本發(fā)明涉及免疫分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說，是一種檢測前列腺特異性抗原psa的試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：前列腺特異性抗原psa(prostate)是一種含有237個氨基酸的單肽鏈糖蛋白，分子量約34kda，屬于具有組織特異性的具有糜蛋白酶樣作用的絲氨酸蛋白酶族。psa主要由前列腺的線上皮細胞產(chǎn)生，在精液中的濃度很高。psa的主要生理作用是分解精液中的膠狀蛋白，有稀釋精液，增加精子運動能力的作用。最初分泌到前列腺管的psa是一種無活性的酶原(propsa)，酶原在氨基裂解掉7個氨基酸后具有絲氨酸蛋白酶活性。少量psa可進入血循環(huán)，進入血循環(huán)的大部分psa迅速與蛋白酶抑制素結(jié)合而失活，主要與α-1抗糜蛋白酶(act)和α-2巨球蛋白結(jié)合(mg)，也有少部分被蛋白水解酶滅活后以游離狀態(tài)存在。游離的psa以及和act結(jié)合的psa(psa-act)通過現(xiàn)有免疫學(xué)方法可以檢測到。同時檢測游離psa和psa-act復(fù)合物即為目前所說的總psa檢測。與α-2巨球蛋白結(jié)合(mg)的psa由于蛋白的包裹、遮蔽作用使psa特異性表位消失，因此用現(xiàn)有免疫學(xué)方法無法檢測。血清總psa含量和前列腺疾病密切相關(guān)，良性前列腺增生和惡性的前列腺癌都會引起總psa升高，游離psa則較少受前列腺癌生長的影響。psa具有組織特異性，但并無腫瘤特異性，前列腺炎、良性前列腺增生和前列腺癌均可導(dǎo)致psa升高。前列腺癌已超過皮膚癌成為北美男性最常見的癌癥，因癌致死病例數(shù)排第二位。psa在大多數(shù)有臨床癥狀的前列腺癌中都會升高，因此監(jiān)測psa含量對于評估腫瘤治療效果有重要意義。目前psa的檢測全部采用免疫學(xué)方法，膠體金試紙條法及化學(xué)發(fā)光法，免疫學(xué)方法靈敏度不高，膠體金試紙條靈敏度不高且需要借助人眼識別，化學(xué)發(fā)光法成本較高。進口單抗由于靈敏度高、精密度高、準(zhǔn)確性好、使用靈活方便等，在市場上占據(jù)領(lǐng)先地位。中國專利201210291449.9公開了一種前列腺特異性抗原檢測試劑盒，包括抗-fitc抗體包被的固相載體、fitc標(biāo)記的anti-psa抗體、酶標(biāo)記的anti-fpsa抗體、上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物、以及陰性和陽性對照液；制備上述試劑盒的方法包括以下步驟：1)以抗-fitc抗體包被的固相載體；2)用fitc標(biāo)記anti-psa抗體，獲得fitc標(biāo)記的anti-psa抗體；3)用酶標(biāo)記anti-fpsa抗體，獲得酶標(biāo)記的anti-fpsa抗體；4)分裝和組裝。中國專利201110235581.3公開了游離前列腺特異性抗原定量測定試劑盒，包含fpsa磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強劑，稀釋液，fpsa標(biāo)準(zhǔn)品、fpsa質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。然而現(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于本發(fā)明檢測前列腺特異性抗原psa的試劑盒，目前還未見報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒。本發(fā)明的另一個目的是，提供如上所述試劑盒的用途。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒，包括如下檢測試劑：(1)psa試劑1號成分：(2)psa試劑2號成分：進一步，所述試劑盒還包括psa質(zhì)控品，所述psa質(zhì)控品為含psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述psa抗原提取自人精液。進一步，所述試劑盒還包括psa校準(zhǔn)品，所述psa校準(zhǔn)品為含psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述psa抗原提取自人精液。