本發(fā)明涉及病原體檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是涉及一種torch檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

torch指可導(dǎo)致先天性宮內(nèi)感染及圍產(chǎn)期感染而引起圍產(chǎn)兒畸形的病原體，其是一組病原微生物的英文名稱縮寫(xiě)。其中t(toxoplasmosisgondii)即弓漿蟲(chóng)；o(others)代表其他，包括梅毒(syphilis)、水痘-帶狀皰疹病毒(varicella-zoster)、微小病毒b19(parvovirusb19)等；r(rubellavirus)代表風(fēng)疹病毒；c(cytomegalovirus，cmv)代表巨細(xì)胞病毒；h(herpessimplexvirus，hsv)代表單純皰疹病毒，分為第一型(herpessimplexvirustype1，hsv1)與第二型(herpessimplexvirustype2，hsv2)。torch可造成母嬰感染，孕婦由于內(nèi)分泌改變和免疫力下降易發(fā)生原發(fā)性感染，感染時(shí)病毒可通過(guò)胎盤(pán)或產(chǎn)道傳染給胎兒，引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎或畸形胎，也可能造成新生兒多系統(tǒng)損害，特別在懷孕初期的器官形成期，若受病毒感染則有可能破壞細(xì)胞或抑制細(xì)胞的分裂和增殖，若于器官形成期后感染，則可能破壞組織和器官，且若孕婦曾經(jīng)感染過(guò)，潛伏于體內(nèi)的病毒也容易被活化而產(chǎn)生復(fù)發(fā)性感染。

弓漿蟲(chóng)(toxoplasmosisgondii)廣泛分布于自然界中，主要宿主為溫血的脊椎動(dòng)物，但弓漿蟲(chóng)寄生的專一性不高，因此人、豬、牛皆可能成為中間宿主，而貓為弓漿蟲(chóng)的最終宿主，因此其主要感染途徑通常是因食入受貓糞便污染的食物或受弓漿蟲(chóng)寄生的未煮熟肉類或土壤。人類感染弓漿蟲(chóng)通常不會(huì)出現(xiàn)明顯癥狀且會(huì)終身免疫。但孕婦若于妊娠期間初次感染，則可能垂直感染胎兒，造成先天性弓漿蟲(chóng)癥，常見(jiàn)癥狀為脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、顱內(nèi)鈣化及水腦癥，導(dǎo)致胎兒畸形、造成流產(chǎn)及新生兒異常等后遺癥。

風(fēng)疹病毒(rubellavirus，又名德國(guó)麻疹病毒)是一種高傳染性的急性病毒，臨床癥狀通常為輕度發(fā)燒、疲倦、輕度鼻炎及伴隨全身性不規(guī)則丘疹，一般于 耳后淋巴結(jié)、枕骨下淋巴結(jié)以及頸后淋巴結(jié)腫大是常見(jiàn)的癥狀，但發(fā)病期不長(zhǎng)且病征溫和。懷孕期間若感染德國(guó)麻疹病毒，則可透過(guò)胎盤(pán)垂直傳染給胎兒造成死亡、流產(chǎn)或主要器官受損，于妊娠前期12周內(nèi)感染者，胎兒有25％以上機(jī)率產(chǎn)生先天性德國(guó)麻疹癥候群，于16周內(nèi)感染者，胎兒則有10％機(jī)率產(chǎn)生單一先天性缺陷，若于20周后才感染，生下畸形兒機(jī)率則很小。

巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus，cmv)是一種常見(jiàn)的病毒，屬于人類皰疹病毒，能潛伏且終身帶原，感染初期沒(méi)有明顯癥狀，因此大多數(shù)人不會(huì)發(fā)覺(jué)自己感染巨細(xì)胞病毒。而巨細(xì)胞病毒感染是先天性感染疾病的最常見(jiàn)的病因，能引起胎兒、嬰兒嚴(yán)重?fù)p害或死亡，其中最為嚴(yán)重的是導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。]感染巨細(xì)胞病毒的臨床表現(xiàn)有：

(1)先天性感染，孕婦于妊娠期12周內(nèi)感染會(huì)造成胎兒的先天性感染，可能為隱性感染或?qū)е滤捞ァ⒘鳟a(chǎn)、早產(chǎn)及先天性畸形；

