本發(fā)明涉及血清分子標(biāo)志物組合作為肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用，采用了Luminex蛋白芯片診斷技術(shù)，檢測(cè)肺癌患者血清的多種蛋白分子標(biāo)志物的含量，通過多種蛋白分子標(biāo)志物的配合比較分析，可用于肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)，屬于免疫診斷領(lǐng)域。

技術(shù)背景

癌癥是導(dǎo)致死亡的主要原因之一，隨著全球范圍內(nèi)的人口增長(zhǎng)和老齡化，生活方式的轉(zhuǎn)變，環(huán)境氣候的影響，癌癥的負(fù)擔(dān)會(huì)持續(xù)增加，癌癥問題一直是全球面臨的一項(xiàng)重大問題。肺癌(Lung cancer，LC)是全球常見的惡性腫瘤之一，臨床上一般分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，NSCLC約占所有肺癌的80％，SCLC約占所有肺癌的20％。相對(duì)于女性而言，肺癌在男性中發(fā)病幾率更加高，且患者5年的存活率約為15％。

盡管在早期檢測(cè)和治療方法上都有了提高和進(jìn)步，但癌癥治療所表現(xiàn)出的耐藥性使得肺癌患者的預(yù)后診斷仍然較差。利用生物標(biāo)記物進(jìn)行早期診斷可以對(duì)治療方案的選擇進(jìn)行指導(dǎo)，并能對(duì)治療結(jié)果進(jìn)行早期評(píng)估從而為肺癌患者提供更好的幫助。

在治療開始后，按周期對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)估，對(duì)于肺癌患者來說有著重要的意義。一方面，終止失敗的治療方案可以讓患者去考慮選擇其他的治療方案。另一方面，這能避免由無響應(yīng)的治療所造成的不必要的副作用。利用生物標(biāo)記物在治療前和治療后的監(jiān)測(cè)可以達(dá)到這一目的，并且在多種癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)這一方法也已在應(yīng)用之中。

目前多種癌癥抗原被廣泛了解和研究，包括癌胚抗原(CEA)，細(xì)胞角蛋白抗原19片段(CYFRA21-1)，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)，其均被發(fā)現(xiàn)在一些肺癌患者體內(nèi)他們的含量都高于正常值。而其他很多蛋白分子標(biāo)志物也在不斷地尋找中，不斷的為人們所認(rèn)知。

一些與非特異性的急性炎癥有關(guān)的蛋白標(biāo)志物，如血清淀粉樣蛋白(SAA)，C反應(yīng)蛋白(CRP)和α1酸性糖蛋白(AGP)也與惡性疾病相關(guān)，他們都是當(dāng)受到一些細(xì)胞因子如IL-1,IL-6和TNF-α的刺激時(shí)被分泌。炎癥反應(yīng)也是癌癥的主要特點(diǎn)之一，慢性的炎癥反應(yīng)會(huì)增加腫瘤惡化的風(fēng)險(xiǎn)。腫瘤的生長(zhǎng)會(huì)誘導(dǎo)炎癥微環(huán)境的形成，同時(shí)癌細(xì)胞會(huì)加大炎癥蛋白的產(chǎn)生，因此，炎癥反應(yīng)相關(guān)的蛋白或許可作為潛在可用的生物標(biāo)志物去預(yù)測(cè)各種癌癥的侵略性和嚴(yán)重性，幫助癌癥患者們?nèi)プR(shí)別腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。多種癌癥患者血清中SAA和CRP的水平都高于正常人，包括肺癌患者。然而其它許多疾病的發(fā)生也會(huì)導(dǎo)致這幾種炎癥反應(yīng)蛋白水平的升高，因此其獨(dú)立使用時(shí)不可以用于肺癌的診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)。

