本發(fā)明涉及免疫檢測領(lǐng)域，特別涉及一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒及其應(yīng)用方法。

背景技術(shù)：

血清甘膽酸(CG)是膽酸與甘氨酸結(jié)合二次的結(jié)合型膽酸之一，在肝細(xì)胞內(nèi)，膽固醇經(jīng)過期極其復(fù)雜的酶促反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成初級膽汁酸。

甘膽酸(CG)正常代謝途徑為腸-肝循環(huán)，CG正常代謝途徑為腸-肝循環(huán)，由肝細(xì)胞合成，經(jīng)毛細(xì)膽管、膽管排入膽囊，隨同膽汁進(jìn)入十二指腸，幫助食物消化。95％膽酸在回腸末端重吸收，經(jīng)門靜脈再回肝臟，由肝細(xì)胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結(jié)合形式存在，溢入體循環(huán)的總量小于1％。在正常情況下，外周血中膽酸含量甚微，血清CG濃度穩(wěn)定在較低水平。

并且，甘膽酸是肝臟分泌到膽汁中最大量的有機(jī)酸，肝細(xì)胞能高效能地從門靜脈攝取大量的甘膽酸。重吸收的甘膽酸又進(jìn)入肝腸循環(huán)，通過這種機(jī)制，機(jī)體能充分利用甘膽酸。為此，一旦肝細(xì)胞病變，血中的甘膽酸濃度會升高，其中急性肝炎、慢性肝炎輕度升高，肝硬變，肝癌病人顯著升高。

當(dāng)肝細(xì)胞受損時，肝細(xì)胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽酸發(fā)生障礙，而返流血液循環(huán)的CG含量增高，也使血CG含量增高。因此，測定血清甘膽酸(CG)是評價肝細(xì)胞功能及其肝膽系物質(zhì)循環(huán)功能的敏感指標(biāo)之一。

目前已知的甘膽酸測定方法有放射免疫法(RIA)、化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法、免疫均相分析法、直接免疫比濁法等。

雖然，放射免疫分析法的精準(zhǔn)度高，但是，其步驟繁瑣，試劑價格和儀器昂貴，且存在放射性污染。酶聯(lián)免疫吸附法存在檢測時間長、操作復(fù)雜、重復(fù)性差、不適于急診和臨床病人及時診斷的需要。免疫均相分析法試劑操作簡單、快速，但穩(wěn)定性差，靈敏度不高。膠乳增強(qiáng)免疫比濁法具有操作簡單、快速，可適用于自動化分析儀等優(yōu)點。

其中，現(xiàn)有的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法也就是直接免疫比濁法工藝簡單、快速，但對低濃度樣品和小分子抗原靈敏度比較低。因此，提高乳膠增強(qiáng)免疫比濁法的靈敏度及試劑穩(wěn)定性，使其應(yīng)用于大型生化分析儀，適合于臨床樣本批量檢測，是十分重要的，也將為臨床肝病的診斷及判斷提供強(qiáng)有力的支持。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒及其應(yīng)用方法，其能夠提高普通檢測儀器的靈敏度，從而既節(jié)省了成本，也提高了檢測效率。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒，包括甘膽酸試劑R1、甘膽酸試劑R2和甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品，其中，

甘膽酸試劑R1包括MEC緩沖液50～175mmol/L，牛血清蛋白0.1～2g/L，NaCl電解液100～200mmol/L，Pro-Clin3000.05～0.8g/L，乙二胺四乙酸二鈉3mmol/L，疊氮鈉0.6g/L，人工合成的甘膽酸0.05～1.5mg/L；

甘膽酸試劑R2的配制步驟：

S1、取5ml的包被緩沖液，加入80ul的80～300nm羧基膠乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗體，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液，再加入400ul的封閉緩沖液，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為甘膽酸試劑R2。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品包括MEC緩沖液100mmol/L、牛血清蛋白1.5g/L、乙二胺四乙酸二鈉3mmol/L、NaCl電解質(zhì)166mmol/L和Pro-Clin3000.5g/L并向上述配置的緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

優(yōu)選的，所述甘膽酸試劑R1包括MEC緩沖液100mmol/L，牛血清蛋白1.2g/L，NaCl電解液150mmol/L，Pro-Clin300 0.3g/L，乙二胺四乙酸二鈉3mmol/L，疊氮鈉0.6g/L，人工合成的甘膽酸1mg/L；