(2)新生兒感染，出生12周內(nèi)感染會(huì)出現(xiàn)肺炎、肝炎、淋巴結(jié)腫大和皮疹等；

(3)兒童和成人感染，多數(shù)為隱性感染，少數(shù)會(huì)出現(xiàn)單核細(xì)胞增多癥、肺炎、肝炎及心肌炎；

(4)免疫缺陷及器官移植病人感染，可能導(dǎo)致表現(xiàn)全身各器官感染致死率高。

單純皰疹病毒(herpessimplexvirus，hsv)是一種病毒傳染的疾病，感染后會(huì)有局部的原發(fā)性病灶，但痊愈后仍有復(fù)發(fā)的可能，并分為第一型與第二型。

單純皰疹病毒第一型(hsv1)，多發(fā)生于幼兒，但大部分原發(fā)性感染癥狀溫和不明顯，若感染到新生兒，則可能會(huì)產(chǎn)生致死的先天性單純皰疹。而此型的原發(fā)及再發(fā)性感染都可能影響到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，由于抗病毒治療可降低死亡率，故可做腦組織的活體檢驗(yàn)用以早期診斷疑似病例。

單純皰疹病毒第二型(hsv2)，此型病毒通常引起生殖器皰疹，若懷孕婦女的陰道感染此病毒，則有很高的危險(xiǎn)性會(huì)傳染給新生兒，造成新生兒內(nèi)臟彌漫性的感染、腦炎、甚至死亡，同時(shí)hsv2也是婦女子宮頸癌的危險(xiǎn)因子。

b19微小病毒是幼兒常見(jiàn)的出疹性疾病，為傳染性紅斑病因，若是成人感染， 癥狀一般輕微只會(huì)感到關(guān)節(jié)疼痛或腫脹，但若為孕婦感染則可能會(huì)造成胎兒死亡，此外，該病毒還可能引起免疫力低的病患出現(xiàn)嚴(yán)重貧血。b19微小病毒不僅是兒科常見(jiàn)的出疹性疾病病因，還會(huì)造成慢性溶血病患發(fā)生急性多關(guān)節(jié)病，以及造成免疫缺損病患持續(xù)性的感染。如果于妊娠早期感染者，可能造成胎兒宮內(nèi)貧血、胎兒水腫、心臟畸形等傷害，但若于20周后才感染對(duì)胎兒就無(wú)影響。

目前檢測(cè)torch主要是利用免疫學(xué)方法，藉由感染人體后產(chǎn)生的igg或igm進(jìn)行判斷，檢驗(yàn)出特異性igg表示感染過(guò)，且已感染一段時(shí)期，若檢驗(yàn)出特異性igm則表示為近期感染，或潛伏于體內(nèi)的病毒被活化而產(chǎn)生復(fù)發(fā)性感染的可能，但現(xiàn)有試劑組仍多為單一檢測(cè)或可同時(shí)檢驗(yàn)項(xiàng)目有限，無(wú)法即時(shí)提供完整檢驗(yàn)結(jié)果有效協(xié)助臨床診斷。

現(xiàn)有技術(shù)普遍存在于以下問(wèn)題待改良：

(1)單一檢測(cè)試劑組的待測(cè)樣本需求量大，采集待測(cè)樣本造成病患負(fù)擔(dān)；

(2)市售多元檢測(cè)試劑組與方法，可提供一次性檢測(cè)項(xiàng)目有限，能降低樣本需求但無(wú)法有效提升檢驗(yàn)效率；

(3)檢測(cè)結(jié)果報(bào)告僅能提供病患檢驗(yàn)數(shù)據(jù)與分析，無(wú)法同時(shí)提供檢驗(yàn)試劑組完整信息以作為參考。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種對(duì)樣品需求量低且檢測(cè)效率高的torch檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

一種torch檢測(cè)試劑盒，包括微載體試劑、免疫反應(yīng)抗體及檢測(cè)試劑；

所述微載體試劑中含有包被有torch病原體的微載體，且針對(duì)不同的torch病原體的所述微載體的編碼信息不同；所述微載體試劑含有包被有弓漿蟲(chóng)的微載體、包被有風(fēng)疹病毒的微載體、包被有巨細(xì)胞病毒的微載體、包被有單純皰疹病毒第一型的微載體、包被有單純皰疹病毒第二型的微載體以及包被有b19微小病毒的微載體中的至少一種；

