本發(fā)明涉及一種火麻油中四氫大麻酚檢測的前處理方法，屬于分析測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
火麻又名大麻、漢麻，是一種一年生草本植物，廣泛分布于我國廣西、云南、甘肅、黑龍江等地，極具食用和藥用價值。火麻籽含20～25％蛋白、20～30％碳水化合物、25～35％脂質(zhì)、10～15％纖維以及豐富的礦物質(zhì)。火麻油中多不飽和脂肪酸含量高達(dá)近80％，其中亞油酸與亞麻酸的比例平衡，達(dá)到3:1左右，符合國際衛(wèi)生組織推薦的小于等于4:1最佳比值的特點，有益于人體健康。火麻油具有延緩動脈硬化、預(yù)防心腦血管疾病的功效，是值得推薦的長壽油料。豐富的γ-亞麻酸還賦予了火麻油很高的工業(yè)價值，如制備護(hù)膚品等等。
火麻油雖然具有極高的營養(yǎng)價值，但也含有一些不利于人體健康的物質(zhì)，其中δ9-四氫大麻酚為一種毒性成分，作用于心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致人產(chǎn)生松弛欣快的幻覺或沉睡昏迷，長期攝入可導(dǎo)致精神墮落，甚至喪失工作能力。在現(xiàn)有的檢測技術(shù)中，參考社會公共安全標(biāo)準(zhǔn)GA/T 206-99中的檢測方法，火麻油樣品通過正己烷溶解后直接進(jìn)樣色譜儀器中，沒有萃取及除雜的過程，形成嚴(yán)重的基質(zhì)干擾且污染色譜柱、檢測器等部位。而現(xiàn)有的一些其它的檢測方法通常采用固相萃取小柱作為凈化基質(zhì)的方法，前處理操作時間長(通常除雜過程所需的時間長達(dá)1～2h)，并且存在成本高、洗脫所用溶劑量大(產(chǎn)生50～150mL的廢棄溶液)等缺點。因此，優(yōu)化對火麻油中四氫大麻酚檢測的前處理過程對于獲得更加精準(zhǔn)的檢測結(jié)果是非常有必要的。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種火麻油中四氫大麻酚檢測的前處理方法，所述方法包括萃取、吸附除雜、氮吹、復(fù)溶和過濾；所述吸附是以氧化鋁為除雜劑，按照20～30mg氧化鋁/g火麻油的量向火麻油中加入氧化鋁，震蕩50～70s。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述萃取是以乙腈為萃取溶劑，按1g：8～12mL的比例向火麻油中加入乙腈，在20～25℃進(jìn)行萃取，再于-10～30℃冷凍60～240min。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述萃取條件為：準(zhǔn)確稱取1.00g火麻油，加入8～12mL乙腈溶液，渦旋振蕩50～70s。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述吸附是將萃取后的液體按2.5～3.5mL：20～30mg的比例加入氧化鋁，震蕩50～70s后離心2～4min。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述氮吹是用N2將液體吹干。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述復(fù)溶是加入三芐胺-正己烷混合物將氮吹后的物質(zhì)進(jìn)行復(fù)溶。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述三芐胺-正己烷混合物濃度為30μg三芐胺/mL正己烷。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述過濾是用0.22μm有機濾膜進(jìn)行過濾。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述前處理包括以下步驟：
(1)稱取1.0g火麻油于50mL離心管中，加入8～12mL乙腈溶液進(jìn)行萃取，渦旋振蕩混勻，靜置；
(2)將步驟(1)中裝有火麻油及乙腈溶液的離心管水平于-30～-10℃靜置110～130min；
(3)將步驟(2)中靜置分層后的上層溶液移至裝有20～30mg中性氧化鋁的離心管中，20～25℃下震蕩50～70s，離心；
(4)將步驟(3)中離心后的上清液轉(zhuǎn)移至離心管中，在N2下吹干至無乙腈溶液殘留，加入0.5mL內(nèi)標(biāo)溶液(30μg三芐胺/mL正己烷)溶解；
(5)將步驟(4)中得到的樣品液經(jīng)0.22μm有機濾膜轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種火麻油中四氫大麻酚的檢測方法，所述方法包括如下步驟：(1)應(yīng)用所述前處理方法對火麻油進(jìn)行前處理；(2)按每2.5～3.5mL萃取液吹干后加入0.5mL的比例加入內(nèi)標(biāo)溶液；(3)，氣相色譜檢測。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述檢測條件如下：采用HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)色譜柱：升溫程序：80℃保持1min，以30℃/min速率升至230℃，再以5℃/min的速率升至280℃，保持10min；進(jìn)樣口溫度：250℃，檢測器溫度：300℃；載氣為氮氣，流速1.2mL/min；進(jìn)樣量：1μL；分流比：10：1。
本發(fā)明還提供所述前處理方法在含四氫大麻酚及其衍生物的產(chǎn)品檢測方面的應(yīng)用。
有益效果：本發(fā)明在火麻油中四氫大麻酚檢測的前處理方法簡化了前處理步驟，并可有效去除火麻油中甘油三酯及色素等干擾成分，提取液中基質(zhì)共提取物的含量降至1.90mg/mL，基質(zhì)共提取物去除率達(dá)81.5％，四氫大麻酚的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8％～4.7％，同時具有操作簡單、節(jié)約溶劑、節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點，產(chǎn)生的廢棄溶液不到10mL、前處理用時短，前處理后的樣品滿足檢測的要求。
具體實施方式
2014氣相色譜儀，日本島津公司；中性氧化鋁，100～200目，武漢偉琪博星生物科技有限公司。
試劑：三芐胺，百靈威科技有限公司；乙腈，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：四氫大麻酚的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，均為1mg/mL，美國Sigma公司。
實施例1