進一步，所述psa膠體金的標(biāo)記方法如下：(1)用0.1mol/lk2co3或0.1mol/lhcl調(diào)節(jié)金溶膠至ph6.8；(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的psa抗體溶液，攪拌2～3分鐘；(3)加入5ml1％peg20000溶液；(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液；(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/mlpeg20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以a1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存；(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于sephadexg-200柱進行凝膠層析分離純化，以含0.1％bsa的緩沖溶液洗脫。進一步，所述金溶膠的制備方法如下：(1)膠體金的燒制應(yīng)在24小時內(nèi)完成；(2)用量筒稱取所需量的水，將其倒入燒杯中，在燒杯上液面處用記號筆劃線，將水煮至沸騰；(3)將1％的氯金酸溶液按照3:100的比例迅速加入到2的液體中；(4)將1％檸檬酸鈉溶液按4.5:100加入到沸騰的3的液體中，混合均勻，保持沸騰5分鐘至液體呈穩(wěn)定的酒紅色；(5)停止加熱，冷卻至室溫；(6)用水補足至劃線處，將膠體金倒入廣口瓶中，用封口膜密封，得到金溶膠。進一步，所述試劑盒的最低檢測限低于0.1ng/ml，重復(fù)性小于15％，批間差小于15％。進一步，將(80±16)ng/ml的樣本倍比稀釋為5種濃度，將每一濃度的樣本重復(fù)檢測2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，線性相關(guān)系數(shù)大于等于0.999。進一步，所述試劑盒測量結(jié)果的測量偏差在±10％范圍內(nèi)。進一步，所述試劑盒與癌胚抗原(cea)和甲胎蛋白(afp)交叉反應(yīng)均小于1‰。為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：如上任一所述試劑盒的用途，用于：(1)在前列腺特異性抗原定量檢測中的應(yīng)用；(2)在制備人前列腺特異性抗原定量檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用；(3)檢測人前列腺特異性抗原的定量檢測方法：將目標(biāo)濃度為0、0.5、5、15、50和100ng/ml的前列腺特異性抗原校準(zhǔn)品加入全自動生化分析儀，以水為零點，建立工作曲線。操作步驟：計算方法：計算校準(zhǔn)液吸光度差值(a2-a1)，并建立校準(zhǔn)液吸光度－濃度工作曲線。計算樣本的吸光度差值，在工作曲線上讀取對應(yīng)濃度值。質(zhì)控程序：測量psa質(zhì)控品，測試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進行標(biāo)本檢測。本發(fā)明優(yōu)點在于：1、本發(fā)明采用勻相溶膠顆粒免疫測定法(膠體金溶液法)將抗體標(biāo)記到膠體金溶液中，通過全自動生化分析儀檢測病人血樣，相比其它方法靈敏度更高，穩(wěn)定性更強，成本極低，完全可以超越國內(nèi)外同等試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)。2、本發(fā)明的試劑盒采用抗原抗體結(jié)合原理，通過膠體金顆粒與抗體結(jié)合將檢測結(jié)果等比放大，應(yīng)用全自動生化分析儀進行定量檢測。在檢測范圍內(nèi)，沉淀強度與樣本中psa濃度成正比，因此通過內(nèi)插法就可以從擬合曲線上讀取待測樣本的psa濃度。3、本發(fā)明的試劑盒在效期內(nèi)性能穩(wěn)定，最低檢測限、重復(fù)性、線性、準(zhǔn)確性、批間差、分析特異性符合要求。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例一、本發(fā)明試劑盒組分前列腺特異性抗原(psa)定量檢測試劑盒(膠體金法)由以下四種組分構(gòu)成，各組分生產(chǎn)工藝概括如下：(1)psa試劑1號(psa-r1)成分：(2)psa試劑2號(psa-r2)成分：抗psa抗體提取自psa雜交瘤細胞培養(yǎng)上清液或感染的小鼠腹水。