所述免疫反應(yīng)抗體包括抗人igg抗體及抗人igm抗體，且所述抗人igg抗 體及抗人igm抗體均連接有檢測(cè)標(biāo)記物；

所述檢測(cè)試劑含有能夠與所述檢測(cè)標(biāo)記物反應(yīng)結(jié)合的熒光蛋白。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述微載體試劑含有包被有弓漿蟲(chóng)的微載體、包被有風(fēng)疹病毒的微載體、包被有巨細(xì)胞病毒的微載體、包被有單純皰疹病毒第一型的微載體、包被有單純皰疹病毒第二型的微載體以及包被有b19微小病毒的微載體。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述微載體表面的抗原包被物通過(guò)其帶有的氨基與對(duì)應(yīng)的所述微載體表面的活化羧基反應(yīng)后包被在所述微載體表面。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述抗人igg抗體為羊抗人igg抗體，所述抗人igm抗體為羊抗人igm抗體。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)標(biāo)記物為生物素，所述熒光蛋白為鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅熒光蛋白。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括前處理試劑，所述前處理試劑有兩組，其中一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)；

用于igg抗體檢測(cè)的前處理試劑含有10mg/ml的bsa、1×pbs緩沖液、0.05wt％的nan3、1wt％的pva以及去離子水；

用于igm抗體檢測(cè)的前處理試劑含有體積濃度為50％的羊抗人igg抗體fc、0.025wt％nan3、0.5×pbs緩沖液、1wt％pva以及去離子水。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品。

一種torch檢測(cè)方法，使用上述任一實(shí)施例所述的torch檢測(cè)試劑盒，所述torch檢測(cè)方法包括如下步驟：

將所述待測(cè)樣本分為兩組，一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)，于相應(yīng)的所述微孔中加入待測(cè)樣本；

于所述微孔中加入微載體試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)；

清洗所述多孔板后，于所述微孔中加入含有所述免疫反應(yīng)抗體的試劑，于30-50℃、500-200rpm震蕩反應(yīng)，其中，用于igg抗體檢測(cè)的組加入抗人igg抗體，用于igm抗體檢測(cè)的組加入抗人igm抗體；

于所述微孔中加入所述檢測(cè)試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)；

清洗所述多孔板后，使用影像識(shí)別系統(tǒng)辨識(shí)所述微載體的編碼信息，并檢測(cè)對(duì)應(yīng)的標(biāo)記信號(hào)，經(jīng)分析處理得到檢測(cè)結(jié)果。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括在加入待測(cè)樣本之前，于相應(yīng)的微孔中加入前處理試劑，并在加入所述待測(cè)樣本后，將所述前處理試劑與所述待測(cè)樣本于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)的步驟。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括向不同的所述微孔中加入陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品的步驟，對(duì)所述陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品的處理同所述待測(cè)樣本。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)標(biāo)記物為生物素，所述熒光標(biāo)記物為鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅熒光蛋白；所述檢測(cè)對(duì)應(yīng)的標(biāo)記信號(hào)是使用熒光亮度檢測(cè)組件檢測(cè)并量化所述微載體上的熒光信號(hào)。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述影像識(shí)別系統(tǒng)為digiplexanalyzer；所述分析處理是使用digiplexanalyzer的軟件系統(tǒng)dexipher進(jìn)行分析處理。

本發(fā)明的torch檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法具有如下有益效果：

(1)該檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)多達(dá)六種torch病原體對(duì)應(yīng)的igg抗體或igm抗體，從而可以豐富檢測(cè)結(jié)果，可更為有效的輔助臨床診斷；

(2)當(dāng)檢測(cè)試劑盒中微載體、包被抗體及檢測(cè)抗體有多種時(shí)，該檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)多種人類torch病原體，無(wú)需多次檢測(cè)，可減少所需樣本量，并可有效提高檢測(cè)效率及結(jié)果的準(zhǔn)確性；

(3)多元檢測(cè)以多重篩檢技術(shù)及結(jié)合多元化生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)可增加臨床精準(zhǔn)度與簡(jiǎn)便性；

(4)影像辨識(shí)系統(tǒng)結(jié)合軟體分析可取得大量且完整的檢測(cè)結(jié)果與試劑組信息，數(shù)據(jù)處理方便，結(jié)果信息全面。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)流程圖。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的理解更加透徹全面。