骨鈣素(OPN)是一種多功能的鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，它有參與很多生物進(jìn)程，例如炎癥反應(yīng)、血管生成、腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，多種癌癥患者中血清、血漿中的OPN水平都高于正常值，包括肺癌，血清中高水平的OPN與肺癌患者的低存活率是相關(guān)的。但是OPN本身不足以獨(dú)立應(yīng)用于臨床。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供血清分子標(biāo)志物組合作為肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用，采用了Luminex蛋白芯片診斷技術(shù)，檢測(cè)肺癌患者血清的多種蛋白分子標(biāo)志物的含量，通過多種蛋白分子標(biāo)志物的配合比較分析，可用于肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：血清分子標(biāo)志物組合作為肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于：血清蛋白標(biāo)志物組合包括骨鈣素(OPN)、血清淀粉樣蛋白(SAA)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白抗原19片段(CYFRA21-1)、巨噬細(xì)胞移動(dòng)游走抑制因子(MIF)、α1酸性糖蛋白(AGP)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、E選擇素(E-selectin)、生長(zhǎng)相關(guān)性癌基因(GRO)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。

血清蛋白分子標(biāo)志物組合的含量測(cè)定方法，其特征在于：采用Luminex蛋白芯片。

八個(gè)血清蛋白分子標(biāo)志物(OPN，SAA，CRP，CYFRA21.1，CEA，NSE，AGP和HGF)的組合作為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)診斷和療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用。

OPN對(duì)非小細(xì)胞肺癌有較高的診斷價(jià)值，AUC＝0.92；CEA、CYFRA21.1的AUC值分別為0.81和0.77，SAA和CRP的AUC約為0.83。

血清分子標(biāo)志物組合作為非小細(xì)胞肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用，所述的血清分子標(biāo)志物組合由OPN、CEA和另一蛋白組成，另一蛋白為CRP，SAA，CYFAR21.1或NSE。

血清分子標(biāo)志物作為鉑類藥物化療療效監(jiān)測(cè)標(biāo)志物的應(yīng)用，所述的血清分子標(biāo)志物為CYFRA21.1、CRP、SAA、NSE、OPN、MIF的一種或幾種。

本發(fā)明確立了十一種候選血清蛋白(OPN,SAA,CRP,CEA,CYFRA21.1,MIF,AGP,HGF,E-selectin,GRO和NSE)，收集對(duì)218例NSCLC患者，34例SCLC患者和171例正常對(duì)照組的血清，采用了Luminex蛋白芯片診斷技術(shù)獲得十一種血清蛋白的濃度，通過數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)分析，得到相關(guān)的實(shí)驗(yàn)結(jié)論，證實(shí)了其在肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明確立的十一種候選血清蛋白為骨鈣素(OPN)、血清淀粉樣蛋白(SAA)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白抗原19片段(CYFRA21-1)、巨噬細(xì)胞移動(dòng)游走抑制因子(MIF)、α1酸性糖蛋白(AGP)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、E選擇素(E-selectin)、生長(zhǎng)相關(guān)性癌基因(GRO)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)樣本為218例NSCLC患者，34例SCLC患者和171例正常對(duì)照組的血清。其中肺癌患者的選擇標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)是病理上確診的患者(所有患者都是通過對(duì)支氣管鏡檢，活組織切片檢查或手術(shù)得到的材料進(jìn)行顯微鏡檢查而確認(rèn)的)；(2)患者沒有其他的腫瘤病史。血樣是在患者診斷過程中，且尚未接受任何治療(手術(shù)或化療)時(shí)采集的。此外，每月采集一次接受了手術(shù)和化療的患者血樣。樣本在4℃下3000rpm離心10分鐘，隨后收集血清至于-80℃下凍存至使用。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)方法為L(zhǎng)uminex蛋白芯片診斷技術(shù)。其實(shí)驗(yàn)步驟為：

1確定試劑：試劑盒為單人單孔，在核對(duì)試劑量和標(biāo)本量無誤后開始操作。

2樣本處理：樣本為室溫下的血清樣本。

3標(biāo)準(zhǔn)品處理(在冰上操作)：取測(cè)試緩沖液，按試劑盒標(biāo)注的體積加入標(biāo)準(zhǔn)品管中，充分溶解待用；用去離子水對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品按試劑盒標(biāo)注的倍數(shù)進(jìn)行稀釋，共做6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品樣品待用。

4陰性質(zhì)控品處理：以去離子水為陰性質(zhì)控品。

5陽性質(zhì)控品處理(在冰上操作)：取測(cè)試緩沖液，按試劑盒標(biāo)注的體積加入QC1和QC2管中，充分溶解，待用。

6加樣操作：

(1)將試劑盒提供的塑料珠與緩沖液混合均勻，向標(biāo)本檢測(cè)板中加入塑料珠混懸液。

(2)向標(biāo)本檢測(cè)板中加入標(biāo)準(zhǔn)品、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品和待測(cè)標(biāo)本。

