液的ph值為12以上，然后按照乙酸乙酯與血漿樣品的體積比為4:1，加入乙酸乙酯，漩渦振蕩5min，10000rpm離心10min，進(jìn)行萃取、抽提，得到乙酸乙酯層；按照鹽酸溶液與乙酸乙酯的體積比為3：80，用鹽酸的濃度為2mol/l的鹽酸溶液對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提，漩渦振蕩5min，靜置，得到下層水相，將下層水相吹干；按照鹽酸溶液與血漿樣品的體積比為3：20，用鹽酸的濃度為0.1mol/l的鹽酸溶液復(fù)溶，得到血漿樣品上樣液。(2)用高效液相色譜法對(duì)步驟(1)得到的血漿樣品上樣液進(jìn)行測(cè)定，并分析血漿樣品上樣液的測(cè)定結(jié)果；其中，高效液相色譜條件為：色譜柱為資生堂proteonavi4.6mm×250mm，c4蛋白分析用色譜柱(孔徑粒徑5μm)；流動(dòng)相為0.05mol/l的磷酸二氫鉀溶液(磷酸二氫鉀溶液的ph值為4.0)和乙腈按照體積比為77:23進(jìn)行混合的混合溶液，流速為1.5ml/min；檢測(cè)波長為278nm；進(jìn)樣量為100μl；柱溫為35℃。實(shí)施例3本發(fā)明所述血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述方法包括如下步驟：(1)將血漿樣品進(jìn)行前處理：在血漿樣品中，按照氫氧化鈉溶液與血漿樣品的體積比為1:1，加入氫氧化鈉濃度為2mol/l的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)酸度至溶液的ph值為12以上，然后按照乙酸乙酯與血漿樣品的體積比為4:1，加入乙酸乙酯，漩渦振蕩5min，10000rpm離心10min，進(jìn)行萃取、抽提，得到乙酸乙酯層；按照鹽酸溶液與乙酸乙酯的體積比為1：20，用鹽酸的濃度為5mol/l的鹽酸溶液對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行萃取、抽提，漩渦振蕩5min，靜置，得到下層水相，將下層水相吹干；按照鹽酸溶液與血漿樣品的體積比為3：20，用鹽酸的濃度為0.1mol/l的鹽酸溶液復(fù)溶，得到血漿樣品上樣液。(2)用高效液相色譜法對(duì)步驟(1)得到的血漿樣品上樣液進(jìn)行測(cè)定，并分析血漿樣品上樣液的測(cè)定結(jié)果；其中，高效液相色譜條件為：色譜柱為資生堂proteonavi4.6mm×250mm，c4蛋白分析用色譜柱(孔徑粒徑5μm)；流動(dòng)相為0.05mol/l的磷酸二氫鉀溶液(磷酸二氫鉀溶液的ph值為6.0)和乙腈按照體積比為85:15進(jìn)行混合的混合溶液，流速為0.5ml/min；檢測(cè)波長為278nm；進(jìn)樣量為100μl；柱溫為35℃。實(shí)施例4本實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述血漿中利培酮及9-羥基利培酮的檢測(cè)方法的檢測(cè)效果進(jìn)行了驗(yàn)證?？瞻籽獫{前處理：取空白血漿1ml至10mlep管中，加100μl1μg/ml的氯氮平溶液，混勻，加入1ml2mol/l的氫氧化鈉溶液，混勻，加入4ml乙酸乙酯，漩渦振蕩5min，10000rpm離心10min，取上層乙酸乙酯至5mlep管中(ep管中預(yù)先加入150μl2mol/l的hcl溶液)，漩渦振蕩5min，靜置，棄去上層乙酸乙酯，下層水相用氮吹儀吹干，用150μl0.1mol/l的hcl復(fù)溶，進(jìn)液相檢測(cè)。血漿樣品前處理：取利培酮、9-羥基利培酮濃度各為50ng/ml的血漿樣品，前處理操作同空白血漿前處理的步驟。色譜柱為資生堂proteonavi4.6mm×250mm，c4蛋白分析用色譜柱(孔徑)；流動(dòng)相為0.05mol/l的磷酸二氫鉀溶液和乙腈按照體積比為77:23進(jìn)行混合的混合溶液，流速為1ml/min；檢測(cè)波長為278nm；進(jìn)樣量為100μl；柱溫為35℃。