本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

藥物經(jīng)過(guò)代謝后一般轉(zhuǎn)化成高極性、低毒性的產(chǎn)物以排除體外，但也有部分藥物在代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一類易于發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的中間體，這類物質(zhì)易于與生物大分子蛋白和核酸等物質(zhì)共價(jià)結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟損傷和機(jī)體過(guò)敏等藥物不良反應(yīng)。對(duì)于此類具有高反應(yīng)性、低穩(wěn)定性以及低含量特點(diǎn)的藥物反應(yīng)性代謝物，通常采用捕獲試劑與之生成的穩(wěn)定加合物，再進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。目前文獻(xiàn)報(bào)道的是以谷胱甘肽及其類似物為衍生試劑對(duì)藥物反應(yīng)性代謝物進(jìn)行捕獲，再經(jīng)質(zhì)譜法檢測(cè)與鑒別谷胱甘肽與藥物反應(yīng)性代謝物的加合物的結(jié)構(gòu)。

谷胱甘肽作為目前使用最廣泛的藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針，谷胱甘肽由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成，且以谷氨酸的γ-羧基與半胱氨酸的α-氨基脫水縮合而成。谷胱甘肽探針最大的缺陷是對(duì)于藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)的捕獲范圍窄，不能對(duì)硬性反應(yīng)性代謝物進(jìn)行捕獲，因而無(wú)法獲得藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的全面信息。因此有必要提供一種擴(kuò)大捕獲范圍，既能捕獲硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子又能捕獲軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子的探針，以適用于新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種擴(kuò)大捕獲范圍、既能捕獲硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子又能捕獲軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子的藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針及其應(yīng)用。

一種藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針，所述藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針為3～6個(gè)常見氨基酸組成的寡肽，所述寡肽包括至少一個(gè)半胱氨酸和至少一個(gè)賴氨酸。

本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，采用上述氨基酸形成的寡肽作為藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針，其不僅能捕獲硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子，而且還能捕獲軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子，如此擴(kuò)大了探針的捕獲范圍，進(jìn)而能獲得藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的全面信息，特別適用于藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽為L(zhǎng)構(gòu)型。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽中位于端部的氨基酸通過(guò)α羧基與相鄰的氨基酸的α氨基形成肽鍵。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽還包括至少一個(gè)另一氨基酸，所述另一氨基酸為除半胱氨酸、賴氨酸、丙氨酸和異亮氨酸之外的任一種常見氨基酸。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述半胱氨酸的α羧基與所述賴氨酸的α氨基形成肽鍵。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述賴氨酸位于所述寡肽的端部。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽選自CEK、CKE、γ-ECKE、D-ECKE、ECKE、D-FCK、ECK、γ-ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽選自CEK、CKE、γ-ECKE、ECKE、ECK、γ-ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述寡肽選自CEK、CKE、ECKE、ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

上述藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針在藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)中的應(yīng)用。如此能獲得藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的全面信息，特別適用于藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1得到的加合物的中性丟失圖；

圖2為實(shí)施例1得到的加合物的產(chǎn)物離子掃描圖，其中a、b分別對(duì)應(yīng)WCK和d8-WCK形成的加合物的產(chǎn)物離子掃描圖；

圖3為實(shí)施例1得到的加合物的結(jié)構(gòu)圖；

圖4為實(shí)施例2得到的加合物Ⅰ和加合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)圖；

圖5為實(shí)施例2得到的加合物Ⅰ的中性丟失圖；

圖6為實(shí)施例2得到的加合物Ⅰ的產(chǎn)物離子掃描圖，其中a、b分別對(duì)應(yīng)WCK和d8-WCK形成的加合物Ⅰ的產(chǎn)物離子掃描圖；

圖7為實(shí)施例2得到的加合物Ⅱ的中性丟失圖；

圖8為實(shí)施例2得到的加合物Ⅱ的產(chǎn)物離子掃描圖，其中a、b分別對(duì)應(yīng)WCK和d8-WCK形成的加合物Ⅱ的產(chǎn)物離子掃描圖；

圖9為實(shí)施例3得到的加合物的中性丟失圖，其中A、B分別對(duì)應(yīng)對(duì)乙酰氨基酚和甲滅酸形成的加合物的中性丟失圖；

圖10為實(shí)施例4得到的加合物的中性丟失圖，其中C、D分別對(duì)應(yīng)雌二醇和呋喃形成的加合物的中性丟失圖。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹全面。

