本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：腎臟疾病是臨床上一種常見的疾病，迄今為止，早診斷、早治療以及逆轉(zhuǎn)損傷的腎功能是唯一能阻止腎臟疾病惡化的途徑。臨床評(píng)價(jià)腎臟疾病進(jìn)展和嚴(yán)重程度一般以腎功能為參考，以腎小球?yàn)V過率(gfr)作為反映腎功能最重要的指標(biāo)。胱抑素c，是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ-微量蛋白或γ-后球蛋白，且是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，其分子量為13.3kd，由122個(gè)氨基酸殘基組成，可由機(jī)體所有有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素c僅經(jīng)腎小球?yàn)V過而被清除，為反映腎小球?yàn)V過率變化的內(nèi)源性標(biāo)志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代謝分解，不返回血液。因此，可以通過血液中胱抑素c的濃度來反映腎小球的過濾速率。而且，胱抑素c血清濃度不受敏癥過程、性別、年齡和肌肉重量影響，是反映腎小球?yàn)V過率變化的理想同源性標(biāo)志物，并逐步發(fā)展為評(píng)估腎功能的一項(xiàng)敏感性好、特異性高的指標(biāo)。目前，臨床上主要依托免疫學(xué)方法完成胱抑素c的檢測(cè)，借助抗原抗體的特異性結(jié)合，以雙抗夾心的方式定量檢測(cè)血清中胱抑素c的含量。具體的檢測(cè)方法又包括：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法。前面兩種方法由于操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)以及費(fèi)用高等不足，嚴(yán)重限制其應(yīng)用。隨著全自動(dòng)生化儀的普及和多種快速免疫比濁檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，免疫比濁法兼具反應(yīng)時(shí)間短，精密度好，檢測(cè)范圍寬，黃疸、溶血和脂血標(biāo)本影響小，易于自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)，已成為臨床胱抑素c的主流檢測(cè)方法。但是，由于免疫比濁法的檢測(cè)原理缺乏酶促放大反應(yīng)，導(dǎo)致現(xiàn)有的胱抑素c免疫比濁檢測(cè)試劑盒不可避免的出現(xiàn)靈敏度較低等不足。同時(shí)，在試劑盒制備過程中，為保證產(chǎn)品達(dá)到所需靈敏度，較酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法和化學(xué)發(fā)光法，免疫比濁法對(duì)所用抗體的質(zhì)量要求更高，包被量和抗體使用量更大，也造成試劑盒成本的增加。且目前廣泛使用在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)單克隆抗體，當(dāng)交聯(lián)有抗體的微球與抗原結(jié)合后，在短時(shí)間內(nèi)會(huì)迅速聚集在一起，改變了反應(yīng)液的散光性能或透光性能?，F(xiàn)有胱抑素c檢測(cè)試劑盒的制備也存在著操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)操作者專業(yè)技能限制的以及無法保證產(chǎn)品穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的缺憾。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的就在于針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒，該試劑盒與現(xiàn)有胱抑素c檢測(cè)試劑盒相比，能進(jìn)一步提高胱抑素c檢測(cè)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，且成本更低。本發(fā)明的另一目的是提供上述優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)單，易于推廣使用。