本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑領(lǐng)域，涉及一種hcg周期檢測試劑盒的制備方法。

背景技術(shù)：

在早孕期間，懷孕天數(shù)是從上一次月經(jīng)結(jié)束后的第一天開始算起，這種計(jì)算方法較為不精確；一般的早孕檢測試紙是采用雙抗體夾心一步法進(jìn)行檢測的，以膠體金為指示標(biāo)記，檢測尿液中hcg濃度，只能用以判斷是否懷孕，而不能檢測出懷孕時間。人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,hcg)是妊娠期期間由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌生產(chǎn)的一種糖蛋白激素，由兩個不同的亞基，α、β以非共價鍵連接組成。在激素的產(chǎn)生、分泌、代謝等過程中，hcg分子會發(fā)現(xiàn)斷裂、離解等多種變化，從而在血、尿中以多種分子形式存在。hcg是唯一不隨胎盤重量增加而分泌增多的胎盤激素，妊娠1周后血液hcg為5-50mmiu/ml，尿液hcg＞25miu/ml，第8-10周左右達(dá)到高峰，持續(xù)1-2周后迅速減低，以后逐漸下降并以1/5-1/10左右峰值水平維持至分娩。

目前，通過抽血檢驗(yàn)、超聲檢測、hcg檢測與超聲檢測結(jié)合的方法來檢測懷孕天數(shù)，但是這些方法需要專業(yè)人員經(jīng)過較長時間的檢測才能得到檢測結(jié)果，操作較為復(fù)雜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了克服以上的不足，提供一種檢測方便、檢測速度快、檢測效率高的的hcg周期檢測試劑盒及其制備方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：一種hcg周期檢測試劑盒，包括上蓋和卡殼，卡殼內(nèi)設(shè)有兩個平行設(shè)置的凹槽，其中一個凹槽中安裝有t1檢測試紙，另一個凹槽中安裝有t2檢測試紙；t1檢測試紙包括第一塑料基片，第一塑料基片上設(shè)有第一上樣墊和第一吸水墊，第一上樣墊和第一吸水墊上均設(shè)有第一保護(hù)膜，第一上樣墊和第一吸水墊之間下方設(shè)有第一硝酸纖維素膜，第一上樣墊的連接端設(shè)有固相化膠體金t1線，固相化膠體金t1線的一端與第一硝酸纖維素膜的一端搭接在一起，第一硝酸纖維素膜上依次包被有第一檢測線和第一質(zhì)控線，固相化膠體金t1線為抗β-hcg單克隆抗體；第一檢測線包被抗α-hcg單克隆抗體和第一質(zhì)控線包被抗鼠igg多克隆抗體；

t2檢測試紙包括第二塑料基片，第二塑料基片上設(shè)有第二上樣墊和第二吸水墊，第二上樣墊和第二吸水墊上均設(shè)有第二保護(hù)膜，第二上樣墊和第二吸水墊之間下方設(shè)有第二硝酸纖維素膜，第二上樣墊的連接端設(shè)有固相化膠體金t2線，固相化膠體金t2線的一端與第二硝酸纖維素膜的一端搭接在一起，第二硝酸纖維素膜上依次包被有第二檢測線和第二質(zhì)控線，固相化膠體金t2線為抗β-hcg單克隆抗體+游離β抗體；第二檢測線包被抗α-hcg單克隆抗體和第二質(zhì)控線包被抗鼠igg多克隆抗體；

一種hcg周期檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

a、硝酸纖維素膜的制備：

a、選擇3um～10um孔徑的硝酸纖維素膜，根據(jù)需要將膜分切成寬度為大于等于2.0cm,長度為30.5cm的規(guī)格備；

b、用0.1m磷酸鹽緩沖液配制供測線包被使用的抗α-hcg單克隆抗體1.3mg/ml及用質(zhì)量百分含量0.85%的氯化鈉緩沖液配制質(zhì)控線包被使用的抗鼠igg多克隆抗體2.0mg/ml；

c、選擇硝酸纖維素膜的抗體包被面并作標(biāo)記，將需包被的檢測線和質(zhì)控線平行均勻的包被在膜片上，且檢測線與質(zhì)控線的間距控制在距離0.5cm，硝酸纖維素膜在4℃～35℃的恒溫條件下干燥備用；