(3)向標(biāo)本檢測(cè)板中加入檢測(cè)緩沖液。

(4)在室溫下避光振搖標(biāo)本檢測(cè)板2小時(shí)或者16小時(shí)。

(5)用洗液洗板兩次。

(6)向標(biāo)本檢測(cè)板中加入檢測(cè)抗體。

(7)在室溫下振搖標(biāo)本檢測(cè)板1小時(shí)。

(8)向標(biāo)本檢測(cè)板中加入。

(9)在室溫下振搖標(biāo)本檢測(cè)板半小時(shí)。

(10)用洗液洗板兩次。

(11)向標(biāo)本檢測(cè)板中加入洗液。

(12)在室溫下振搖5分鐘。

7蛋白質(zhì)全定量檢測(cè)(Luminex法)：

(1)開機(jī)并預(yù)熱半小時(shí)。

(2)運(yùn)行開機(jī)程序。

(3)按照檢測(cè)試劑盒的指定的參數(shù)設(shè)定儀器檢測(cè)方法并保存。

(4)將標(biāo)本檢測(cè)板放入檢測(cè)池，運(yùn)行檢測(cè)程序，檢測(cè)結(jié)果將自動(dòng)生成文件保存。

(5)待檢測(cè)結(jié)束后運(yùn)行關(guān)機(jī)程序。

8結(jié)果分析：將檢測(cè)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)，用軟件Xponent4的5參數(shù)法進(jìn)行分析。

本發(fā)明的數(shù)據(jù)處理方法：蛋白濃度在統(tǒng)計(jì)分析前轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)以獲取正態(tài)分布。兩組間的差異通過非配對(duì)樣本t檢驗(yàn)或Mann-Whitney驗(yàn)檢測(cè)得到。三組以上數(shù)據(jù)的比較是先通過方差檢驗(yàn)分析，再接著進(jìn)行Bonferroni post hoc檢驗(yàn)分析。統(tǒng)計(jì)的顯著性差異設(shè)定為P<0.05。利用含有年齡和性別作為共變量的邏輯回歸，對(duì)病情狀況和血清蛋白水平間的關(guān)系進(jìn)行分析。利用Pearson相關(guān)分析對(duì)數(shù)據(jù)的相關(guān)性進(jìn)行分析。利用分層聚類分析法和熱圖實(shí)現(xiàn)相關(guān)矩陣的聚集和可視化。通過受試者工作特征(ROC)曲線和曲線下面積(AUC)的計(jì)算可以評(píng)估單個(gè)蛋白或組合的診斷能力。所有的統(tǒng)計(jì)分析都是在R語言和統(tǒng)計(jì)計(jì)算環(huán)境下完成的(R version 2.15.1；R Foundation for Statistical Computing)。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：檢測(cè)肺癌患者血清的多種蛋白分子標(biāo)志物的含量，通過多種蛋白分子標(biāo)志物的配合比較分析，可用于肺癌診斷和療效監(jiān)測(cè)。

附圖說明：

圖1正常的(N)，小細(xì)胞癌(SC)，非小細(xì)胞的(NSC)肺癌患者的治療前的血清樣本中血清蛋白的測(cè)定；

圖2 NSCLC和正常對(duì)照組間受試者工作特征(ROC)曲線和曲線下面積(AUC)的比較；

圖3 NSCLC組治療后、治療前蛋白水平(Log 2)的線條圖；

圖4每個(gè)NSCLC患者在治療后、治療前的蛋白水平(Log 2)線條圖；

圖5三個(gè)不同的治療組中治療應(yīng)答指數(shù)(TRI)的點(diǎn)陣圖(P＝培美曲塞，T＝紫杉烷，G＝吉西他濱)；

圖6治療應(yīng)答指數(shù)(TRI)與蛋白水平(Log 2)相關(guān)性的點(diǎn)陣圖；

圖7有遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的NSCLC病人蛋白表達(dá)間的差異示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明。