甘膽酸試劑R2的配制步驟：

S1、取5ml的包被緩沖液，加入80ul的200nm羧基膠乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗體，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液，再加入400ul的封閉緩沖液，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為甘膽酸試劑R2。

通過采用上述技術(shù)方案，甘膽酸試劑R1中的乙二胺四乙酸二鈉和疊氮鈉均是一種防腐劑，從而有利于延長牛血清蛋白的保存時間，同時，乙二胺四乙酸二鈉也是一種配合劑，其能夠與重金屬發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，從而屏蔽了重金屬對試驗結(jié)果的干擾，有利于提高檢測的準(zhǔn)確性。而甘膽酸試劑R2在配制的過程中利用超聲的方式來進(jìn)行處理，這樣能夠更好的實現(xiàn)液體的分層，從而更容易實現(xiàn)上清和沉淀的分離。

優(yōu)選的，所述包被緩沖液為20mmol/L的MES，且PH為6.0。

優(yōu)選的，所述偶聯(lián)緩沖液為20mmol/L的HEPES，且PH為7.5。

優(yōu)選的，所述封閉緩沖液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的BSA。

優(yōu)選的，所述存儲緩沖液為50mmol/L的Tris，其PH為9.0，并且含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％甘油。

通過采用上述技術(shù)方案，在存儲緩沖液中加入少量的甘油，其能夠?qū)Ω誓懰嵩噭㏑2起到保溫、保濕、潤滑和緩沖的作用，從而也就延長了甘膽酸試劑R2的保存時間。

一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒的應(yīng)用方法，其包括以下步驟：

A1、量取100ulR2試劑；

A2、量取400ulR1試劑；

A3、向R2試劑中放入3ul甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品，于37度反應(yīng)5分鐘；

A4、加入R1試劑，混勻，于37度繼續(xù)反應(yīng)5分鐘；

A5、在600nm波長下反應(yīng)，用全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，從而進(jìn)行校準(zhǔn)；

A6、重復(fù)上述A1～A5的操作步驟對樣品進(jìn)行檢測。

通過采用上述技術(shù)方案，利用直接競爭法能夠保證試液的渾濁度在高濃度的范圍內(nèi)發(fā)生變化，這樣有利于普通的分析設(shè)備對試液進(jìn)行檢測，從而既簡化的檢測的步驟、降低了成本，同時也能夠保證精準(zhǔn)度。

綜上所述，本發(fā)明具有以下有益效果：

1、在甘膽酸試劑R1中加入乙二胺四乙酸二鈉，這樣能夠有效地屏蔽重金屬對試液的干擾，同時也能夠提高牛血清蛋白的防腐能力，從而有利于延長甘膽酸試劑R1的保存時間；

2、利用甘膽酸試劑R1和樣品混合之后再加入到甘膽酸試劑R2中進(jìn)行并利用直接競爭法使得混合反應(yīng)后的試劑渾濁度控制在較高的濃度范圍，從而有利于普通分析儀器的檢測，這樣即簡化了檢測步驟，又保證了檢測的準(zhǔn)確性。

附圖說明

圖1為試劑盒一和放射免疫分析檢測法之間的關(guān)系圖；

圖2為傳統(tǒng)的膠乳增強(qiáng)免疫試劑盒和放射免疫分析檢測法之間的關(guān)系圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實施例一：

甘膽酸試劑R1：

用純化水800ml將上述原料溶解后，再補(bǔ)加純化水定容至1000ml，然后用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)pH至6.0。

甘膽酸試劑R2：

1.羧基膠乳微球：200nm的膠乳微球

2.CG抗體濃度：以20mg/ml為例進(jìn)行偶聯(lián)

S1、取5ml的包被緩沖液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基膠乳微球，再加入50ul的CG抗體(兔抗人甘膽酸抗體)，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封閉緩沖液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的BSA)，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％甘油)；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為R2試劑。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：

并向上述配置的緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸(純品)得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

實施例二：

甘膽酸試劑R1：

用純化水800ml將上述原料溶解后，再補(bǔ)加純化水定容至1000ml，然后用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至6.0。

甘膽酸試劑R2：

1.羧基膠乳微球：300nm的膠乳微球

2.CG抗體濃度：以20mg/ml為例進(jìn)行偶聯(lián)

S1、取5ml的包被緩沖液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基膠乳微球，再加入50ul的CG抗體(兔抗人甘膽酸抗體)，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封閉緩沖液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的BSA)，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％甘油)；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的羧基膠乳微球，即為R2試劑。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：

并向上述配置的緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸(純品)得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