d、配置封閉處理浸泡液，向配液罐加入實(shí)際生產(chǎn)量的純化水；用電子分析天平稱量0.1mol緩沖液、質(zhì)量百分含量0.5%的糖份、質(zhì)量百分含量1%的封閉蛋白、質(zhì)量百分含量0.05％的防腐劑，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分?jǐn)嚢杈鶆?，攪拌時間不少于10分鐘，備用；

e、將包被膜放于處理槽中，加入配好的溫度在36℃0.01m的pbs緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01m的pbs緩沖液中5分鐘，并保證膜不移動、不重疊，5分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01m的pbs緩沖液倒掉；再將第一次用0.01m的pbs緩沖液浸泡過5分鐘的膜放入處理槽中，加入配好的0.01m的pbs緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01m的pbs緩沖液中30分鐘，并保證膜不移動、不重疊，30分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01m的pbs緩沖液倒掉；然后將用0.01m的pbs緩沖液浸泡過兩次的膜放于處理槽中，用配好的封閉處理浸泡液浸泡，確保每條膜完全浸沒在處理液中15分鐘，并保證膜不移動、不重疊，15分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將每框的膜重新拉一邊，確保膜沒有移到框子外面和沒有膜重貼后，再將框子和膜放入處理液中繼續(xù)浸泡20分鐘，20分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將膜拉在紗布上晾稍干；

f、貼板干燥：撕去膠板雙面膠上切割線中間的白紙，用鑷子將膜正好放在膠板中央空白位置并使切角在右上方，且膠板右邊與膜右邊平齊，避免在生產(chǎn)過程中的誤差，確保顯色位置相對準(zhǔn)確，貼板時全部頂c線一頭貼，膜貼在膠板上后，隔著雙面膠紙抹平膜面，避免有氣泡，控制室內(nèi)的溫度18～28℃、相對濕度≤40％，并保證干燥間空氣能循環(huán)流通且除濕機(jī)風(fēng)不會直接吹到膜面上。干燥時間≥4小時，后備用；

b、聚酯纖維條的標(biāo)記及固相：

a、膠體金復(fù)溶液的配制：向配液罐加入實(shí)際生產(chǎn)量的純化水；用電子分析天平稱量質(zhì)量百分含量5%的海藻糖、質(zhì)量百分含量2%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分含量0.5%的檸檬酸三鈉、質(zhì)量百分含量0.05%的聚乙二醇、質(zhì)量百分含量0.05％的nan3，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分?jǐn)嚢杈鶆?，攪拌時間大于30分鐘，備用；

b、用量筒量取需要標(biāo)記量的膠體金，按ph6.5-7.0進(jìn)行調(diào)節(jié)，即加入體積百分含量0.53%的0.2mol/l的碳酸鉀溶液，于磁力攪拌器上攪拌15分鐘后，取抗β-hcg單克隆抗體按5ug/ml標(biāo)記膠體金體積體積百分含量5%的雙蒸水中稀釋并混合均勻，加入膠體金中，于磁力攪拌器上攪拌30分鐘后加入體積百分含量0.5‰穩(wěn)定劑后攪拌30分鐘后離心，收集沉淀，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量3%復(fù)溶，于磁力攪拌器上攪拌至混合均勻，備用；

c、取上述b體積百分含量3%復(fù)溶的膠體金，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量40%復(fù)溶，于磁力攪拌器上混合均勻，將混合均勻的膠體金溶液按照50μl/cm²進(jìn)行澆制在準(zhǔn)備好的膠體金吸附墊上，置于干燥室晾干≥4個小時，干燥室控制溫度18-28℃，相對濕度≤40%，保證空氣暢通且氣流不能直接吹于膠體金吸附墊上，將干燥好的標(biāo)記金放入到裝有干燥劑的鋁箔袋中，密封保存，做好標(biāo)記為t1線，備用；