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑r1和試劑r2，所述試劑r1主要由緩沖液1、無機(jī)鹽離子1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、增溶劑1和加速劑1組成；所述試劑r2主要由交聯(lián)胱抑素c抗體的聚苯乙烯微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、增溶劑2、防腐劑2和保護(hù)劑2組成，且保護(hù)劑2為β-環(huán)糊精；所述聚苯乙烯微球與胱抑素c抗體通過物理吸附連接或者聚苯乙烯微球表面氨基、羧基、酰肼或者環(huán)氧基與胱抑素c抗體表面氨基共價(jià)偶聯(lián)，并被β-環(huán)糊精(保護(hù)劑2)包合，聚苯乙烯微球粒徑為100nm。本技術(shù)方案中的防腐劑1和2是指可以抑制試劑中細(xì)菌和微生物污染的一類試劑，對(duì)試劑具有防腐殺菌的作用。試劑r2中的保護(hù)劑2是一類能夠保護(hù)膠乳顆粒表面的抗體的試劑。無機(jī)鹽離子1可以保持試劑r1內(nèi)的電荷平衡。本技術(shù)方案中的優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒，將胱抑素c抗體交聯(lián)在聚苯乙烯微球表面，并被β-環(huán)糊精包合，當(dāng)血液中的胱抑素c與胱抑素c抗體反應(yīng)時(shí)，帶動(dòng)聚苯乙烯微球聚集產(chǎn)生一定濁度，而濁度與血液中的胱抑素c含量在一定范圍成正比，可以用全自動(dòng)生化儀在400-800nm波長(zhǎng)下檢測(cè)血液中胱抑素c的含量。優(yōu)選地，上述優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒的組成如下：試劑r1，其組分為：試劑r2，其組分為：進(jìn)一步優(yōu)選地，上述優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒的具體組成如下：試劑r1，其組分為：試劑r2，其組分為：優(yōu)選地，所述試劑r1中的緩沖液1選自hepes緩沖液、tris-hcl緩沖液、mops緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼砂緩沖液中的任意一種或多種的組合，其ph為7.0～9.0；所述試劑r2中的緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、硼砂緩沖液、hepes緩沖液、tris-hcl緩沖液、mops緩沖液中任意一種或多種的組合，其ph為7.0～9.0。優(yōu)選地，所述試劑r1中的穩(wěn)定劑1選自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合；所述試劑r2中的穩(wěn)定劑2選自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合。優(yōu)選地，所述試劑r1中的無機(jī)鹽離子1選自氯化鉀、氯化鈉、氯化鈣中的任意一種或多種的組合，具有價(jià)格低廉、原料易得的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選地，所述試劑r1中的防腐劑1為疊氮鈉、硫柳汞或者proclin300；所述試劑r2中的防腐劑2為疊氮鈉、硫柳汞或proclin300。防腐劑1和2具有優(yōu)良的防腐殺菌性能。優(yōu)選地，所述試劑r1中的加速劑1為聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合。優(yōu)選地，所述試劑r1和試劑r2中的增溶劑1均為吐溫20。還包括胱抑素c試劑的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品為胱抑素c含量為0.1mg/l，0.5mg/l，1.0mg/l，2.0mg/l，4.0mg/l和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，溶液為牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l、磷酸鹽緩沖液10mmol/l的緩沖液。如上述優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括以下步驟：(1)、試劑r1的制備：配制緩沖液1：磷酸鹽緩沖液5～15mmol/l；在緩沖液1中加入牛血清白蛋白5～15g/l、吐溫200.1～0.3mmol/l、聚乙二醇2.0～5.0mmol/l、氯化鈉0.08～0.16mol/l、疊氮鈉5～15mmol/l，攪拌混合均勻，即得試劑r1；(2)、試劑r2的制備：步驟一：將胱抑素c抗體進(jìn)行4℃透析，再用磷酸鹽緩沖液將胱抑素c抗體稀釋至0.05～5mg/ml，得到胱抑素c抗體稀釋液；將聚苯乙烯微球用純化水離心、洗滌3次；步驟二：用磷酸鹽緩沖液將經(jīng)過步驟一洗滌后的聚苯乙烯微球稀釋到質(zhì)量濃度為0.1％～3％，再加入質(zhì)量濃度為0.1～0.5％β-環(huán)糊精，在室溫下攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后15000rpm離心洗滌以除去未反應(yīng)的β-環(huán)糊精，然后加入步驟一得到的胱抑素c抗體稀釋液，室溫下攪拌反應(yīng)30min，再加入終止液終止反應(yīng)，將得到的反應(yīng)液15000rpm離心，用磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀，重復(fù)離心洗滌3次，最后加入磷酸鹽緩沖液5～15mmol/l、牛血清白蛋白5～15g/l、吐溫200.1～0.5mmol/l、疊氮鈉5～15mmol/l攪拌混合均勻即得試劑r2；(3)、校準(zhǔn)品的制備：按照需要的胱抑素c含量為0.1mg/l，0.5mg/l，1.0mg/l，2.0mg/l，4.0mg/l和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，將相應(yīng)的胱抑素c標(biāo)準(zhǔn)品分別加入含牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l、磷酸鹽緩沖液10mmol/l緩沖液中。優(yōu)選地，上述優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒的制備方法，具體包括以下步驟：(1)、試劑r1的制備：配制緩沖液1：磷酸鹽緩沖液10mmol/l；在緩沖液1中加入牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.2mmol/l、聚乙二醇3.5mmol/l、氯化鈉0.12mol/l、疊氮鈉10mmol/l，攪拌混合均勻，即得試劑r1；(2)、試劑r2的制備：步驟一：將胱抑素c抗體進(jìn)行4℃透析，再用磷酸鹽緩沖液將胱抑素c抗體稀釋至2mg/ml，得到胱抑素c抗體稀釋液；將聚苯乙烯微球用純化水離心、洗滌3次；步驟二：用磷酸鹽緩沖液將經(jīng)過步驟一洗滌后的聚苯乙烯微球稀釋到質(zhì)量濃度為1.0％，再加入質(zhì)量濃度為0.3％β-環(huán)糊精，在室溫下攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后15000rpm離心洗滌以除去未反應(yīng)的β-環(huán)糊精，然后加入步驟一得到的胱抑素c抗體稀釋液，室溫下攪拌反應(yīng)30min，再加入終止液終止反應(yīng)，將得到的反應(yīng)液15000rpm離心，用磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀，重復(fù)離心洗滌3次，最后加入磷酸鹽緩沖液10mmol/l、牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l攪拌混合均勻即得試劑r2；(3)、校準(zhǔn)品的制備：按照需要的胱抑素c含量為0.1mg/l，0.5mg/l，1.0mg/l，2.0mg/l，4.0mg/l和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，將相應(yīng)的胱抑素c標(biāo)準(zhǔn)品分別加入含牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l、磷酸鹽緩沖液10mmol/l緩沖液中。與現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：1、聚苯乙烯微球通過物理吸附與胱抑素c抗體連接或者通過其表面的氨基、羧基、酰肼或者環(huán)氧基等官能團(tuán)和抗體表面的氨基等結(jié)合形成共價(jià)偶聯(lián)結(jié)構(gòu)，使胱抑素c抗體牢固的結(jié)合在微球表面。再進(jìn)一步通過β-環(huán)糊精的包合，保證了試劑r2的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)了試劑r2有效期。2、采用粒徑為100nm的大顆粒聚苯乙烯微球顆粒，并以β-環(huán)糊精包合，使其具有較大的粒徑，試劑盒在具有較高靈敏度的同時(shí)，相比現(xiàn)有試劑盒不僅提高了試劑的穩(wěn)定性，而且增加了血液中胱抑素c和胱抑素c抗體反應(yīng)時(shí)的濁度，從而提高了測(cè)試反應(yīng)的準(zhǔn)確性及抗干擾能力，并縮短了反應(yīng)時(shí)間，確保測(cè)試結(jié)果穩(wěn)定、可靠。3、使用β-環(huán)糊精作為保護(hù)劑2，不僅使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，還使得與現(xiàn)有試劑盒相比有效期得到延長(zhǎng)。試劑盒貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為24個(gè)月；開蓋貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為90天。