(1)前處理：準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將離心管在-20℃冰箱中水平放置120min后，將3mL上層溶液移至含有30mg中性氧化鋁的15mL離心管中，震蕩60s，在4000rpm的條件下離心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為1.90mg/mL，重復(fù)性RSD為1.25％。
(2)樣品的檢測：將不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入氣相色譜中，以內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，即以四氫大麻酚與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的色譜峰面積之比對四氫大麻酚濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同的條件下將樣品提取液注入氣相色譜進(jìn)行測定，測得樣品液中四氫大麻酚與內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積之比，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中四氫大麻酚含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣品中四氫大麻酚的含量。
其中色譜條件為：色譜柱：HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)；升溫程序：80℃保持1min，以30℃/min速率升至230℃，再以5℃/min的速率升至280℃，保持10min；進(jìn)樣口溫度：250℃，檢測器溫度：300℃；載氣為氮氣，流速1.2mL/min；進(jìn)樣量：1μL；分流比：10：1。
以四氫大麻酚與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的色譜峰面積之比對四氫大麻酚濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝(0.0225±7.51e-5.0)x+(0.0089±0.0094)，相關(guān)系數(shù)為0.9975。
選取火麻油樣品，分別添加30、60、90μg/g濃度水平的四氫大麻酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，并按照上述處理步驟進(jìn)行殘留量測定，將測定濃度與四氫大麻酚理論添加濃度進(jìn)行比較，得到四氫大麻酚添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。四氫大麻酚回收率92.3％～94.9％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8％～4.7％。
以3倍信噪比(S/N)對應(yīng)的樣品中目標(biāo)物濃度作為檢出限，以10倍信噪比(S/N)對應(yīng)的樣品中目標(biāo)物濃度作為定量限，四氫大麻酚的檢出限為0.72μg/mL。
實施例2
準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將離心管在-30℃冰箱中水平放置120min后，將3mL上層溶液移至含有20mg中性氧化鋁的15mL離心管中，震蕩60s，在4000rpm的條件下離心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為2.03mg/mL，重復(fù)性RSD為1.92％。
實施例3
準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將離心管在-20℃冰箱中水平放置120min后，將3mL上層溶液移至含有25mg中性氧化鋁的15mL離心管中，震蕩50s，在4000rpm的條件下離心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為1.99mg/mL，重復(fù)性RSD為1.48％。
實施例4
準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將離心管在-10℃冰箱中水平放置120min后，將3mL上層溶液移至含有30mg中性氧化鋁的15mL離心管中，震蕩60s，在4000rpm的條件下離心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為2.06mg/mL，重復(fù)性RSD為2.15％。
對照例1
準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為10.49mg/mL，重復(fù)性RSD為5.61％。
對照例2
準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將離心管在-20℃冰箱中水平放置120min后，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為5.17mg/mL，重復(fù)性RSD為4.82％。
對照例3
前處理：準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.01g)火麻油于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋振蕩混勻60s，靜置。將3mL上層溶液移至含有25mg中性氧化鋁的15mL離心管中，震蕩60s，在4000rpm的條件下離心3.0min，取2mL上清液于N2下吹干，用0.5mL內(nèi)標(biāo)(30μg三芐胺/mL正己烷)溶液溶解。所得溶液即為分析溶液，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯的濾膜過濾后，樣品液待測定，測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為5.98mg/mL，重復(fù)性RSD為4.29％。
對照例4
按照與實施例1相同的方法進(jìn)行樣品前處理，區(qū)別在于，以弗羅里硅土作為吸附劑代替氧化鋁。測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為3.00mg/mL，重復(fù)性RSD為2.58％。
對照例5
按照與實施例1相同的方法進(jìn)行樣品前處理，區(qū)別在于，以多壁碳納米管作為吸附劑代替氧化鋁。測得樣品液中基質(zhì)共提取物質(zhì)量為4.35mg/mL，重復(fù)性RSD為4.16％。
雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。