注：膠體金為澆制，是因?yàn)闈仓频哪z體金可以自由的裁切寬度，從而方便調(diào)節(jié)產(chǎn)品的深淺顯色。

d、用量筒量取需要標(biāo)記量的膠體金，按ph6.5-7.0進(jìn)行調(diào)節(jié)，即加入體積百分含量0.53%0.2mol/l的碳酸鉀溶液，于磁力攪拌器上攪拌15分鐘后，取抗β-hcg單克隆抗體按5ug/ml標(biāo)記膠體金，用體積百分含量5%的雙蒸水稀釋并混合均勻，加入膠體金中，于磁力攪拌器上攪拌30分鐘后加入體積百分含量0.5‰穩(wěn)定劑后攪拌30分鐘后離心，收集沉淀，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量3%復(fù)溶，于磁力攪拌器上攪拌至混合均勻，備用；

e、取上述d體積百分含量3%復(fù)溶的膠體金，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量40%復(fù)溶，再按抗體標(biāo)記量1:10加入游離β抗體，于磁力攪拌器上混合均勻，將混合均勻的膠體金溶液按照50μl/cm²進(jìn)行澆制在準(zhǔn)備好的膠體金吸附墊上，置于干燥室晾干≥4個小時，干燥室控制溫度18-28℃，相對濕度≤40%，保證空氣暢通且氣流不能直接吹于膠體金吸附墊上，將干燥好的標(biāo)記金放入到裝有干燥劑的鋁箔袋中，密封保存，做好標(biāo)記為t2線，備用；

注：膠體金為澆制，是因?yàn)闈仓频哪z體金可以自由的裁切寬度，從而方便調(diào)節(jié)產(chǎn)品的深淺顯色。

c、組裝及裁切：

a、取已粘貼硝酸纖維素膜的透明基片半成品，將固相了的固相化膠體金t1線按0.5cm寬度裁切成0.5cm×30cm的條狀后粘貼在透明基片上，并保持與硝酸纖維素膜呈搭接約1mm，將吸水紙復(fù)合在硝酸纖維素膜的透明基片膜上端并與膜搭接約1mm，將吸樣載體復(fù)合在固相了的膠體金t1線下端并與其搭接約1mm，做好標(biāo)記，備用；

b、根據(jù)相應(yīng)的反應(yīng)裝置，將已組裝備用的基片，切割成條狀試紙，做好標(biāo)記t1檢測試紙備用。

c、取已粘貼硝酸纖維素膜的透明基片半成品，將固相了的固相化膠體金t2線按0.5cm寬度裁切成0.5cm×30cm的條狀后粘貼在透明基片上，并保持與硝酸纖維素膜呈搭接約1mm，將吸水紙復(fù)合在硝酸纖維素膜的透明基片膜上端并與膜搭接約1mm，將吸樣載體復(fù)合在固相了的膠體金t2線下端并與其搭接約1mm，做好標(biāo)記，備用；

d、根據(jù)相應(yīng)的反應(yīng)裝置，將已組裝備用的基片，切割成條狀試紙，做好標(biāo)記t2檢測試紙備用。

e、將準(zhǔn)備好合格的t1檢測試紙裝入合格卡殼的左側(cè)凹槽中，手柄紙?jiān)谏戏?，再將?zhǔn)備好合格的t2檢測試紙裝入卡殼的右側(cè)凹槽中，蓋上上蓋，捏緊，上蓋上的文字應(yīng)與試紙對應(yīng)。

本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)在于：硝酸纖維素膜制備d步驟和e步驟中的封閉處理浸泡液含有的緩沖液為磷酸鹽。

本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)在于：硝酸纖維素膜制備d步驟和e步驟中的封閉處理浸泡液含有的糖份為蔗糖或海藻糖。

本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)在于：硝酸纖維素膜制備d步驟和e步驟中的封閉處理浸泡液含有的封閉蛋白為絡(luò)蛋白或牛血清白蛋白。

本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)在于：硝酸纖維素膜制備d步驟和e步驟中的封閉處理浸泡液含有的防腐劑為nan3或硫柳汞。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明應(yīng)用雙抗體夾心法及免疫層析法的原理定性檢測孕齡婦女尿液中的人絨毛膜促性腺激素（hcg），提示孕周期，檢測步驟較為簡單，5分鐘內(nèi)就可以觀察到結(jié)果，一般使用者可以自己進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果較為精確。本發(fā)明通過t1檢測線和t2檢測線顏色深淺，從而可估算懷孕周數(shù)，推測受孕時間。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明的t1檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本發(fā)明的t2檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中標(biāo)號：1-t1檢測試紙、2-t2檢測試紙、3-上蓋、4-卡殼、1-1-第一塑料基片、1-2-第一上樣墊、1-3-第一吸水墊、1-4-第一保護(hù)膜、1-5-第一硝酸纖維素膜、1-6-第一固相化膠體金t1線、t1-第一檢測線、c1-第一質(zhì)控線、2-1-第二塑料基片、2-2-第二上樣墊、2-3-第二吸水墊、2-4-第二保護(hù)膜、2-5-第二硝酸纖維素膜、2-6-第二固相化膠體金t2線、t2-第二檢測線、c2-第二質(zhì)控線。

