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液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法與流程

文檔序號(hào):12611477閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)利用液體發(fā)酵方式獲得靈芝菌絲體,并制備靈芝菌絲體干粉;

(2)將靈芝菌絲體干粉樣品分為校正集和驗(yàn)證集;

(3)對(duì)于校正集的靈芝菌絲體干粉,利用高氯酸-香草醛分光光度法進(jìn)行定量測(cè)定;

(4)對(duì)靈芝菌絲體干粉進(jìn)行近紅外光譜檢測(cè),波數(shù)范圍為12500-4000cm-1,并收集光譜數(shù)據(jù);

(5)對(duì)收集的近紅外光譜進(jìn)行預(yù)處理;

(6)利用校正集的高氯酸-香草醛法測(cè)量結(jié)果和近紅外光譜構(gòu)建定量模型,對(duì)光譜譜段進(jìn)行化學(xué)計(jì)量學(xué)分析,選出與三萜含量相關(guān)性高的近紅外光譜峰區(qū),獲得相應(yīng)定量分析模型;

(7)將驗(yàn)證集的測(cè)量光譜導(dǎo)入上述三萜含量定量模型,對(duì)其三萜含量進(jìn)行預(yù)測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(1)中靈芝菌絲體及其干粉的具體制備方法為:將靈芝種子培養(yǎng)基中的菌絲體接種于滅菌后的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中,于26-30℃,140-160rpm轉(zhuǎn)速搖床震蕩培養(yǎng);5-10d菌絲體長(zhǎng)滿培養(yǎng)基,將菌絲體連同菌液取出,離心后用ddH2O清洗菌絲體;置于烘箱中45-60℃干燥,干燥后粉碎成干粉末狀,篩后以備后續(xù)檢測(cè)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)基的配方為:200g/L馬鈴薯+20g/L葡萄糖+(10-15)g/L瓊脂+1000mL ddH2O,pH 7.0;所述馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基的配方為:200g/L馬鈴薯+20g/L葡萄糖+1000mL ddH2O,pH 7.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(2)中靈芝菌絲體干粉樣品的校正集和驗(yàn)證集的數(shù)量相同,校正集和驗(yàn)證集的分類形式為隨機(jī)采樣分類。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(3)中高氯酸-香草醛分光光度法測(cè)定校正集的靈芝菌絲體干粉的具體方法為:

(1)量取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL對(duì)照品溶液,即0.2mg齊墩果酸/mL甲醇溶液,分別置于15mL具塞試管中,揮干,放冷,加入0.2mL香草醛冰醋酸溶液、0.8mL高氯酸,搖勻,再于68-72℃水浴中加熱14-16min,立即置冰浴中冷卻4-6min,取出,加入4mL乙酸乙酯,搖勻;以相應(yīng)試劑為空白,采用紫外-可見(jiàn)分光光度法,在546nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;

(2)取0.2mL供試品溶液,即靈芝三萜乙醇提取液,置15mL具塞試管中,接著,采用上述對(duì)照品溶液的處理與吸光度測(cè)量方法,測(cè)定供試品溶液的相應(yīng)吸光度,再通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量,結(jié)果為每100mg樣本干品中含有的齊墩果酸質(zhì)量(mg),以%表示。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述香草醛冰醋酸溶液的制備方法為:稱取香草醛0.5g,再加入冰醋酸使之溶解成10mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(4)中近紅外光譜檢測(cè)具體為近紅外漫反射光譜檢測(cè),波數(shù)范圍為12500-400cm-1,分辨率16cm-1,掃描次數(shù)32次,利用積分球聚集光信號(hào),InGaAs檢測(cè)器檢測(cè),每份樣品采集2次光譜,取其平均光譜作為樣品原始光譜。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(5)中預(yù)處理方式為:將測(cè)量光譜在12500-9000cm-1范圍內(nèi)截除,保留9000-4000cm-1光譜范圍,再進(jìn)行矢量歸一化和一階導(dǎo)數(shù)處理。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(6)中化學(xué)計(jì)量學(xué)分析的方法為:采用OPUS光譜分析軟件及PLS程序?qū)庾V譜段進(jìn)行化學(xué)計(jì)量學(xué)處理。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體發(fā)酵靈芝菌絲體三萜含量的近紅外光譜定量測(cè)定方法,其特征在于,所述步驟(6)中與三萜含量相關(guān)性高的近紅外光譜峰區(qū)為:9000-7984.3cm-1、5909.1-5577.4cm-1和4898.6-4000cm-1三個(gè)近紅外光譜峰區(qū)。

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