(3)psa質(zhì)控品(psa-qc)：內(nèi)容物為含一定濃度psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液(濃度0.02mol/l，ph＝7.4)，psa抗原提取自人精液。質(zhì)控的標(biāo)稱濃度為4ng/ml和30ng/ml，每批的濃度范圍稍有不同。(4)psa校準(zhǔn)品(psa-std)：含一定濃度psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液(濃度0.02mol/l，ph＝7.4)配制而成，psa抗原提取自人精液。目標(biāo)濃度分別為0、0.5、5、15、50和100ng/ml。本試劑盒校準(zhǔn)品濃度可溯源至thestanfordreferencestandard/who96/670(90％psa-act+10％freepsa)。用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、具體使用方法如下：【適用儀器】本試劑盒已在日立7060、olympus400、西門子dimensionxpand全自動生化分析儀上驗證合格?！緳z驗方法】校準(zhǔn)程序：可選擇單點或多點定標(biāo)方式建立工作曲線。單點定標(biāo)：液體校準(zhǔn)液，直接使用。多點定標(biāo)：(對于自動生化儀，定標(biāo)方式選擇nonlinear或log-logit4p法)，將目標(biāo)濃度為0、0.5、5、15、50和100ng/ml的前列腺特異性抗原校準(zhǔn)品加入全自動生化分析儀，以水為零點，建立工作曲線。操作步驟：計算方法：計算校準(zhǔn)液吸光度差值(a2-a1)，并建立校準(zhǔn)液吸光度－濃度工作曲線。計算樣本的吸光度差值，在工作曲線上讀取對應(yīng)濃度值。質(zhì)控程序：測量psa質(zhì)控品，測試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進行標(biāo)本檢測?！緳z驗結(jié)果的解釋】結(jié)果如超過線性范圍，請用生理鹽水將標(biāo)本按1:1稀釋，測定結(jié)果乘2。試劑儲存：各組分均應(yīng)避免陽光直射。磁分離試劑應(yīng)保持直立，防止磁微粒長時間干燥而失活。磁分離試劑、試劑2號如出現(xiàn)凍結(jié)不可繼續(xù)使用。試劑使用后應(yīng)及時恢復(fù)到2-8℃，避免長時間室溫放置。試劑有效期：未開封試劑盒及各組分于2-8℃保存，有效期為12個月?！緲颖疽蟆恳韵聵颖窘?jīng)驗證符合本試劑盒要求：·血清：取5.0ml靜脈血至玻璃試管中，不加抗凝劑，在室溫中靜置，然后通過離心(3000rpm×5min)分離血清部分。標(biāo)本貯存和處理·血清標(biāo)本于室溫(22℃)條件下放置不應(yīng)超過8h?！ぱ鍢?biāo)本于2℃-8℃保存不應(yīng)超過48h，否則應(yīng)-20℃保存?！?20℃保存血清標(biāo)本儲存期小于3個月，凍融次數(shù)小于3次不影響檢測結(jié)果應(yīng)避免樣本反復(fù)凍融。已知的干擾物·若樣本中含有下述濃度干擾物質(zhì)時，不影響檢測結(jié)果：血紅蛋白<5mg/ml；總膽紅素<0.5umol/ml；脂肪乳<10mg/ml；肝素鈉<100iu/ml。·堿性磷酸酶活性高的標(biāo)本(paget病、膽汁阻塞等)檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用?！?biāo)本如果出現(xiàn)明顯微生物污染不能用于檢測?！っ芮薪佑|嚙齒類動物或接受過鼠源單克隆抗體藥物治療的患者，其樣本中可能含有人抗鼠抗體，所得結(jié)果有出現(xiàn)異常的可能性；樣本中含有其它各種異嗜性抗體，也可能導(dǎo)致結(jié)果異常。校準(zhǔn)方法：將psa校準(zhǔn)品a-f作為樣本進行檢測，至少設(shè)兩個重復(fù)管，同時至少做單管的psa質(zhì)控。如果擬合相關(guān)系數(shù)>0.9900，同時psa質(zhì)控測值在預(yù)定范圍內(nèi)，則認(rèn)為定標(biāo)正確，該標(biāo)準(zhǔn)曲線可以儲存使用。質(zhì)量控制：每個工作日都需要進行質(zhì)量控制，每個質(zhì)控點必須至少做1管。如果發(fā)現(xiàn)質(zhì)控測量值不在預(yù)定范圍(參見質(zhì)控單)內(nèi)，則不能進行樣本的檢測。