具體實(shí)施方式：

為了加深對本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合實(shí)施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，該實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。

如圖1至圖3示出了本發(fā)明一種早孕提示孕周期檢測試紙的一種實(shí)施方式，包括上蓋3和卡殼4，卡殼4內(nèi)設(shè)有兩個平行設(shè)置的凹槽，其中一個所述凹槽中安裝有t1檢測試紙1，另一個所述凹槽中安裝有t2檢測試紙2；

t1檢測試紙1包括第一塑料基片1-1，第一塑料基片1-1上設(shè)有第一上樣墊1-2和第一吸水墊1-3，第一上樣墊1-2和第一吸水墊1-3上均設(shè)有第一保護(hù)膜1-4，第一上樣墊1-2和第一吸水墊1-3之間下方設(shè)有第一硝酸纖維素膜1-5，第一上樣墊1-2的連接端設(shè)有固相化膠體金t1線1-6，固相化膠體金t1線1-6的一端與第一硝酸纖維素膜1-5的一端搭接在一起，第一硝酸纖維素膜1-5上依次包被有第一檢測線t1和第一質(zhì)控線c1，固相化膠體金t1線1-6為抗β-hcg單克隆抗體；第一檢測線t1包被抗α-hcg單克隆抗體和第一質(zhì)控線c1包被抗鼠igg多克隆抗體；

t2檢測試紙2包括第二塑料基片2-1，第二塑料基片2-1上設(shè)有第二上樣墊2-2和第二吸水墊2-3，第二上樣墊2-2和第二吸水墊2-3上均設(shè)有第二保護(hù)膜2-4，第二上樣墊2-2和第二吸水墊2-3之間下方設(shè)有第二硝酸纖維素膜2-5，第二上樣墊2-2的連接端設(shè)有固相化膠體金t2線2-6，固相化膠體金t2線2-6的一端與第二硝酸纖維素膜2-5的一端搭接在一起，第二硝酸纖維素膜2-5上依次包被有第二檢測線t2和第二質(zhì)控線c2，固相化膠體金t2線2-6為抗β-hcg單克隆抗體+游離β抗體；第二檢測線t2包被抗α-hcg單克隆抗體和第二質(zhì)控線c2包被抗鼠igg多克隆抗體。

一種hcg周期檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：：

a、硝酸纖維素膜的制備：

a、選擇3um～10um孔徑的硝酸纖維素膜，根據(jù)需要將膜分切成寬度為大于等于2.0cm,長度為30.5cm的規(guī)格備；

b、用0.1m磷酸鹽緩沖液配制供測線包被使用的抗α-hcg單克隆抗體1.3mg/ml及用質(zhì)量百分含量0.85%的氯化鈉緩沖液配制質(zhì)控線包被使用的抗鼠igg多克隆抗體2.0mg/ml；

c、選擇硝酸纖維素膜的抗體包被面并作標(biāo)記，將需包被的檢測線和質(zhì)控線平行均勻的包被在膜片上，且檢測線與質(zhì)控線的間距控制在距離0.5cm，硝酸纖維素膜在4℃～35℃的恒溫條件下干燥備用；

d、配置封閉處理浸泡液，向配液罐加入實(shí)際生產(chǎn)量的純化水；用電子分析天平稱量0.1mol緩沖液、質(zhì)量百分含量0.5%的糖份、質(zhì)量百分含量1%的封閉蛋白、質(zhì)量百分含量0.05％的防腐劑，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分?jǐn)嚢杈鶆颍瑪嚢钑r間不少于10分鐘，備用；

e、將包被膜放于處理槽中，加入配好的溫度在36℃0.01m的pbs緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01m的pbs緩沖液中5分鐘，并保證膜不移動、不重疊，5分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01m的pbs緩沖液倒掉；再將第一次用0.01m的pbs緩沖液浸泡過5分鐘的膜放入處理槽中，加入配好的0.01m的pbs緩沖液，確保每條膜完全浸沒在0.01m的pbs緩沖液中30分鐘，并保證膜不移動、不重疊，30分鐘后將膜從處理槽中取出，將0.01m的pbs緩沖液倒掉；然后將用0.01m的pbs緩沖液浸泡過兩次的膜放于處理槽中，用配好的封閉處理浸泡液浸泡，確保每條膜完全浸沒在處理液中15分鐘，并保證膜不移動、不重疊，15分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將每框的膜重新拉一邊，確保膜沒有移到框子外面和沒有膜重貼后，再將框子和膜放入處理液中繼續(xù)浸泡20分鐘，20分鐘后將膜從處理槽中取出，用鑷子將膜拉在紗布上晾稍干；