一實(shí)施方式的torch檢測(cè)試劑盒，包括微載體試劑、免疫反應(yīng)抗體及檢測(cè)試劑。

微載體試劑中含有微載體(microcarrier)。微載體采用磁性材料制作，具有磁性。微載體上設(shè)有用于供影像識(shí)別系統(tǒng)辨識(shí)的編碼信息，并且其表面設(shè)有修飾層，如物理修飾層或化學(xué)修飾層，優(yōu)選化學(xué)修飾層。其中化學(xué)修飾層可以但不限于經(jīng)由羧化作用處理形成的修飾層。對(duì)于經(jīng)羧化作用處理的微載體可藉nhs(n-hydroxysuccinimide，n-羥基琥珀酰亞胺)與edc(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺)活化羧基進(jìn)行反應(yīng)，將帶有氨基的抗原結(jié)合于微載體表面，形成抗原包被的微載體。

微載體容量高，可作為多元載體。當(dāng)需要能夠檢測(cè)多種病原體時(shí)，微載體可以針對(duì)性的設(shè)計(jì)為多種，以包被不同的抗原包被物。在本實(shí)施方式中，微載體至少有一種，針對(duì)六種torch病原體：弓漿蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒第一型、單純皰疹病毒第二型以及b19微小病毒中的至少一種設(shè)計(jì)。包被不同的torch病原體的微載體上的編碼信息不同。

抗原包被在微載體表面。抗原可與微載體通過(guò)物理作用或化學(xué)作用連接。對(duì)于化學(xué)作用連接的，可以在抗原上連接捕獲基團(tuán)。捕獲基團(tuán)與微載體表面的化學(xué)修飾層對(duì)應(yīng)，可以與微載體表面的化學(xué)修飾層共價(jià)結(jié)合。在一實(shí)施方式中，捕獲基團(tuán)可以為氨基等，氨基可以與微載體表面的活化羧基反應(yīng)結(jié)合。

抗原包被的微載體可采用但不限于如下方法制備：

將微載體以含15％etoh的100mmmes試劑進(jìn)行清洗后，依序加入50mg/mlnhs與50mg/mledc于15％etoh的100mmmes中，反應(yīng)條件為室溫旋轉(zhuǎn)震蕩二十分鐘，此反應(yīng)為活化微載體表面。清洗后加入欲包被使用的抗原，反應(yīng)條件為室溫旋轉(zhuǎn)震蕩二小時(shí)，此反應(yīng)為接合作用，清洗后再加入含 1％bsa的tbs，反應(yīng)條件為室溫旋轉(zhuǎn)震蕩三十分鐘，此反應(yīng)為親合前置反應(yīng)，待以上反應(yīng)完成，最后以pbst進(jìn)行清洗即完成包被過(guò)程。

在本實(shí)施方式中，微載體試劑含有包被有弓漿蟲(chóng)的微載體、包被有風(fēng)疹病毒的微載體、包被有巨細(xì)胞病毒的微載體、包被有單純皰疹病毒第一型的微載體、包被有單純皰疹病毒第二型的微載體以及包被有b19微小病毒的微載體中的至少一種。優(yōu)選的，微載體試劑含有上述六種微載體，也即該六種微載體混合在一起制成混合試劑，該混合試劑可用于同時(shí)檢測(cè)上述六種torch病原體。

在本實(shí)施方式中，微載體試劑有兩組，一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)。針對(duì)同一種torch病原體，用于其igg抗體檢測(cè)的微載體與用于其igm抗體檢測(cè)的微載體上包被的抗原可以相同，也可以不同，如在一實(shí)施方式中，用于igg抗體檢測(cè)的微載體試劑及用于igm抗體檢測(cè)微載體試劑中的微載體包被的抗原可選用如下表1所示：

表1

免疫反應(yīng)抗體包括抗人igg抗體及抗人igm抗體?？谷薸gg抗體及抗人igm抗體均連接有檢測(cè)標(biāo)記物。在本實(shí)施方式中，抗人igg抗體為羊抗人igg抗體(goatanti-humaniggantibody)，抗人igm抗體為羊抗人igm抗體(goatanti-humanigmantibody)。兩種免疫反應(yīng)抗體分別制備成免疫反應(yīng)試劑，以分別用于待測(cè)血清等樣本中igg抗體及igm抗體的檢測(cè)。如在一實(shí)施方式中，免疫反應(yīng)抗體可選用如下表2所示：