實施例三：

甘膽酸試劑R1：

用純化水800ml將上述原料溶解后，再補(bǔ)加純化水定容至1000ml，然后用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至6.0。

甘膽酸試劑R2：

1.羧基膠乳微球：150nm的膠乳微球

2.CG抗體濃度：以20mg/ml為例進(jìn)行偶聯(lián)

S1、取5ml的包被緩沖液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基膠乳微球，再加入50ul的CG抗體(雞抗人甘膽酸抗體)，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入等體積的偶聯(lián)緩沖液，再加入400ul的封閉緩沖液，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入等體積的存儲緩沖液；S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為R2試劑。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：

向上述緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸(純品)得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

實施例四：

甘膽酸試劑R1：

用純化水800ml將上述原料溶解后，再補(bǔ)加純化水定容至1000ml，然后用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至6.0。

甘膽酸試劑R2：

1.羧基膠乳微球：220nm的膠乳微球

2.CG抗體濃度：以20mg/ml為例進(jìn)行偶聯(lián)

S1、取5ml的包被緩沖液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基膠乳微球，再加入50ul的CG抗體(兔抗人甘膽酸抗體)，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封閉緩沖液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的BSA)，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％甘油)；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為R2試劑。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：

并向上述配置的緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸(純品)得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

實施例五：

甘膽酸試劑R1：

用純化水800ml將上述原料溶解后，再補(bǔ)加純化水定容至1000ml，然后用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至6.0。

甘膽酸試劑R2：

1.羧基膠乳微球：80nm的膠乳微球

2.CG抗體濃度：以20mg/ml為例進(jìn)行偶聯(lián)

S1、取5ml的包被緩沖液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基膠乳微球，再加入50ul的CG抗體(兔抗人甘膽酸抗體)，37度反應(yīng)1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時；

S3、反應(yīng)結(jié)束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯(lián)緩沖液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封閉緩沖液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的BSA)，37度反應(yīng)1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機(jī)離心，10000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％甘油)；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯(lián)有抗體的膠乳微球，即為R2試劑。

甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：

并向上述配置的緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸(純品)得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一組標(biāo)準(zhǔn)品。

試劑盒的測定方法：

分析方法：競爭抑制法

反應(yīng)方向：下降反應(yīng)

校準(zhǔn)方式：logit-log(4p)

測定波長：600nm

測定溫度：37℃

操作步驟：

A1、取100ul(或者1份)R2試劑；

A2、取400ul(或者4份)R1試劑；

A3、將R1試劑中放入3ul樣本或者甘膽酸標(biāo)準(zhǔn)品，于37度反應(yīng)5分鐘；

A4、加入R2試劑，混勻，于37度繼續(xù)反應(yīng)5分鐘；

A5、在600nm波長下反應(yīng)，用日立7020全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，校準(zhǔn)品濃度分別為：0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml。

一、試劑盒性能評價試驗：

1.準(zhǔn)確度

取具有溯源性的血清低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品各一份，其中低值質(zhì)控品的濃度為3.0mg/L，高值質(zhì)控品的濃度為10.0mg/L，用實施例1-5的試劑盒、試劑盒A(市面上銷售的安徽大干生物工程有限公司基于直接法生產(chǎn)的甘膽酸測定試劑盒)以及試劑盒B(市面銷售的寧波瑞源生物科技有限公司基于均相免疫法生產(chǎn)的甘膽酸測定試劑盒)各進(jìn)行檢測十次，求均值，分別獲得表一和表二的數(shù)據(jù)(單位為mg/L)，并與質(zhì)控靶值進(jìn)行對照。結(jié)果顯示實施例一至實施例五的試劑盒反應(yīng)體系的具有良好的準(zhǔn)確性，可靠性較好；多次檢測結(jié)果誤差較小，說明試劑盒具有良好的穩(wěn)定性，其中實施例一的準(zhǔn)確度和精確度相對較高，而且，每一組實施例的變異系數(shù)都在10％內(nèi)，從而也就說明，本發(fā)明的試劑盒能夠滿足一般情況下的血液中甘膽酸的測試，而市售的試劑盒A和試劑盒B的準(zhǔn)確度與精確度要明顯低于本發(fā)明的試劑盒。