f、貼板干燥：撕去膠板雙面膠上切割線中間的白紙，用鑷子將膜正好放在膠板中央空白位置并使切角在右上方，且膠板右邊與膜右邊平齊，避免在生產(chǎn)過程中的誤差，確保顯色位置相對準(zhǔn)確，貼板時全部頂c線一頭貼，膜貼在膠板上后，隔著雙面膠紙抹平膜面，避免有氣泡，控制室內(nèi)的溫度18～28℃、相對濕度≤40％，并保證干燥間空氣能循環(huán)流通且除濕機(jī)風(fēng)不會直接吹到膜面上。干燥時間≥4小時，后備用；

b、聚酯纖維條的標(biāo)記及固相：

a、膠體金復(fù)溶液的配制：向配液罐加入實(shí)際生產(chǎn)量的純化水；用電子分析天平稱量質(zhì)量百分含量5%的海藻糖、質(zhì)量百分含量2%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分含量0.5%的檸檬酸三鈉、質(zhì)量百分含量0.05%的聚乙二醇、質(zhì)量百分含量0.05％的nan3，直接加入到配液罐中攪拌，攪拌直至完全溶解，加純化水定容至所需體積，充分?jǐn)嚢杈鶆?，攪拌時間大于30分鐘，備用；

b、用量筒量取需要標(biāo)記量的膠體金，按ph6.5-7.0進(jìn)行調(diào)節(jié)，即加入體積百分含量0.53%的0.2mol/l的碳酸鉀溶液，于磁力攪拌器上攪拌15分鐘后，取抗β-hcg單克隆抗體按5ug/ml標(biāo)記膠體金體積體積百分含量5%的雙蒸水中稀釋并混合均勻，加入膠體金中，于磁力攪拌器上攪拌30分鐘后加入體積百分含量0.5‰穩(wěn)定劑后攪拌30分鐘后離心，收集沉淀，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量3%復(fù)溶，于磁力攪拌器上攪拌至混合均勻，備用；

c、取上述b體積百分含量3%復(fù)溶的膠體金，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量40%復(fù)溶，于磁力攪拌器上混合均勻，將混合均勻的膠體金溶液按照50μl/cm²進(jìn)行澆制在準(zhǔn)備好的膠體金吸附墊上，置于干燥室晾干≥4個小時，干燥室控制溫度18-28℃，相對濕度≤40%，保證空氣暢通且氣流不能直接吹于膠體金吸附墊上，將干燥好的標(biāo)記金放入到裝有干燥劑的鋁箔袋中，密封保存，做好標(biāo)記為t1線，備用；

注：膠體金為澆制，是因?yàn)闈仓频哪z體金可以自由的裁切寬度，從而方便調(diào)節(jié)產(chǎn)品的深淺顯色。

d、用量筒量取需要標(biāo)記量的膠體金，按ph6.5-7.0進(jìn)行調(diào)節(jié)，即加入體積百分含量0.53%0.2mol/l的碳酸鉀溶液，于磁力攪拌器上攪拌15分鐘后，取抗β-hcg單克隆抗體按5ug/ml標(biāo)記膠體金，用體積百分含量5%的雙蒸水稀釋并混合均勻，加入膠體金中，于磁力攪拌器上攪拌30分鐘后加入體積百分含量0.5‰穩(wěn)定劑后攪拌30分鐘后離心，收集沉淀，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量3%復(fù)溶，于磁力攪拌器上攪拌至混合均勻，備用；

e、取上述d體積百分含量3%復(fù)溶的膠體金，用膠體金復(fù)溶液按體積百分含量40%復(fù)溶，再按抗體標(biāo)記量1:10加入游離β抗體，于磁力攪拌器上混合均勻，將混合均勻的膠體金溶液按照50μl/cm²進(jìn)行澆制在準(zhǔn)備好的膠體金吸附墊上，置于干燥室晾干≥4個小時，干燥室控制溫度18-28℃，相對濕度≤40%，保證空氣暢通且氣流不能直接吹于膠體金吸附墊上，將干燥好的標(biāo)記金放入到裝有干燥劑的鋁箔袋中，密封保存，做好標(biāo)記為t2線，備用；