除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“和/或”包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。

本發(fā)明提供了一實(shí)施例的藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針。

所述藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針為3～6個(gè)常見氨基酸組成的寡肽。所述寡肽包括至少一個(gè)半胱氨酸和至少一個(gè)賴氨酸?？梢岳斫?，所述常見氨基酸選自20種常見的氨基酸。

具體的，寡肽屬于多肽的一個(gè)分類，寡肽的分子量一般在1000道爾頓以下，也稱作小肽、低聚肽或小分子活性肽。可以理解，廣義的探針是指能與特定的靶分子發(fā)生特異性相互作用的分子，并可以被特殊的方法所檢測(cè)?？乖?抗體、生物素-親合素、配體-受體的相互作用都可以看作是探針與靶分子的相互作用。本發(fā)明所述的探針即為能與特定的藥物反應(yīng)性代謝物結(jié)合從而能被質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)而能適用于新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，采用上述氨基酸形成的寡肽作為藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針，其不僅能捕獲硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子，而且還能捕獲軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子，如此擴(kuò)大了探針的捕獲范圍，進(jìn)而能獲得藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的全面信息，特別適用于藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

藥物反應(yīng)性代謝物因化學(xué)性質(zhì)的不同分為親電子物質(zhì)和自由基兩類，而藥物反應(yīng)性代謝物產(chǎn)物主要為親電子物質(zhì)。親電子物質(zhì)根據(jù)親電性強(qiáng)弱又可以分為兩類：親電性較強(qiáng)的硬性藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物和親電性較弱的軟性藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物。

其中，硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子包括噻嗯基呋喃和呋喃等藥物底物代謝產(chǎn)生的反應(yīng)性代謝物分子；軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子包括氯氮平、對(duì)乙酰氨基酚、甲滅酸和雌二醇等藥物底物代謝產(chǎn)生的反應(yīng)性代謝物分子。

目前常見的氨基酸的縮寫如下。谷氨酸的縮寫：E(Glu)、苯丙氨酸的縮寫：F(Phe)、天冬氨酸的縮寫：D(Asp)、纈氨酸的縮寫：V(Val)、絲氨酸的縮寫：S(Ser)、脯氨酸的縮寫：P(Pro)、蛋氨酸的縮寫：M(Met)、蘇氨酸的縮寫：T(Thr)、酪氨酸的縮寫：Y(Tyr)、精氨酸的縮寫：R(Arg)、色氨酸的縮寫：W(Trp)、天冬酰胺的縮寫：N(Asn)、谷氨酰胺的縮寫：Q(Gln)、甘氨酸的縮寫：G(Gly)、組氨酸的縮寫：H(His)、亮氨酸的縮寫：L(Leu)、丙氨酸的縮寫：A(Ala)、異亮氨酸的縮寫：I(Ile)、賴氨酸的縮寫：K(Lys)、半胱氨酸的縮寫：C(Cys)。

值得一提的是，氨基酸中氨基直接與中心碳原子(又叫α碳原子)相連的叫α-氨基；與中心碳原子的相鄰碳原子(又叫β碳原子)相連時(shí)，叫β-氨基；與中心碳原子相隔一個(gè)碳的碳原子(又叫γ碳原子)相連時(shí)，叫γ-氨基；羧基也采用同樣方法識(shí)別。通常未特殊注明的情況下，多肽合成肽鍵一般采用α連接位點(diǎn)(即第一個(gè)氨基酸的α-羧基與第二個(gè)氨基酸的α-氨基脫水縮合成肽鍵)。且采用氨基酸的縮寫表示其結(jié)構(gòu)時(shí)，從左至右，第一個(gè)氨基酸的羧基與第二個(gè)氨基酸的氨基脫水縮合合成肽鍵，第二氨基酸的羧基與第三氨基酸的氨基脫水縮合合成肽鍵，依此類推。