表2

檢測(cè)試劑含有能夠與檢測(cè)標(biāo)記物反應(yīng)結(jié)合的熒光蛋白。在本實(shí)施方式中，檢測(cè)標(biāo)記物為生物素，熒光蛋白為鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅熒光蛋白?？衫斫?，在其他實(shí)施例中，檢測(cè)標(biāo)記物及熒光蛋白不限于上面所述，如檢測(cè)標(biāo)記物可以為鏈霉親和素，熒光蛋白可以為親和素標(biāo)記的熒光蛋白等。

此外，在本實(shí)施方式中，該檢測(cè)試劑盒還包括前處理試劑、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品。

前處理試劑可以降低背景值影響。在本實(shí)施方式中，前處理試劑有兩組，其中一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)。用于igg抗體檢測(cè)的前處理試劑含有10mg/ml的bsa、1×pbs緩沖液、0.05wt％的nan3、1wt％的pva以及去離子水。用于igm抗體檢測(cè)的前處理試劑含有體積濃度為50％的羊抗人igg抗體fc、0.025wt％nan3、0.5×pbs緩沖液、1wt％pva以及去離子水，如可以選用equitech-bio公司的產(chǎn)品目錄號(hào)為gahgfc-0500的試劑。具體如下表3所示：

表3

陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及閾值質(zhì)控品在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)會(huì)有各自所屬的微孔，不會(huì)與待測(cè)樣本混合，但須與待測(cè)樣本一同進(jìn)行完整的實(shí)驗(yàn)流程而得到各自的 mfi值，如需要與前處理試劑反應(yīng)、與微載體試劑反應(yīng)、與含有免疫反應(yīng)抗體的試劑反應(yīng)以及與檢測(cè)試劑反應(yīng)等。其中陽(yáng)性與陰性質(zhì)控品的mfi值可作為待測(cè)樣本或?qū)嶒?yàn)流程有無(wú)問(wèn)題的判定依據(jù)，而閾值質(zhì)控品的mfi值則可提供軟體預(yù)設(shè)的判斷原則進(jìn)行樣本分析，即s/co值，其中s表示待測(cè)樣本的signal值，co(cutoff)表示閾值，所得s/co≥1.1表示陽(yáng)性(positive)，s/co＜0.9表示陰性(negative)，0.9≤s/co＜1.1則表示不確定(indeterminate)。

在本實(shí)施方式中，閾值質(zhì)控品可以選用從cerba所購(gòu)買(mǎi)的血清血漿，可根據(jù)已知結(jié)果，挑選出分別含弓漿蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒第一型、單純皰疹病毒第二型以及b19微小病毒呈弱陽(yáng)性的六種血清血漿來(lái)作為閾值質(zhì)控品。使用時(shí)則根據(jù)同一批實(shí)驗(yàn)進(jìn)行所得的閾值作為當(dāng)次的標(biāo)準(zhǔn)，如明顯大于該閾值(s/co≥1.1)的檢驗(yàn)樣本則判斷為陽(yáng)性，反之則判斷為陰性(s/co＜0.9)，與該閾值相近(0.9≤s/co＜1.1)的表示為不確定樣品，需要結(jié)合其他試驗(yàn)檢測(cè)。

陽(yáng)性質(zhì)控品可以選用從cerba所購(gòu)買(mǎi)的血清血漿，可根據(jù)已知結(jié)果，挑選出含弓漿蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒第一型、單純皰疹病毒第二型以及b19微小病毒顯示陽(yáng)性的血清血漿來(lái)進(jìn)行混合(其中亦可能同一管血清血漿含一種以上的病原體)，其混合比例則根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其mfi值必須明顯大于同一批次中所選用的閾值質(zhì)控品為選擇標(biāo)準(zhǔn)。

陰性質(zhì)控品可選用100％正常山羊血清(normalgoatserum)，如jacksonimmunoresearch生產(chǎn)的產(chǎn)品目錄號(hào)005-00-121的正常山羊血清。