注：膠體金為澆制，是因?yàn)闈仓频哪z體金可以自由的裁切寬度，從而方便調(diào)節(jié)產(chǎn)品的深淺顯色。

c、組裝及裁切：

a、取已粘貼硝酸纖維素膜的透明基片半成品，將固相了的固相化膠體金t1線按0.5cm寬度裁切成0.5cm×30cm的條狀后粘貼在透明基片上，并保持與硝酸纖維素膜呈搭接約1mm，將吸水紙復(fù)合在硝酸纖維素膜的透明基片膜上端并與膜搭接約1mm，將吸樣載體復(fù)合在固相了的膠體金t1線下端并與其搭接約1mm，做好標(biāo)記，備用；

b、根據(jù)相應(yīng)的反應(yīng)裝置，將已組裝備用的基片，切割成條狀試紙，做好標(biāo)記t1檢測試紙備用。

c、取已粘貼硝酸纖維素膜的透明基片半成品，將固相了的固相化膠體金t2線按0.5cm寬度裁切成0.5cm×30cm的條狀后粘貼在透明基片上，并保持與硝酸纖維素膜呈搭接約1mm，將吸水紙復(fù)合在硝酸纖維素膜的透明基片膜上端并與膜搭接約1mm，將吸樣載體復(fù)合在固相了的膠體金t2線下端并與其搭接約1mm，做好標(biāo)記，備用；

d、根據(jù)相應(yīng)的反應(yīng)裝置，將已組裝備用的基片，切割成條狀試紙，做好標(biāo)記t2檢測試紙備用。

e、將準(zhǔn)備好合格的t1檢測試紙裝入合格卡殼的左側(cè)凹槽中，手柄紙?jiān)谏戏剑賹?zhǔn)備好合格的t2檢測試紙裝入卡殼的右側(cè)凹槽中，蓋上上蓋，捏緊，上蓋上的文字應(yīng)與試紙對應(yīng)。

本發(fā)明的應(yīng)用為：本產(chǎn)品系由在硝酸纖維素膜上檢測線位置均包被抗人絨毛膜促性腺激素α-hcg單克隆抗體，質(zhì)控線位置包被抗鼠igg多克隆抗體，及在t1檢測線膠體金墊上吸附的膠體金-抗人絨毛膜促性腺激素β-hcg單克隆抗體結(jié)合物組成和t2檢測線膠體金墊上吸附的膠體金-抗人絨毛膜促性腺激素β-hcg單克隆抗體和游離β抗體組成，應(yīng)用雙抗體夾心法及免疫層析法的原理定性檢測尿液中人絨毛膜促性腺激素。

檢測開始時間為月經(jīng)應(yīng)該來但沒有來的當(dāng)天。如果提前檢測，請?jiān)陬A(yù)計(jì)的月經(jīng)之日再次檢測。如果月經(jīng)推遲，請?jiān)?天后再次檢測。如果經(jīng)期不規(guī)律，檢測前應(yīng)以最近月份中最長的經(jīng)期計(jì)算。如果完全不知道月經(jīng)預(yù)計(jì)何時開始，建議至少在上次未采取保護(hù)措施行房19天后再進(jìn)行檢測。

具體檢測步驟為：（1）被檢樣品、試劑盒及其他所用器材均在室溫平衡；（2）除去試劑盒外包裝，在試紙卡上標(biāo)明被檢樣品或?qū)φ掌?；?）取下試紙卡卡套，將試紙卡樣品端插入尿樣中（試紙卡樣品端需完全浸泡到尿液中）；（4）3-10秒后取出平放，5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，觀察t1檢測線和t2檢測線顏色的深淺，5分鐘后結(jié)果無效。

本發(fā)明通過t1檢測線和t2檢測線顏色深淺，從而可估算懷孕周數(shù)，推測受孕時間。檢驗(yàn)結(jié)果如下：（1）陰性（-）：只有對照c線顯色，檢測線t1和t2均無顯色，表明未懷孕；（2）陽性（+）：對照c線始終顯色：t1、t2線顯色情況見下表：