優(yōu)選的，寡肽包括半胱氨酸、賴氨酸和至少一個(gè)另一氨基酸，另一氨基酸為除半胱氨酸、賴氨酸、丙氨酸和異亮氨酸之外的任一種常見氨基酸。

優(yōu)選的，所述寡肽選自CEK、CKE、γ-ECKE、D-ECKE、ECKE、D-FCK、ECK、γ-ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。其中，以D-ECKE和DCK為例。D-ECKE表示D構(gòu)型的ECKE寡肽，前綴“D-”表示是D構(gòu)型，而不是天冬氨酸，且該ECKE寡肽中所有的常見氨基酸均為D構(gòu)型；其他不含“D-”的寡肽的構(gòu)型均為L(zhǎng)構(gòu)型，且其中所有的常見氨基酸均為L(zhǎng)構(gòu)型。而DCK中的D表示天冬氨酸。

以CEK和γ-ECKE為例。CEK寡肽中的氨基酸依次為半胱氨酸、谷氨酸和賴氨酸，且半胱氨酸的α-羧基與谷氨酸的α-氨基脫水縮合成肽鍵，谷氨酸的α-羧基和賴氨酸的α-氨基脫水縮合成肽鍵；γ-ECKE寡肽中的氨基酸依次為谷氨酸、半胱氨酸、賴氨酸和谷氨酸，且谷氨酸的γ-羧基和半胱氨酸α-氨基脫水縮合成肽鍵，半胱氨酸的α-羧基與賴氨酸的α-氨基脫水縮合成肽鍵，賴氨酸α-羧基和谷氨酸α-氨基脫水縮合成肽鍵。

優(yōu)選的，寡肽為L(zhǎng)構(gòu)型，即該寡肽中所有的常見氨基酸均為L(zhǎng)構(gòu)型。這是由于寡肽探針與目標(biāo)物結(jié)合后，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)之前要進(jìn)行過(guò)膜處理，研究發(fā)現(xiàn)D構(gòu)型寡肽與目標(biāo)物結(jié)合后在過(guò)膜處理時(shí)損失比L構(gòu)型多，且D構(gòu)型寡肽的價(jià)格比自然態(tài)L構(gòu)型昂貴，因此寡肽優(yōu)選為L(zhǎng)構(gòu)型。而在質(zhì)譜響應(yīng)上，D構(gòu)型寡肽略高于L構(gòu)型寡肽。優(yōu)選的，寡肽選自CEK、CKE、γ-ECKE、ECKE、ECK、γ-ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

優(yōu)選的，寡肽中位于端部的氨基酸通過(guò)α羧基與相鄰的氨基酸的α氨基形成肽鍵。優(yōu)選的，寡肽選自CEK、CKE、ECKE、ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

優(yōu)選的，所述寡肽中半胱氨酸的α羧基與賴氨酸的α氨基形成肽鍵。也就是說(shuō)半胱氨酸和賴氨酸相鄰，即所述寡肽的縮寫中含有CK。由于半胱氨酸中含有巰基，含硫的巰基比含氮的氨基親核性弱，因此巰基能與軟性藥物反應(yīng)性代謝物結(jié)合；而賴氨酸通過(guò)α氨基與半胱氨酸結(jié)合，因此賴氨酸的另一氨基不會(huì)對(duì)藥物反應(yīng)性代謝物產(chǎn)生空間位阻；所述寡肽中的巰基和氨基均能起作用，從而對(duì)硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子和軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子均有較好的捕獲作用。優(yōu)選的，所述寡肽選自CKE、ECKE、ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。

優(yōu)選的，賴氨酸位于寡肽的端部。優(yōu)選的，所述寡肽選自ECK、NCK、DCK、GCK、MCK、FCK、PCK、SCK、VCK、LCK、QCK、RCK、TCK、WCK、HCK和YCK中的至少一種。優(yōu)選的，半胱氨酸位于寡肽的端部。具體的，寡肽為CKE。

優(yōu)選的，寡肽由3～4個(gè)常見氨基酸組成。更優(yōu)選的，寡肽由3個(gè)常見氨基酸組成。更優(yōu)選的，所述寡肽為WCK。具體的，WCK寡肽的結(jié)構(gòu)式如下

WCK寡肽不僅能捕獲硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子和軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子，而且其捕獲效率高，捕獲結(jié)合形成的化合物穩(wěn)定性高，進(jìn)而通過(guò)質(zhì)譜可分析該化合物的結(jié)構(gòu)，從而得知藥物代謝形成的硬性藥物反應(yīng)性代謝物分子和軟性藥物反應(yīng)性代謝物分子的全面信息，進(jìn)而用于反應(yīng)性分子的結(jié)構(gòu)鑒定、新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