測定結(jié)果的計算：推薦利用四參數(shù)邏輯擬合得到校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的回歸方程，再根據(jù)待測樣本的相對發(fā)光強度可以從回歸曲線上返算出樣本中待測物的濃度。測量范圍：測量范圍為(0.1-100)ng/ml。樣本濃度低于0.1ng/ml時，報告為<0.1ng/ml。樣本濃度高于100ng/ml時報告為>100ng/ml，若想要了解樣本確切的濃度，可用生理鹽水稀釋樣本(建議稀釋20倍)后再測定?！緟⒖挤秶?5％的正常男性血清中psa含量不大于4ng/ml。由于地理、人種及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值(范圍)。在參考值研究中，由于檢測結(jié)果不屬于正態(tài)分布，所以用百分位法表示參考值范圍。psa參考值的百分位值為95％?！緳z驗結(jié)果的解釋】·本產(chǎn)品的檢測結(jié)果不是臨床適應(yīng)癥的唯一確認(rèn)指標(biāo)，其臨床意義需結(jié)合其它檢測指標(biāo)及臨床表現(xiàn)具體分析?！び行┣傲邢倭夹圆∽儯衟sa水平也會升高?！緳z驗方法的局限性】·在臨床診斷時要把本試劑盒的檢測結(jié)果作為對其它臨床信息的一種補充。檢測時要嚴(yán)格遵守操作程序，對步驟的任何改動都有可能影響結(jié)果?！sa濃度超過1000ng/ml時有可能出現(xiàn)hook(鉤狀)效應(yīng)?！と魳颖局泻邢率鰸舛雀蓴_物質(zhì)時，不影響檢測結(jié)果：血紅蛋白<5mg/ml；總膽紅素<0.5umol/ml；脂肪乳<10mg/ml；肝素鈉<100iu/ml?！A性磷酸酶活性高的標(biāo)本(paget病、膽汁阻塞等)檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用?！dta或檸檬酸鈉抗凝血漿標(biāo)本檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用?！咀⒁馐马棥俊け驹噭﹥H用于體外診斷。請嚴(yán)格按照說明書指示合理儲存和使用試劑，對步驟的任何改動都可能影響結(jié)果。試劑超過效期時，請停止使用。·不同批號試劑盒組分不應(yīng)交叉使用?！け驹噭┖械臋z測結(jié)果僅供臨床參考，對疾病的臨床診斷應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮?！び捎诜椒▽W(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行腫瘤標(biāo)記物檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此，在腫瘤診斷和監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告中注明所用試劑特征。疾病監(jiān)測中如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值?！ぴ撛噭┖性谥苽溥^程中所用的血清或血漿原料，雖已經(jīng)通過了hbsag、hiv1/2-ab、hcv-ab等項目的檢測均為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對待。應(yīng)根據(jù)《實驗室—生物安全通用要求》所規(guī)定的處理方法實施。操作時應(yīng)確保切口、或其皮膚損傷處得到充分的保護。三、燒制膠體金的操作標(biāo)準(zhǔn)1.操作前確認(rèn)：1.1操作前確認(rèn)所需玻璃儀器內(nèi)表面均不存在任何污點以及瑕疵。1.2生產(chǎn)前確認(rèn)所用水電阻不小于18mω，且存放時間不超過24小時。2.生產(chǎn)操作：2.1膠體金的燒制應(yīng)在24小時內(nèi)完成。2.2用量筒稱取所需量的水，將其倒入燒杯中，在燒杯上液面處用記號筆劃線，將水煮至沸騰。2.3將1％的氯金酸溶液按照3:100的比例迅速加入到2.2液體中。2.4將1％檸檬酸鈉溶液按4.5:100加入到沸騰的2.3液體中，混合均勻，保持沸騰5分鐘至液體呈穩(wěn)定的酒紅色。2.5停止加熱，冷卻至室溫。2.6用水補足至劃線處。將膠體金倒入廣口瓶中，用封口膜密封，得到金溶膠。四、psa膠體金的標(biāo)記方法：(1)用0.1mol/lk2co3或0.1mol/lhcl調(diào)節(jié)金溶膠至ph6.8。(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的psa抗體溶液，攪拌2～3分鐘。