本實(shí)施方式還提供了一種torch檢測(cè)方法，其使用上述torch檢測(cè)試劑盒。該torch檢測(cè)方法包括如下步驟：

步驟s110，于多孔盤(pán)的待進(jìn)行反應(yīng)的微孔中加入前處理試劑，用于降低背景值的影響。

前處理試劑的加入分成兩組加入，用于igg抗體檢測(cè)的前處理試劑及用于igm抗體檢測(cè)的前處理試劑分別加入至不同的微孔中。

步驟s120，將待測(cè)樣本也分為兩組，一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)，于相應(yīng)的微孔中加入待測(cè)樣本，于30-50℃、500-2000rpm震蕩 反應(yīng)。

在本實(shí)施方式中，還包括向不同的微孔中加入陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品的步驟，對(duì)陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品的處理同待測(cè)樣本。

步驟s130，于微孔中加入微載體試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)。

步驟s140，清洗多孔板后，于微孔中加入含有免疫反應(yīng)抗體的試劑，于30-50℃、500-200rpm震蕩反應(yīng)，其中，用于igg抗體檢測(cè)的組加入抗人igg抗體，用于igm抗體檢測(cè)的組加入抗人igm抗體。

在本實(shí)施方式中，清洗多孔板時(shí)，將多孔板放置在磁性裝置上，以吸附具有磁性的微載體，將其吸附在微孔的孔底，以下同理。

步驟s150，于微孔中加入檢測(cè)試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)。

步驟s160，清洗多孔板后，使用影像識(shí)別系統(tǒng)辨識(shí)微載體的編碼信息，并檢測(cè)對(duì)應(yīng)的標(biāo)記信號(hào)，經(jīng)分析處理得到檢測(cè)結(jié)果。

本實(shí)施方式所用的標(biāo)記物為鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅熒光蛋白試劑，檢測(cè)對(duì)應(yīng)的標(biāo)記信號(hào)是使用熒光亮度檢測(cè)組件檢測(cè)并量化微載體上的熒光信號(hào)，包括影像辨識(shí)系統(tǒng)與熒光亮度檢測(cè)組件，結(jié)合ccd相機(jī)與熒光顯微鏡之產(chǎn)品。本實(shí)施方式所用的影像識(shí)別系統(tǒng)為digiplexanalyzer，包括影像辨識(shí)系統(tǒng)與熒光亮度檢測(cè)元件，反應(yīng)完成后使用者可將多孔板置于digiplexanalyzer中進(jìn)行讀取與分析，該儀器會(huì)于所選擇區(qū)域拍照，并藉影像辨識(shí)系統(tǒng)辨識(shí)出影像中各微載體上的編碼信息。分析處理是使用plexbio100的軟件系統(tǒng)dexipher進(jìn)行分析處理，因各抗原于包被時(shí)與微載體上的編碼信息對(duì)應(yīng)，該條件也預(yù)先寫(xiě)入軟體系統(tǒng)，所以系統(tǒng)可成功辨識(shí)出每個(gè)微載體對(duì)應(yīng)的信號(hào)。經(jīng)軟件分析計(jì)算后輸出相關(guān)信息，包括:試劑名稱、試劑批號(hào)、操作者、微載體對(duì)應(yīng)之torch病原體等信息及檢測(cè)結(jié)果。

本發(fā)明的torch檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法具有如下有益效果：

(1)該檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)多達(dá)六種torch病原體對(duì)應(yīng)的igg抗體或igm抗體，從而可以豐富檢測(cè)結(jié)果，可更為有效的輔助臨床診斷；

(2)當(dāng)檢測(cè)試劑盒中微載體、包被抗體及檢測(cè)抗體有多種時(shí)，該檢測(cè)試劑 盒可同時(shí)檢測(cè)多種torch病原體，無(wú)需多次檢測(cè)，可減少所需樣本量，并可有效提高檢測(cè)效率及結(jié)果的準(zhǔn)確性；

(3)多元檢測(cè)以多重篩檢技術(shù)及結(jié)合多元化生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)可增加臨床精準(zhǔn)度與簡(jiǎn)便性；

(4)影像辨識(shí)系統(tǒng)結(jié)合軟體分析可取得大量且完整的檢測(cè)結(jié)果與試劑組信息，數(shù)據(jù)處理方便，結(jié)果信息全面。