本發(fā)明還提供了一實(shí)施例的藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針在藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)中的應(yīng)用。如此能獲得藥物反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的全面信息，特別適用于藥物反應(yīng)性代謝物分子的結(jié)構(gòu)鑒定、新藥研發(fā)早期的藥物代謝的高通量篩選、藥物毒副潛性的評(píng)估以及藥物毒副不良反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的研究。

具體的，藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針在藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)中的應(yīng)用包括以下步驟。

步驟S1：預(yù)處理步驟。用同位素標(biāo)記法標(biāo)記所述寡肽中賴氨酸6個(gè)碳原子為¹³C、2個(gè)氮原子為¹⁵N，得到同位素寡肽探針；將同位素寡肽探針與未標(biāo)記的所述寡肽以質(zhì)量比1：1的比例混合得到預(yù)處理的寡肽探針。如此通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)，分子量相差8Da離子對(duì)的同時(shí)出現(xiàn)即能有效排除假陽(yáng)性的干擾，進(jìn)而可提高質(zhì)譜探針的抗干擾性和準(zhǔn)確性。

步驟S2：然后將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的寡肽探針與藥物底物及能對(duì)藥物底物產(chǎn)生反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的酶反應(yīng)孵育液混合后經(jīng)LC-MSMS檢測(cè)，通過(guò)中性丟失掃描和產(chǎn)物離子掃描，根據(jù)質(zhì)譜結(jié)果判定經(jīng)過(guò)預(yù)處理的寡肽探針對(duì)各反應(yīng)性代謝產(chǎn)物是否捕獲成功。

優(yōu)選的，所述藥物底物為氯氮平、對(duì)乙酰氨基酚、甲滅酸、雌二醇、噻嗯基呋喃和呋喃這六種中的至少一種。

以下為具體實(shí)施例。

實(shí)施例1～4的藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針為WCK寡肽。選取氯氮平、對(duì)乙酰氨基酚、雌二醇、甲滅酸、噻嗯基呋、喃呋喃這六種會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)性代謝物的代表性藥物作為研究對(duì)象，采用人肝微粒體體外藥物代謝反應(yīng)體系，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，考察藥物反應(yīng)性代謝物質(zhì)譜檢測(cè)探針WCK在實(shí)際應(yīng)用中捕獲反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的實(shí)用性和高效性。

因?qū)嶋H樣品中基質(zhì)較為復(fù)雜，采用中性丟失掃描模式可能存在假陽(yáng)性的干擾，為更好地排除這一干擾，用同位素標(biāo)記法設(shè)計(jì)合成同位素寡肽探針d8-WCK。具體的，同位素標(biāo)記法標(biāo)記寡肽中賴氨酸6個(gè)碳原子為¹³C、2個(gè)氮原子為¹⁵N，得到同位素寡肽探針d8-WCK。因此寡肽WCK與同位素寡肽探針d8-WCK的分子量相差8。并使寡肽WCK與同位素寡肽探針d8-WCK以質(zhì)量比1：1的比例混合得到WCK(d8-WCK)，捕獲反應(yīng)性代謝物，離子豐度相當(dāng)。分子量相差8Da離子對(duì)的同時(shí)出現(xiàn)能有效排除假陽(yáng)性的干擾。

具體的，將WCK(d8-WCK)與藥物底物及能對(duì)藥物底物產(chǎn)生反應(yīng)性代謝產(chǎn)物的酶反應(yīng)孵育液混合后經(jīng)LC-MSMS檢測(cè)，通過(guò)中性丟失掃描和產(chǎn)物離子掃描，判定WCK(d8-WCK)對(duì)各反應(yīng)性代謝產(chǎn)物是否捕獲成功。

實(shí)施例1

將WCK(d8-WCK)與氯氮平、HLM(人肝微粒體)、催化劑等混合作用，作為人肝微粒體體外藥物代謝反應(yīng)體系，經(jīng)過(guò)LC-MSMS(液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用)檢測(cè)，通過(guò)中性丟失掃描和產(chǎn)物離子掃描得到中性丟失圖和產(chǎn)物離子掃描圖，分別如圖1和圖2所示。