(3)加入5ml1％peg20000溶液。(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液(切忌傾倒)。(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/mlpeg20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以a1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于sephadexg-200柱進行凝膠層析分離純化，以含0.1％bsa的緩沖溶液洗脫。通常用金溶膠洗脫液ph為8.2。以上操作中應(yīng)注意，一切溶液中不應(yīng)含雜質(zhì)微粒，可用高速離心或微孔濾膜預(yù)處理。五、膠體金psa抗體結(jié)合物的質(zhì)量鑒定(1)膠體金顆粒平均直徑的測量：用支持膜的鎳網(wǎng)(銅網(wǎng)也可)蘸取金標(biāo)蛋白試劑，自然干燥后直接在透射電鏡下觀察?；蛴么姿徕檹?fù)染后觀察。計算100個金顆粒的平均直徑。(2)膠體金溶液的od520nm值測定：膠體金顆粒在波長510nm～550nm之間出現(xiàn)最大吸收值峰。用0.02mol/lph8.2pbs液(含1％bsa，0.02％nan3)將膠體金蛋白試劑作1:20稀釋，od520＝0.25左右。一般應(yīng)用液的od520應(yīng)為0.2～0.4。(3)金標(biāo)記psa溶液的特異性與敏感性測定：采用微孔濾膜免疫金銀染色法(mf－igssa)。將可溶性psa抗原吸附于載體上(濾紙、硝酸纖維膜、微孔濾膜)，用膠體金標(biāo)記的psa溶液以直接或間接染色法并經(jīng)銀顯影來檢測相應(yīng)的psa抗原，或直接通過全自動生化分析儀檢測血液中的psa抗原，對金標(biāo)記psa溶液的特異性和敏感性進行鑒定。本試劑盒采用抗原抗體結(jié)合原理，通過膠體金顆粒與抗體結(jié)合將檢測結(jié)果等比放大，應(yīng)用全自動生化分析儀進行定量檢測。在檢測范圍內(nèi)，沉淀強度與樣本中psa濃度成正比，因此通過內(nèi)插法就可以從擬合曲線上讀取待測樣本的psa濃度。六、質(zhì)量控制及技術(shù)參數(shù)1質(zhì)量控制1.1使用待測psa試劑進行以下實驗，用校準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測以下各點：1.2依次計算準(zhǔn)確性、最低檢測限、線性和重復(fù)性。2技術(shù)參數(shù)2.1準(zhǔn)確性測量濃度與瓶標(biāo)濃度偏差在±10％內(nèi)；2.2最低檢測限≤0.1ng/ml；2.3線性相關(guān)系數(shù)r≥0.992.4重復(fù)性兩樣本cv均<15％；2.5質(zhì)控品各質(zhì)控品測值均在范圍內(nèi)。七、被測樣本1.適用樣本適用于血清和肝素抗凝血漿。2.樣本的處理2.1血清取5.0ml靜脈血至玻璃試管中，不加添加劑，在室溫(18-25℃)中靜置，通過離心分離血清部分，貯存。2.2血漿取5.0ml靜脈血至玻璃或塑料試管中，以肝素為抗凝劑，通過離心分離血漿部分，貯存。2.3高濃度樣本若估計標(biāo)本濃度超出100ng/ml，測定前需用樣品稀釋液稀釋。3.樣本的儲存血清和血漿樣本2～8℃穩(wěn)定24小時。若需較長時間保存，分裝密封，于-20℃可保存30天，避免反復(fù)凍融。4.已知干擾因素避免使用以下幾種血清或肝素抗凝血漿：嚴(yán)重溶血的樣本、嚴(yán)重高脂血癥樣本、堿性磷酸酶活性高的樣本(paget病，膽汁阻塞等)、嚴(yán)重黃疸癥的樣本。不可使用edta和檸檬酸鈉為抗凝劑的血漿樣本。八、結(jié)果在hitachi7180全自動生化分析儀上檢測性能評估資料1最低檢測限1.1實驗要求應(yīng)不大于0.1ng/ml。1.2實驗方法用零濃度校準(zhǔn)品作為樣本進行檢測，重復(fù)測定20次，得出20次測量結(jié)果，計算其平均值(m)和標(biāo)準(zhǔn)差(sd)，得出m+2sd，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度和檢測值進行兩點回歸擬合得出一次方程，將m+2sd的rlu值帶入上述方程中，求出對應(yīng)的濃度值，即為最低檢測限。1.3實驗數(shù)據(jù)1.4結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，最低檢測限實驗結(jié)果均不高于0.1ng/ml。