表一

表二

該發(fā)明的反應(yīng)原理是：本發(fā)明采用競爭膠乳增強(qiáng)免疫比濁法，R1試劑里的甘膽酸與樣本中相應(yīng)的甘膽酸抗原，可以和包被了高特異性抗體的膠乳顆粒發(fā)生特異性結(jié)合，形成不溶性的抗原-抗體-膠乳顆粒復(fù)合物，產(chǎn)生一定的濁度，其濁度的高低與樣本中的甘膽酸濃度成正比，在一定波長下進(jìn)行濁度測定，即可測定樣本中被檢測甘膽酸的含量。其中，R1試劑里的甘膽酸為人工合成的甘膽酸，該人工合成的甘膽酸是由sigmaalderich公司提供的，其含有多個抗體靶位，可以和多個抗體進(jìn)行結(jié)合形成鉸鏈結(jié)構(gòu)。形成鉸鏈結(jié)構(gòu)的抗原抗體結(jié)合物體積增大，形成乳濁。而樣本中的甘膽酸抗原只有一個靶位可以和抗體結(jié)合，即只能結(jié)合一個抗體，無法形成鉸鏈，并且樣品中的甘膽酸可以和R1試劑中的甘膽酸競爭結(jié)合抗體。所以，樣本里面的甘膽酸越多，形成鉸鏈越小，濁度越少。因此，當(dāng)樣本中的甘膽酸含量較低時，反應(yīng)液的濁度很高，不會出現(xiàn)像現(xiàn)有的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法(直接免疫比濁法)那樣由于濁度太低無法用普通的檢測儀器進(jìn)行檢測或檢測不準(zhǔn)的問題。從而大大提高試劑盒的檢測靈敏度。

二、樣本檢測和產(chǎn)品比較：

應(yīng)用例A

用本發(fā)明實施例一中的試劑盒一和傳統(tǒng)的膠乳增強(qiáng)免疫試劑盒(試劑盒A)檢測30個樣本，并獲得表三的數(shù)據(jù)。然后分別比較和放射免疫分析檢測法的相關(guān)性，并獲得圖1和圖2。結(jié)果顯示，本發(fā)明實施例一的試劑盒一的檢測結(jié)果與放射免疫分析法檢測結(jié)果相關(guān)性較好，如圖1所示，相關(guān)系數(shù)為0.997，線性方程為y＝0.9466x-0.029。

由圖表結(jié)果顯示，對于其中高濃度和低濃度的樣品的檢測與放射免疫分析檢測法相接近，而市售的現(xiàn)有的膠乳增強(qiáng)免疫試劑盒檢測對于低濃度數(shù)值樣品的檢測與放射免疫分析檢測法相差較大。

應(yīng)用例B

選取30名經(jīng)醫(yī)院診斷肝功能正常但有高血壓、高血脂、高血糖中一種或多種癥狀的志愿者的血清樣品，然后分別比較本發(fā)明實施例1的試劑盒一、試劑盒A(市面上銷售的安徽大干生物工程有限公司基于直接法生產(chǎn)的甘膽酸測定試劑盒)以及試劑盒B(市面銷售的寧波瑞源生物科技有限公司基于均相免疫法生產(chǎn)的甘膽酸測定試劑盒)的檢測結(jié)果，檢測結(jié)果見下表：肝功能正常人血清中甘膽酸的濃度范圍在0.4-2.98mg/L，而肝炎的最低下限濃度為3.18mg/L。由下表結(jié)果可以看出30例肝功能正常但有不同程度三高的患者，試劑盒一檢測結(jié)果與醫(yī)院診斷結(jié)果相同，檢測結(jié)果未出現(xiàn)肝功能異常者，說明本發(fā)明是試劑盒一的檢測準(zhǔn)確度不受患者血液中高濃度甘油三酯、膽固醇、血糖等三高檢測指標(biāo)的影響。而試劑盒A卻檢測出4例肝功能異常的結(jié)果，假陽性率為10％，試劑盒B檢測出3例肝功能異常的結(jié)果，假陽性率為6.7％，說明這兩種試劑盒，也就是目前常用的傳統(tǒng)膠乳增強(qiáng)免疫比濁法(直接法)和免疫均相法檢測三高患者時容易受到血液中三高指標(biāo)物質(zhì)的影響出現(xiàn)假陽性，而本發(fā)明的采用間接法原理制備的試劑盒檢測結(jié)果穩(wěn)定，檢測三高患者，不易出現(xiàn)假陽性。

本具體實施例僅僅是對本發(fā)明的解釋，其并不是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完本說明書后可以根據(jù)需要對本實施例做出沒有創(chuàng)造性貢獻(xiàn)的修改，但只要在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)都受到專利法的保護(hù)。