檢測(cè)結(jié)果：如圖1和圖2所示的液相色譜圖中，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間，縱坐標(biāo)為信號(hào)強(qiáng)度，其中，血漿樣品的液相色譜圖1中，9-羥基利培酮的保留時(shí)間為6.716min，利培酮的保留時(shí)間為8.466min，氯氮平的保留時(shí)間為14.113min，由和圖2空白血漿液相色譜圖的對(duì)照中，可以看出，血漿樣品在利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平出峰處無干擾，利培酮和9-羥基利培酮分離良好。實(shí)施例5本實(shí)施例除了將實(shí)施例4中的乙酸乙酯換為無水乙醚外，其他方法步驟均同實(shí)施例4進(jìn)行空白血漿、血漿樣品中利培酮和9-羥基利培酮、氯氮平的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果：血漿樣品在9-羥基利培酮處有雜質(zhì)峰，干擾樣品測(cè)定，如附圖3所示；通過和實(shí)施例4中的檢測(cè)效果進(jìn)行對(duì)比，進(jìn)一步說明本發(fā)明有機(jī)溶劑選擇乙酸乙酯的進(jìn)步性。實(shí)施例6本實(shí)施例除了將實(shí)施例4中的色譜柱由c4更換為菲羅門gemini、安捷倫zorbaxsb-c18、luna色譜柱外，其他方法步驟均同實(shí)施例4進(jìn)行對(duì)空白血漿、血漿樣品中利培酮和9-羥基利培酮的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果：血漿樣品在9-羥基利培酮處，血漿中其他物質(zhì)未完全分離，與9-羥基利培酮有重疊，干擾樣品的測(cè)定，如附圖4所示。這也進(jìn)一步說明了本發(fā)明測(cè)定方法中選擇c4色譜柱的進(jìn)步性。實(shí)施例7本實(shí)施例通過實(shí)驗(yàn)探究對(duì)有機(jī)溶劑層進(jìn)行萃取、抽提的鹽酸溶液的濃度對(duì)利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平的萃取效果?？瞻籽獫{和血漿樣品制備同實(shí)施例4，分別制備利培酮、9-羥基利培酮濃度各為5ng/ml、20ng/ml、50ng/ml的血漿樣品。在將乙酸乙酯中利培酮和9-羥基利培酮轉(zhuǎn)移至水相時(shí)，水相溶液分別使用相同含量的2mol/lhcl溶液、0.1mol/lhcl溶液、ph2.2的磷酸鹽緩沖液，比較利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平的萃取率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示：表1不同濃度的鹽酸溶液對(duì)利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平的萃取效果從表1中可以看出，使用2mol/l的hcl溶液，利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平均具有更高的萃取率。實(shí)施例8本實(shí)施例對(duì)流動(dòng)相中磷酸二氫鉀溶液的ph對(duì)利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平的萃取效果的影響進(jìn)行了相關(guān)探究。研究方法：按照實(shí)施例4方法制備空白血漿和血漿樣品，分別使用ph3.0、ph4.0、ph5.0的磷酸二氫鉀溶液和乙腈配制流動(dòng)相，利用與實(shí)施例4中相同的方法檢測(cè)利培酮、9-羥基利培酮、氯氮平。