（3）無效：若試紙檢測t區(qū)（t1和t2檢測線）和對照c區(qū)（對照線）均無紫紅色線出現(xiàn)，或者對照c區(qū)（對照線）無紫紅色線出現(xiàn)，表示該試紙已經(jīng)失效；

（4）根據(jù)所提示的懷孕時間，可以推算在何時受孕。但是，醫(yī)生則是根據(jù)上次月經(jīng)的第1天計(jì)算出懷孕時間。

本發(fā)明應(yīng)用雙抗體夾心法及免疫層析法的原理定性檢測尿液中人絨毛膜促性腺激素，提示孕周期。檢測步驟較為簡單，5分鐘內(nèi)就可以觀察到結(jié)果，一般使用者可以自己進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果較為精確。本發(fā)明通過第一檢測線和第二檢測線顏色深淺，從而可估算懷孕周數(shù)，推測受孕時間。

實(shí)施例1：

從同一批中隨機(jī)抽樣，最低抽樣量不得少于檢測用量的3倍。

取樣后將待檢品置于黃色待檢區(qū)，能當(dāng)天檢驗(yàn)的當(dāng)天檢驗(yàn)，不能的情況下必須于第二天檢驗(yàn)完畢。檢驗(yàn)合格剩下的紙條可作為留樣，暫置于合格品區(qū)，然后根據(jù)產(chǎn)量以及留樣要求再從生產(chǎn)上抽取一定的數(shù)量進(jìn)行成品的留樣。

1、所需試劑如下:0miu/ml的樣品液:含蛋白的磷酸鹽緩沖液（pbs）即為0miu/ml的hcg樣品液。50miu/ml，25miu/ml，12.5miu/ml的人絨毛膜促性腺激素（hcg）樣品液:將人絨毛膜促性腺激素（hcg）標(biāo)準(zhǔn)品用含蛋白的磷酸鹽緩沖液（0.01mpbs）配制成相應(yīng)濃度；400miu/ml，200miu/ml，100miu/ml的人絨毛膜促性腺激素（hcg）樣品液:將人絨毛膜促性腺激素（hcg）標(biāo)準(zhǔn)品用含蛋白的磷酸鹽緩沖液（pbs）配制成相應(yīng)濃度；500miu/ml人促黃體生成素（hlh）：將hlh標(biāo)準(zhǔn)品用含蛋白的磷酸鹽緩沖液（pbs）復(fù)溶后，用0miu/ml的hcg樣品液將其配制成濃度為500miu/ml，即為hlha液；用25miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為500miu/ml，即為hlhb液；用200miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為500miu/ml，即為hlhc液；1000miu/ml人卵泡刺激素（hfsh）：將hfsh標(biāo)準(zhǔn)品用含蛋白的磷酸鹽緩沖液（pbs）復(fù)溶后，用0miu/ml的hcg樣品液將其配制成濃度為1000miu/ml，即為hfsha液；用25miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為1000miu/ml，即為hfshb液；用200miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為1000miu/ml，即為hfshc液；1000μiu/ml人促甲狀腺激素（htsh）：將htsh標(biāo)準(zhǔn)品用含蛋白的磷酸鹽緩沖液（pbs）復(fù)溶后，用0miu/ml的hcg樣品液將其配制成濃度為1000μiu/ml，即為htsha液；用25miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為1000μiu/ml，即為htshb液；用200miu/ml的人絨毛膜促性腺激素樣品液將其配制成濃度為1000μiu/ml，即為htshc液。

2、物理性狀：檢驗(yàn)外觀性狀：取出試紙條，用目力觀察，紙條應(yīng)整潔完整、無毛刺、無破損、無污染；材料附著牢固。如果是筆、卡或棒型的還要檢查其裝配是否正確。膜條寬度：取3人份紙條用量尺測量紙條上膜的寬度。液體移行速度：取3人份紙條按說明書進(jìn)行操作，卡型和筆型的吸樣端浸入生理鹽水中3～10秒鐘后水平放置，從試紙浸入樣品液開始用秒表（精度為0.01s）計(jì)時，直至液體達(dá)到下圖所示的e區(qū)與f區(qū)之間的交界線時停止計(jì)時，所用的時間記為（t），用游標(biāo)卡尺（精密度0.02mm）測量（a區(qū)+b區(qū)+e區(qū)）的長度，記為（l），計(jì)算l/t即為移行速度，重復(fù)測量3條測試條，取平均值，結(jié)果應(yīng)符合液體移行速度不低于10mm/min，層析狀態(tài)：規(guī)則，膠金不與水分層，5分鐘內(nèi)本底基本清晰。