以下為具體實(shí)施例部分：

實(shí)施例1

實(shí)施例1的檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)六種torch病原體對(duì)應(yīng)的igg抗體和igm抗體。其中，六種torch病原體分別為弓漿蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒第一型、單純皰疹病毒第二型以及b19微小病毒。相應(yīng)的，每組微載體試劑中含有六種對(duì)應(yīng)的微載體，用于igg抗體檢測(cè)的微載體組上包被有對(duì)應(yīng)的igg抗原，用于igm抗體檢測(cè)微載體上包被有對(duì)應(yīng)的igm抗原，具體的igg抗原及igm抗原如上述表1所示。

可理解，在其他實(shí)施例中，該檢測(cè)試劑盒可以含有用于檢測(cè)上述六種torch病原體中的一種、兩種、三種、四種或五種對(duì)應(yīng)的微載體試劑及質(zhì)控品。

該檢測(cè)方法包括如下步驟：

將溫孵震蕩器的溫度設(shè)定在30-50℃之間，進(jìn)行預(yù)熱。

于一次性96孔板的待進(jìn)行反應(yīng)的微孔中加入100μl前處理試劑，用于降低背景值影響。前處理試劑(如上述表3所示)的加入分成兩組加入，用于igg抗體檢測(cè)的前處理試劑及用于igm抗體檢測(cè)的前處理試劑分別加入至不同的微孔中。

將采集的人類血清待測(cè)樣本分為兩組，一組用于igg抗體檢測(cè)，另一組用于igm抗體檢測(cè)，于相應(yīng)的微孔中加入待測(cè)樣本，并在其他相應(yīng)的微孔中加入陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品及六種閾值質(zhì)控品，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)15min。待測(cè)樣本與質(zhì)控品的添加量均為5μl。

于微孔中加入20μl微載體試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)30min。 其中，用于igg抗體檢測(cè)的組加入包被有igg抗原的微載體，用于igm抗體檢測(cè)的組加入包被有igm抗原的微載體。

清洗一次性96孔板后，于微孔中加入含有50μl免疫反應(yīng)抗體的試劑(如上述表2所示)，于30-50℃、500-200rpm震蕩反應(yīng)30min，其中，用于igg抗體檢測(cè)的組加入抗人igg抗體，用于igm抗體檢測(cè)的組加入抗人igm抗體。

于微孔中加入50μl檢測(cè)試劑，于30-50℃、500-2000rpm震蕩反應(yīng)10min。

清洗一次性96孔板后，將操作完成的一次性96微孔板放入影像辨識(shí)系統(tǒng)digiplexanalyzer辨識(shí)微載體，以及熒光亮度檢測(cè)元件分析并量化微載體上的熒光訊號(hào)，最后經(jīng)由digiplexanalyzer之軟體系統(tǒng)dexipher進(jìn)行分析計(jì)算后，得到檢驗(yàn)試劑組信息的報(bào)告與檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果如下表4和表5所示。

表4

注：實(shí)施例1所用的檢測(cè)樣本為已知結(jié)果的人類血清，目的在于證明使用本發(fā)明的torch試劑盒及檢測(cè)方法的確能檢測(cè)到torchigg與igm，如對(duì)應(yīng)每種torch病原體，其中第一個(gè)人類血清樣本中含有相應(yīng)的抗體，第二個(gè)人類血清樣本中不含有相應(yīng)的抗體，以下同理；

s表示signal，co表示cutoff，對(duì)于樣本結(jié)果的判定方法為所測(cè)得之樣本mfi除以該檢測(cè)項(xiàng)目之閾值mfi，所得s/co≥1.1表示positive，s/co＜0.9表示 negative，0.9≤s/co＜1.1則表示indeterminate，下同。

表5

由上述表4和表5可以看出，該torch檢測(cè)試劑盒可一次性針對(duì)含有多種torch病原體的待測(cè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，從而可以減少所需的樣本量，并有效提高檢測(cè)效率，并且由于是一次性檢測(cè)，無(wú)需多次加樣，試驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確。該檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法可結(jié)合多元檢測(cè)以多重篩檢技術(shù)及結(jié)合多元化生醫(yī)檢測(cè)系統(tǒng)，從而可以增加臨床精準(zhǔn)度與簡(jiǎn)便性。并可結(jié)合影像辨識(shí)系統(tǒng)及相應(yīng)的軟體分析，可取得大量且完整的檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)效率進(jìn)一步提高。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書(shū)記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。