同比現(xiàn)有試劑盒以及未使用β-環(huán)糊精作為保護(hù)劑的試劑盒有效期明顯增長(zhǎng)，更便于存放與使用。4、試劑盒成本低，制備方法操作簡(jiǎn)單，易于推廣使用。具體實(shí)施方式一種優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑r1和試劑r2，所述試劑r1主要由緩沖液1、無機(jī)鹽離子1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、增溶劑1和加速劑1組成；所述試劑r2主要由交聯(lián)胱抑素c抗體的聚苯乙烯微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、增溶劑2、防腐劑2和保護(hù)劑2組成，且保護(hù)劑2為β-環(huán)糊精；所述聚苯乙烯微球與胱抑素c抗體通過物理吸附連接或者聚苯乙烯微球表面氨基、羧基、酰肼或者環(huán)氧基與胱抑素c抗體表面氨基共價(jià)偶聯(lián)，并被β-環(huán)糊精(保護(hù)劑2)包合，聚苯乙烯微球粒徑為100nm。優(yōu)選地，所述試劑r1中的緩沖液1選自hepes緩沖液、tris-hcl緩沖液、mops緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼砂緩沖液中的任意一種或多種的組合，其ph為7.0～9.0；所述試劑r2中的緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、硼砂緩沖液、hepes緩沖液、tris-hcl緩沖液、mops緩沖液中任意一種或多種的組合，其ph為7.0～9.0。優(yōu)選地，所述試劑r1中的穩(wěn)定劑1選自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合；所述試劑r2中的穩(wěn)定劑2選自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合。優(yōu)選地，所述試劑r1中的無機(jī)鹽離子1選自氯化鉀、氯化鈉、氯化鈣中的任意一種或多種的組合，具有價(jià)格低廉、原料易得的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選地，所述試劑r1中的防腐劑1為疊氮鈉、硫柳汞或者proclin300；所述試劑r2中的防腐劑2為疊氮鈉、硫柳汞或proclin300。防腐劑1和2具有優(yōu)良的防腐殺菌性能。優(yōu)選地，所述試劑r1中的加速劑1為聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合。優(yōu)選地，所述試劑r1和試劑r2中的增溶劑1均為吐溫20。還包括胱抑素c試劑的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品為胱抑素c含量為0.1mg/l，0.5mg/l，1.0mg/l，2.0mg/l，4.0mg/l和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，溶液為牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l、磷酸鹽緩沖液10mmol/l的緩沖液。實(shí)施例1本發(fā)明的試劑盒舉例是雙試劑，其中：試劑r1試劑r2：實(shí)施例2作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種優(yōu)選胱抑素c測(cè)定試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑r1和試劑r2組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為：包被有胱抑素c抗體聚苯乙烯微球與β-環(huán)糊精顆粒，粒徑100nm，濃度1％。校準(zhǔn)品：按照需要的胱抑素c參考校準(zhǔn)品濃度將相應(yīng)的胱抑素c標(biāo)準(zhǔn)品分別加入上述緩沖液，制備得到不同濃度的一組校準(zhǔn)品。實(shí)施例3試劑盒使用方法：1、試劑準(zhǔn)備，試劑為液體雙試劑，開瓶即用，其中：(1)、試劑r1的制備：配置緩沖液1：磷酸鹽緩沖液10mmol/l；在緩沖液1中加入牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.2mmol/l、聚乙二醇3.5mmol/l、氯化鈉0.12mol/l、疊氮鈉10mmol/l，攪拌混合均勻，即得試劑r1；(2)、試劑r2的制備：步驟一：將胱抑素c抗體進(jìn)行4℃透析，再用磷酸鹽緩沖液將胱抑素c抗體稀釋至2mg/ml，得到胱抑素c抗體稀釋液；將聚苯乙烯微球用純化水離心、洗滌3次；步驟二：用磷酸鹽緩沖液將經(jīng)過步驟一洗滌后的聚苯乙烯微球稀釋到質(zhì)量濃度為1.0％，再加入質(zhì)量濃度