2重復(fù)性2.1實驗要求應(yīng)不大于15％2.2實驗方法用(4±0.8)ng/ml和(30±6)ng/ml的樣本各重復(fù)檢測10次，計算10次測量結(jié)果的平均值m和標(biāo)準(zhǔn)差sd，根據(jù)公式cv＝sd/m×100％得出變異系數(shù)cv。2.3實驗數(shù)據(jù)2.4結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，重復(fù)性實驗結(jié)果均不高于15％。3批間差3.1實驗要求應(yīng)不大于15.0％3.2實驗方法用三個批號的試劑盒分別檢測一份濃度在(4±0.8)ng/ml和(30±6)ng/ml范圍內(nèi)的樣本，各重復(fù)10次，計算30次測量結(jié)果的平均值m和標(biāo)準(zhǔn)差sd，根據(jù)公式cv＝sd/m×100％得出變異系數(shù)cv。3.3實驗數(shù)據(jù)樣本變異系數(shù)4ng/ml6.22％30ng/ml7.49％3.4結(jié)論由檢測結(jié)果可見，批間差實驗結(jié)果均不高于15％。4線性4.1實驗要求線性范圍：0.1～100ng/ml，在本線性范圍內(nèi)，試劑盒的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.994.2實驗方法將(80±16)ng/ml的樣本倍比稀釋為5種濃度，將每一濃度的樣本重復(fù)檢測2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)r。4.3實驗數(shù)據(jù)4.4結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，線性相關(guān)系數(shù)(r)實驗結(jié)果均不低于0.99。5準(zhǔn)確性5.1實驗要求用國際標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)過國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化的企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)作為樣本進行檢測，其測量結(jié)果的相對偏差應(yīng)在±10％范圍內(nèi)。5.2實驗方法配制濃度約為30ng/ml(允許偏差為±10％)的國際標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)，將其作為樣本按照說明書的步驟進行檢測，測量3次后，取結(jié)果平均值記為m，根據(jù)公式：測量偏差＝(m-理論值)/理論值×100％。5.3實驗數(shù)據(jù)5.4結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，用國際標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)過國際標(biāo)準(zhǔn)品系列標(biāo)化的企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)作為樣本進行檢測，其測量結(jié)果的相對偏差在±10％范圍內(nèi)。6特異性6.1實驗要求試劑盒與下表中有關(guān)潛在交叉反應(yīng)物應(yīng)無顯著的交叉反應(yīng)。6.2實驗方法將cea、afp用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋到如下表所列濃度作為樣品用試劑盒檢測該樣品得到檢測濃度，以測量濃度與加入濃度的比值表示交叉反應(yīng)的程度。6.3實驗數(shù)據(jù)第一批數(shù)據(jù)第二批數(shù)據(jù)第三批數(shù)據(jù)cea干擾度小于1‰小于1‰小于1‰afp干擾度小于1‰小于1‰小于1‰6.4結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，試劑盒與癌胚抗原(cea)和甲胎蛋白(afp)交叉反應(yīng)均小于1‰7結(jié)論由三批試劑檢測結(jié)果可見，試劑盒在效期內(nèi)性能穩(wěn)定，最低檢測限、重復(fù)性、線性、準(zhǔn)確性、批間差、分析特異性符合要求。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。當(dāng)前第1頁12