氯氮平在酶反應(yīng)過(guò)程中脫氫產(chǎn)生反應(yīng)性代謝產(chǎn)物，其迅速與WCK(d8-WCK)中的巰基結(jié)合形成幾乎等量的分子量分別為759和767的加合物，如圖3所示。在電噴霧正離子模式的中性丟失掃描下，能丟失分子量為186Da的中性基團(tuán)而被檢測(cè)，分子量相差8Da的母離子同時(shí)出現(xiàn)，較好的排除了復(fù)雜生物基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾，如圖2所示。

確定母離子后，分別對(duì)759和767的加合物進(jìn)行了產(chǎn)物離子掃描，分別得到圖2a、圖2b。如圖2和圖3所示，該物質(zhì)從如圖所示的第一個(gè)酰胺鍵1處斷裂分別產(chǎn)生574m/z和582m/z的子離子，從第二個(gè)酰胺鍵斷裂均產(chǎn)生614m/z的子離子，從第3、4處斷裂均產(chǎn)生相同的383m/z和357m/z的子離子，進(jìn)一步確證了氯氮平在CYP450酶作用下會(huì)脫氫產(chǎn)生反應(yīng)性代謝產(chǎn)物。由此說(shuō)明，寡肽探針WCK能成功運(yùn)用于實(shí)際樣品中對(duì)軟性藥物反應(yīng)性代謝物的捕獲，且具有較好的質(zhì)譜響應(yīng)。

實(shí)施例2

將WCK(d8-WCK)與噻嗯基呋喃及酶反應(yīng)孵育液混合作用，經(jīng)過(guò)LC-MSMS檢測(cè)，噻嗯基呋喃在代謝過(guò)程中產(chǎn)生了兩種反應(yīng)性代謝物。其中一種與寡肽探針中巰基和氨基共同結(jié)合產(chǎn)生穩(wěn)定加合物Ⅰ，另一種因其強(qiáng)親電性則與強(qiáng)親核性基團(tuán)氨基結(jié)合生成穩(wěn)定加合物Ⅱ，如圖4所示。如圖4加合物Ⅰ對(duì)應(yīng)的中性丟失圖和產(chǎn)物離子掃描圖，分別如圖5和圖6所示。如圖4加合物Ⅱ?qū)?yīng)的中性丟失圖和產(chǎn)物離子掃描圖，分別如圖7和圖8所示。由此說(shuō)明，寡肽探針WCK能成功運(yùn)用于實(shí)際樣品中對(duì)硬性藥物反應(yīng)性代謝物的捕獲，且具有較好的質(zhì)譜響應(yīng)。

實(shí)施例3

類似的，將WCK(d8-WCK)分別與對(duì)乙酰氨基酚和甲滅酸作用，經(jīng)過(guò)LC-MSMS檢測(cè)，分別得到各加合物的中性丟失圖，分別如圖9中A和B所示。由此說(shuō)明，寡肽探針WCK能成功運(yùn)用于實(shí)際樣品中對(duì)反應(yīng)性代謝物的捕獲，且具有較好的質(zhì)譜響應(yīng)。

實(shí)施例4

類似的，將WCK(d8-WCK)分別與雌二醇和呋喃作用，經(jīng)過(guò)LC-MSMS檢測(cè)，分別得到各加合物的中性丟失圖，分別如圖10中C和D所示。由此說(shuō)明，寡肽探針WCK能成功運(yùn)用于實(shí)際樣品中對(duì)反應(yīng)性代謝物的捕獲，且具有較好的質(zhì)譜響應(yīng)。

實(shí)施例5

分別將CEK寡肽、γ-ECK寡肽、D-ECKE寡肽探針采用實(shí)施例1～4相似的方法，選取氯氮平、對(duì)乙酰氨基酚、雌二醇、甲滅酸、噻嗯基呋、喃呋喃這六種會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)性代謝物的代表性藥物作為研究對(duì)象，均通過(guò)質(zhì)譜說(shuō)明能成功運(yùn)用于實(shí)際樣品中對(duì)硬性藥物反應(yīng)性代謝物和軟性藥物反應(yīng)性代謝物的捕獲，且具有較好的質(zhì)譜響應(yīng)。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。