為0.3％β-環(huán)糊精，在室溫下攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后15000rpm離心洗滌以除去未反應(yīng)的β-環(huán)糊精，然后加入步驟一得到的胱抑素c抗體稀釋液，室溫下攪拌反應(yīng)30min，再加入終止液終止反應(yīng)，將得到的反應(yīng)液15000rpm離心，用磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀，重復(fù)離心洗滌3次，最后加入磷酸鹽緩沖液10mmol/l、牛血清白蛋白10g/l、吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l攪拌混合均勻即得試劑r2；(3)、校準(zhǔn)品的制備：按照需要的胱抑素c含量為0.1，0.5，1.0，2.0，4.0和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，加入含吐溫200.3mmol/l、疊氮鈉10mmol/l、磷酸鹽緩沖液10mmol/l緩沖液中。2、全自動(dòng)生化儀參數(shù)設(shè)置(a)、檢測(cè)波長(zhǎng)：主波長(zhǎng)為546nm，副波長(zhǎng)為700nm；(b)、檢測(cè)溫度：37℃；(c)、反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑r2后立即測(cè)定讀取吸光度a1，5分鐘后讀取吸光度a2，計(jì)算吸光度變化。δa＝a2-a1；(d)反應(yīng)方向：負(fù)方向。3、檢測(cè)步驟(a)、取200ul試劑r1與5ul血清樣本(避免溶血)混勻；(b)、將混勻后的溶液在37℃孵育時(shí)間5min；(c)、再加入50ul試劑r2，立即測(cè)定讀取吸光度a1，5分鐘后讀取吸光度a2，計(jì)算吸光度變化δa＝a2-a1。4、通過校準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中胱抑素c胱抑素c的含量。下述測(cè)試為對(duì)實(shí)施例2試劑盒的性能測(cè)試將實(shí)施例2制備的胱抑素c檢測(cè)試劑盒進(jìn)行性能測(cè)試，主要測(cè)試其分析靈敏度、最低檢出限、精密度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性及抗干擾性等。1)靈敏度：靈敏度檢測(cè)結(jié)果如下：2)最低檢測(cè)限：采用10g/l牛血清白蛋白生理鹽水溶液作為空白樣本，空白樣本應(yīng)不含被測(cè)物。在生化分析儀上連續(xù)重復(fù)檢測(cè)20次，記錄檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果顯示其最低檢測(cè)限為0.007ug/l。3)用本發(fā)明中的胱抑素c試劑盒檢測(cè)低、中、高值3個(gè)胱抑素c含量的人血清樣品各20次，測(cè)定本發(fā)明檢測(cè)試劑盒的批內(nèi)精密度。使用3個(gè)批號(hào)試劑盒分別測(cè)定1個(gè)人血清樣品20次，計(jì)算本發(fā)明檢測(cè)試劑盒的批間相對(duì)極差。結(jié)果表明，本發(fā)明檢測(cè)試劑盒的批內(nèi)精密度和批間精密度均較好。制備的試劑盒的批內(nèi)精密度結(jié)果樣品1樣品2樣品3測(cè)定次數(shù)202020平均值(mg/l)0.513.825.04最小值(mg/l)0.503.784.97最大值(mg/l)0.533.845.11標(biāo)準(zhǔn)差(sd)0.0050.040.06變異系數(shù)(cv％)0.981.051.19制備的試劑盒的批間精密度結(jié)果試劑盒的批內(nèi)精密度(cv％在0.99～1.2之間)和批間精密度(相對(duì)極差％在0.9～1.3之間)均表現(xiàn)良好，數(shù)據(jù)在此不一一列出。4)準(zhǔn)確性：選擇合適濃度的常規(guī)檢測(cè)樣本，向常規(guī)樣本中加入不同量的定值標(biāo)準(zhǔn)品制作成回收樣本，定值樣本用純化水作為溶劑；在常規(guī)樣本中加入同樣量的純化水制作成基礎(chǔ)樣本，加入定值標(biāo)準(zhǔn)品的量不超過總體積的1/10，每個(gè)重復(fù)3次檢測(cè)取其均值為回收濃度。結(jié)果顯示平均回收率為99.86％，準(zhǔn)確度較高。