檢測(cè)結(jié)果：使用ph3.0磷酸二氫鉀溶液配制流動(dòng)相時(shí)，三種物質(zhì)的保留時(shí)間均提前，造成9-羥基利培酮與血漿中組分未完全分離，干擾9-羥基利培酮的檢測(cè)；使用ph5.0磷酸二氫鉀溶液配制流動(dòng)相時(shí)，三種物質(zhì)的保留時(shí)間明顯延后，且色譜峰明顯變寬，拖尾，造成積分困難；使用ph4.0磷酸二氫鉀溶液配制流動(dòng)相時(shí)，峰型良好，與血漿中組分無干擾，各組分能有效分離，色譜條件最優(yōu)。實(shí)施例9本實(shí)施例按照生物樣品分析方法指導(dǎo)原則，對(duì)本發(fā)明所述檢測(cè)方法進(jìn)行了專屬性、標(biāo)準(zhǔn)曲線(線性、范圍)、準(zhǔn)確度、精密度、檢測(cè)限、定量限等進(jìn)行了驗(yàn)證。專屬性分析：分別測(cè)定了6個(gè)不同個(gè)體的空白血漿，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明6個(gè)不同個(gè)體的空白血漿對(duì)活性成分及內(nèi)標(biāo)(氯氮平)的測(cè)定均無干擾。標(biāo)準(zhǔn)曲線：按照本發(fā)明所述檢測(cè)方法制備了利培酮、9-羥基利培酮的濃度分別為5ng/ml～100ng/ml的血漿樣品并進(jìn)行了液相色譜檢測(cè)，研究了利培酮、9-羥基利培酮與氯氮平的峰面積比與含藥濃度之間的關(guān)系，具體數(shù)據(jù)結(jié)果如表2、表3、圖5、圖6所示。表29-羥基利培酮與氯氮平的峰面積數(shù)據(jù)含藥濃度ng/ml9-羥利培酮峰面積內(nèi)標(biāo)峰面積9-羥利培酮/內(nèi)標(biāo)4.995957713913540.049.9910820513751500.0819.9823324512615850.1829.9736751213748000.2739.9652970514093480.3849.9561585613853970.4474.9297796714654150.6799.90131627613874270.95表3利培酮與氯氮平的峰面積數(shù)據(jù)濃度ng/ml利培酮峰面積內(nèi)標(biāo)峰面積利培酮/內(nèi)標(biāo)5.027858213913540.0610.0313065713751500.1020.0725634312615850.2030.1041611413748000.3040.1456331714093480.4050.1766136213853970.4875.26104356314654150.71100.35134061913874270.97從表2、表3中的數(shù)據(jù)可以看出，在利培酮、9-羥基利培酮的濃度分別為5ng/ml～100ng/ml的血漿樣品濃度范圍內(nèi)，利培酮、9-羥基利培酮與氯氮平的峰面積相關(guān)系數(shù)的平方r2均大于0.99；從圖5、圖6可以看出，在上述含藥濃度范圍內(nèi)，利培酮、9-羥基利培酮與氯氮平的峰面積比與含藥濃度呈良好的線性關(guān)系。準(zhǔn)確度、重復(fù)性探究：分別配制利培酮、9-羥基利培酮的濃度各為10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml作為低、中、高含藥濃度血漿樣品，每個(gè)濃度平行5個(gè)樣品，計(jì)算每個(gè)濃度樣品的回收率及rsd，具體數(shù)據(jù)如表4所示。表4樣品的回收率及rsd數(shù)據(jù)從表4中的數(shù)據(jù)可以看出，高、中、低三個(gè)濃度的樣品回收率均在85％～115％的可接受范圍內(nèi)，rsd均小于15％，說明本發(fā)明所述檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和重復(fù)性良好。檢測(cè)限、定量限：配制不同濃度的血漿樣品，記錄信噪比10為定量限濃度，信噪比3為檢測(cè)限濃度，實(shí)驗(yàn)得到：利培酮和9-羥基利培酮的檢測(cè)限為1ng/ml，定量限為5ng/ml。最后所應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。當(dāng)前第1頁12