3、檢驗(yàn)最低檢測限：用國家級人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品檢驗(yàn)，配成濃度分別12.5miu/ml、25miu/ml、50miu/ml的標(biāo)準(zhǔn)液，抽取待檢品3人份，進(jìn)行檢測，5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，t1檢測線最低檢測限為25miu/ml。用國家級規(guī)則人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品檢驗(yàn)，配成濃度分別為、100miu/ml、200miu/ml、400miu/ml的標(biāo)準(zhǔn)液，抽取待檢品3人份，進(jìn)行檢測，5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，t2檢測線最低檢測限為100miu/ml。

4、特異性：陰性特異性：將濃度為500miu/mlhlha液、1000miu/mlhfsha液、1000μiu/mlhtsha液分別進(jìn)行檢測，各重復(fù)3次，各溶液的3次結(jié)果t1檢測線和t2檢測線均為陰性才可判為此濃度的結(jié)果為陰性。陽性特異性：將濃度為500miu/mlhlhb液、1000miu/mlhfshb液、1000μiu/mlhtshb液分別進(jìn)行檢測，各重復(fù)3次，各溶液的3次結(jié)果t1檢測線結(jié)果應(yīng)均為陽性，t2檢測線無顯色，為陰性。將濃度為500miu/mlhlhc液、1000miu/mlhfshc液、1000μiu/mlhtshc液分別進(jìn)行檢測，各重復(fù)3次，各溶液的3次結(jié)果t1和t2檢測線結(jié)果應(yīng)均為陽性，且t2檢測線顯色明顯淺于t1檢測線。

5、重復(fù)性：隨機(jī)抽取同一批號的試紙10條，以濃度為25miu/ml人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品測定，10次結(jié)果應(yīng)符合t1檢測線全部為陽性顯色，且顯色強(qiáng)度一致，t2檢測線無顯色，為陰性。隨機(jī)抽取同一批號的試紙10條，以濃度為200miu/ml人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品測定，10次結(jié)果應(yīng)符合t1和t2檢測線結(jié)果應(yīng)均為陽性，且t2檢測線顯色明顯淺于t1檢測線。

6、檢驗(yàn)穩(wěn)定性：將試紙于37℃放置21天后，或者取產(chǎn)品有效期后一個月的產(chǎn)品進(jìn)行檢測，按照2項(xiàng)、3項(xiàng)、4項(xiàng)、5項(xiàng)的規(guī)定要求檢驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)符合要求。

7、檢驗(yàn)批間差：取3個批號的試紙，用25miu/ml的人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測，重復(fù)測定10次，t1檢測線全部為陽性顯色，且顯色強(qiáng)度一致。t2檢測線無顯色，為陰性。取3個批號的試紙，用200miu/ml的人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測，每個批號各重復(fù)測定10次，t1和t2檢測線結(jié)果應(yīng)均為陽性，且t2檢測線顯色明顯淺于t1檢測線。

用人絨毛促性腺激素周期檢測試紙來定性檢測孕齡婦女尿液中的人絨毛膜促性腺激素（hcg），提示孕周期。人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,hcg)是妊娠期期間由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌生產(chǎn)的一種糖蛋白激素，由兩個不同的亞基，α、β以非共價鍵連接組成。在激素的產(chǎn)生、分泌、代謝等過程中，hcg分子會發(fā)現(xiàn)斷裂、離解等多種變化，從而在血、尿中以多種分子形式存在。hcg是唯一不隨胎盤重量增加而分泌增多的胎盤激素，妊娠1周后血液hcg為5-50mmiu/ml，尿液hcg＞25miu/ml，第8-10周左右達(dá)到高峰，持續(xù)1-2周后迅速減低，以后逐漸下降并以1/5-1/10左右峰值水平維持至分娩。本發(fā)明應(yīng)用雙抗體夾心法及免疫層析法的原理定性檢測孕齡婦女尿液中的人絨毛膜促性腺激素，檢測步驟較為簡單，5分鐘內(nèi)就可以觀察到結(jié)果，一般使用者可以自己進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果較為精確。本發(fā)明通過第一檢測線和第二檢測線顏色深淺，從而可估算懷孕周數(shù)，推測受孕時間。