本發(fā)明涉及一種高效液相色譜檢測方法，具體涉及一種益母生化合劑中苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法。

背景技術(shù)：

益母生化合劑由益母草、當(dāng)歸、川芎、桃仁、炮姜、甘草(炙)以上六味藥材炮制而成。具有活血祛瘀、溫經(jīng)止痛的功效，主要用于治療產(chǎn)后惡露不行、血瘀腹痛。其為淡橙黃色至棕黃色液體。氣香，味微甜。該益母生化合劑主要用于馬、牛、羊、豬等牲畜，其中馬、牛用量為200-300mL，羊、豬用量為30-50mL。

目前該制劑收載于《獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)匯編——獸藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)》(第二冊)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對益母草、甘草、川芎進(jìn)行了薄層色譜鑒別，無含量測定標(biāo)準(zhǔn)，很難控制其質(zhì)量，保證產(chǎn)品的安全性、有效性與質(zhì)量可控性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：現(xiàn)有技術(shù)中沒有用于益母生化合劑中苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法，且采用現(xiàn)有苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法導(dǎo)致檢測結(jié)果不理想的問題，目的在于提供解決上述問題的一種益母生化合劑中苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種益母生化合劑中苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法，包括：

(1)利用益母生化合劑制備供試品溶液；

(2)進(jìn)行高效液相色譜檢測，高效液相色譜檢測的流動相為18∶82的甲醇和水。

進(jìn)一步，所述供試品溶液的制備過程如下：

按照益母生化合劑處方，制備益母生化合劑；取5mL于25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得。所述液相色譜檢測中色譜柱采用C₁₈色譜柱，色譜柱的檢測波長為210nm，流速為1mL·min^-1；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10μL。

現(xiàn)有技術(shù)中在進(jìn)行苦杏仁苷的高效液相色譜檢測時，由于藥物中存在其他成份，其他成份會對待測成份造成干擾作用，因而在不同的藥物中，雖然待測成份一樣，但適用于其中一種藥物的預(yù)處理手段不一定適用于另一種藥物。并且，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)相同原料組成的藥物，其制備工藝存在差異時，對最終成品也會造成極大影響，尤其是對于采用高效液相色譜檢測而言，其中某一組分進(jìn)行檢測時檢測結(jié)果差異極大，因而，上述因素也導(dǎo)致了色譜檢測的效果較差的問題。

通過上述檢測方法和檢測條件的優(yōu)化，有效避免了其他成份對苦杏仁苷檢測的影響，使檢測結(jié)果更加精準(zhǔn)、檢測效果更加穩(wěn)定。

進(jìn)一步，還包括對照品溶液與陰性對照溶液，該對照品溶液的制備方法如下：

精密稱取4.65mg苦杏仁苷對照品于50mL容量瓶中，用70％甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得93μg/mL苦杏仁苷對照品溶液；

該陰性對照溶液的制備方法如下：

按照益母生化合劑處方，取除桃仁外的其他藥材，按處方工藝制成合劑，再取5mL于25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得。

本發(fā)明通過優(yōu)化對照藥材溶液和陰性對照溶液的制備工藝，有效驗證了本發(fā)明方法檢測的準(zhǔn)確性。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點和有益效果：

通過本發(fā)明的優(yōu)化設(shè)計，使檢測結(jié)果更加精準(zhǔn)、檢測效果更加穩(wěn)定。

附圖說明

圖1為實施例1的對照品溶液的色譜圖。

圖2為實施例1的供試品溶液的色譜圖。

圖3為實施例1的陰性對照溶液的色譜圖。

圖4為實施例2中甲醇:水＝20:80時供試品溶液的的色譜圖。

具體實施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，本發(fā)明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對本發(fā)明的限定。

實施例1

一種益母生化合劑中苦杏仁苷的高效液相色譜檢測方法，具體檢測過程如下：

(1)供試品溶液的制備：按照益母生化合劑處方，制備益母生化合劑。取5mL于25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得。對照品溶液的制備：精密稱取4.65mg苦杏仁苷對照品于50mL容量瓶中，用70％甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得93μg/mL苦杏仁苷對照品溶液。陰性對照溶液的制備：按照益母生化合劑處方，取除桃仁外的其他藥材，按處方工藝制成合劑，再取5mL于25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得。

(2)采用上述三種不同的溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測。其中，色譜柱：Global Chromatography C18(250mm×4.6mm,5μm)；流速：1mL·min^-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測波長：210nm。流動相：甲醇-水，甲醇:水＝18:82。

檢測結(jié)果，如圖1-圖3所示：

在供試品色譜圖中，與苦杏仁苷對照品色譜圖主峰相應(yīng)保留時間位置處有對應(yīng)峰，且與前一峰的分離度良好，陰性樣品色譜圖在相同的保留時間處無峰，即陰性無干擾。表明此色譜條件專屬性好。

實施例2

本實施例是實施例1的對照實施例，本實施例中流動相的組成比例不同，具體檢測過程如下：

分別甲醇:水＝20:80的比例作為流動相，采用與實施例1相同的檢測條件對供試品溶液進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果如4所示。并且同時采用了甲醇:水＝14:86作為流動相進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果為：供試品色譜圖中，苦杏仁苷與前一峰的分離度R＝1.48＜1.50，不滿足HPLC基本的分離要求。

實施例3

本實施例對實施例1中的檢測方法的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性以及穩(wěn)定性進(jìn)行檢測，檢測方法和結(jié)果如下：

線性關(guān)系考察

分別精密吸取苦杏仁苷對照品溶液6、8、10、12、14μL注入液相色譜儀中，記錄苦杏仁苷峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、對照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y＝106.27X+213.45，r＝0.9999(n＝5)。結(jié)果表明苦杏仁苷的進(jìn)樣量在0.558～1.302μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗

取苦杏仁苷對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰峰面積，苦杏仁苷的色譜峰峰面積的RSD為0.44％。結(jié)果表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗

取同一批次益母生化合劑5mL，6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，記錄苦杏仁苷峰面積，結(jié)果苦杏仁苷峰面積的RSD為0.51％。表明本方法的重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗

取益母生化合劑5mL，制備供試品溶液。分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣分析，記錄苦杏仁苷峰面積，計算峰面積的RSD為2.16％。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

同時，本實施例還對加樣回收率進(jìn)行測定，測定方法為：精密量取益母生化合劑2.5mL，共6份，于25mL容量瓶中，各精密量取適量苦杏仁苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣，測定苦杏仁苷含量，計算回收率。測定結(jié)果如表1所示。

表1

通過上述檢測結(jié)果可知：本發(fā)明優(yōu)選方案的穩(wěn)定性、重復(fù)性均非常優(yōu)異，而且加樣回收率的RSD值達(dá)到2.96，效果非常顯著。

以上所述的具體實施方式，對本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實施方式而已，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。