5)穩(wěn)定性：取胱抑素c檢測(cè)試劑盒進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，2-8℃放置分別按時(shí)間0、3、6、9，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24個(gè)月進(jìn)行檢測(cè)；開蓋穩(wěn)定性試驗(yàn)分別按2-8℃放置0天、7天、14天、16天、18天、20天、22天、24天、26天、28天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、62天、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90天進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示胱抑素c檢測(cè)試劑盒貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為24個(gè)月。開蓋貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為90天。6)抗干擾性：將不同濃度的干擾物加入到血清標(biāo)本中，對(duì)照組加入純化水,以加入干擾物質(zhì)的血清三次檢測(cè)平均值，作為實(shí)測(cè)值，以加入純化水的血清的對(duì)照組三次檢測(cè)平均值為基準(zhǔn)值。實(shí)測(cè)值減去基準(zhǔn)值然后除以基準(zhǔn)值得偏差。結(jié)果顯示樣本中膽紅素≤300μmol/l、血紅蛋白≤1mg/ml、乳糜≤0.30％時(shí)對(duì)胱抑素c檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果的干擾小于9.7％。實(shí)施例4對(duì)比試劑盒的制備及使用：試劑r1中的緩沖液1采用磷酸鹽緩沖液10mmol/l，其他試劑及實(shí)驗(yàn)方法均同實(shí)施例2。包被有胱抑素c抗體聚苯乙烯微球顆粒，粒徑100nm，濃度1％。校準(zhǔn)品：按照0.1mg/l，0.5mg/l，1.0mg/l，2.0mg/l，4.0mg/l和8.0mg/l的六個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品，將相應(yīng)的胱抑素c標(biāo)準(zhǔn)品分別加入上述緩沖液，制備得到不同濃度的一組校準(zhǔn)品。將實(shí)施例4制備的胱抑素c檢測(cè)試劑盒進(jìn)行性能測(cè)試，方法同實(shí)施例3。1)最低檢測(cè)限：采用10g/l牛血清白蛋白生理鹽水溶液作為空白樣本，空白樣本應(yīng)不含被測(cè)物。在生化分析儀上連續(xù)重復(fù)檢測(cè)20次，記錄檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果顯示其最低檢測(cè)限為1.0g/l。2)準(zhǔn)確性：選擇合適濃度的常規(guī)檢測(cè)樣本，向常規(guī)樣本中加入不同量的定值標(biāo)準(zhǔn)品制作成回收樣本，定值樣本用純化水作為溶劑；在常規(guī)樣本中加入同樣量的純化水制作成基礎(chǔ)樣本，加入的定值標(biāo)準(zhǔn)品的量不超過總體積的1/10，每個(gè)重復(fù)3次檢測(cè)取其均值為回收濃度。結(jié)果顯示平均回收率為99.41％，準(zhǔn)確度較高。3)穩(wěn)定性：取本實(shí)施例的檢測(cè)試劑盒進(jìn)行常規(guī)貯存穩(wěn)定性試驗(yàn)，2-8℃放置分別按時(shí)間0、3、6、9、12、13、14和15個(gè)月進(jìn)行檢測(cè)；開蓋穩(wěn)定性試驗(yàn)分別按2-8℃放置0天、7天、14天、16天、18天、20天、22天、24天、26天、28天、30天和32天進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示本實(shí)施例的檢測(cè)試劑盒貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為13個(gè)月。開蓋貯存于2-8℃、避光環(huán)境中，有效期為25天。4)抗干擾性：將不同濃度的干擾物加入到血清標(biāo)本中，對(duì)照組加入純化水,以加入干擾物質(zhì)的血清三次檢測(cè)平均值，作為實(shí)測(cè)值，以加入純化水的血清的對(duì)照組三次檢測(cè)平均值為基準(zhǔn)值。實(shí)測(cè)值減去基準(zhǔn)值然后除以基準(zhǔn)值得偏差。結(jié)果顯示樣本中膽紅素≤300μmol/l、血紅蛋白≤1mg/ml、乳糜≤0.30％時(shí)對(duì)胱抑素c檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果的干擾小于15％。綜上所述，本發(fā)明所提供的優(yōu)選胱抑素c檢測(cè)試劑盒具有良好的抗干擾性和特異性，且具有很好的靈敏性、準(zhǔn)確性，有效期延長(zhǎng)，有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點(diǎn)而具高度產(chǎn)業(yè)利用價(jià)值。當(dāng)前第1頁(yè)12