十一種候選血清蛋白為骨鈣素(OPN)、血清淀粉樣蛋白(SAA)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白抗原19片段(CYFRA21-1)、巨噬細(xì)胞移動(dòng)游走抑制因子(MIF)、α1酸性糖蛋白(AGP)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、E選擇素(E-selectin)、生長(zhǎng)相關(guān)性癌基因(GRO)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。八個(gè)血清蛋白分子標(biāo)志物(OPN，SAA，CRP，CYFRA21.1，CEA，NSE，AGP和HGF)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)病人中有顯著的升高。從單個(gè)蛋白水平上來判斷，OPN對(duì)NSCLC來說有較高的診斷價(jià)值(AUC＝0.92)，并且CEA、CYFRA21.1、SAA和CRP也具有較好的AUC值，CEA、CYFRA21.1的AUC值分別為0.81和0.77，兩個(gè)急性期蛋白(SAA和CRP)的AUC約為0.83。由OPN、CEA和另一蛋白(CRP，SAA，CYFAR21.1或NSE)組成的三蛋白檢測(cè)組合對(duì)NSCLC有極好的診斷潛力。肺癌患者在接受治療后CYFRA21.1,NSE,CRP和SAA蛋白水平降低，可作為肺癌治療后療效評(píng)價(jià)的指標(biāo)。在鉑類藥物化療后，CYFRA21.1，CRP，SAA和NSE這四種蛋白的水平有顯著的減少，同時(shí)OPN，MIF和NSE這三種蛋白的水平也有一定程度的降低，這幾種血清蛋白標(biāo)志物可用于指導(dǎo)鉑類藥物化療效果的評(píng)價(jià)。對(duì)3-5種血清蛋白分子標(biāo)志物的治療反應(yīng)指數(shù)(TRI)的計(jì)算認(rèn)為：約25％的NSCLC患者對(duì)于治療的反應(yīng)良好，并且TRI與治療前血清蛋白分子標(biāo)志物水平具有顯著相關(guān)性，因此血清蛋白分子標(biāo)志物的治療反應(yīng)指數(shù)(TRI)可用作為肺癌患者的療效評(píng)價(jià)。雖然NSCLC患者的治療應(yīng)答是可以被有效的測(cè)得的，但不同病人可能需要選擇個(gè)性化的生物標(biāo)記物來進(jìn)行監(jiān)督。

在本研究中，我們對(duì)218例NSCLC患者，34例SCLC患者和171例正常對(duì)照組的血清樣本中多種蛋白進(jìn)行了定量分析。肺癌患者的選擇標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)是病理上確診的患者(所有患者都是通過對(duì)支氣管鏡檢，活組織切片檢查或手術(shù)得到的材料進(jìn)行顯微鏡檢查而確認(rèn)的)；(2)患者沒有其他的腫瘤病史。血樣是在患者診斷過程中，且尚未接受任何治療(手術(shù)或化療)時(shí)采集的。此外，每月采集一次接受了手術(shù)和化療的患者血樣。樣本在4℃下3000rpm離心10分鐘，隨后收集血清至于-80℃下凍存至使用。

(一)肺癌患者血清中血清蛋白分子標(biāo)志物的表達(dá)情況

對(duì)218例NSCLC患者，34例SCLC患者和171例正常對(duì)照組的血清樣本中的11個(gè)候選蛋白(OPN,SAA,CRP,CEA,CYFRA21.1,MIF,AGP,HGF,E-selectin,GRO和NSE)進(jìn)行測(cè)量。

如圖1A所示。與對(duì)照組相比，在NSCLC和SCLC患者組中，有5種蛋白(OPN,SAA,CRP,CEA和CYFRA21.1)有顯著地升高。NSCLC和SCLC患者的平均OPN水平值比對(duì)照組高約4倍(p＜10^-59和p＜10^-11)。NSCLC和SCLC患者的平均SAA水平值比對(duì)照組高出5倍多(p＜10^-36和p＜10^-6)，平均的CRP水平值也高出7倍多(p＜10^-37和p＜10^-5)。NSCLC和SCLC患者組的平均CEA水平值各比對(duì)照組分別高出4.9倍和2.9倍(p＜10^-29和p＜0.001)。NSCLC和SCLC患者組的平均CYFR21.1水平值也各比對(duì)照組分別高出6.1倍和4.8倍(p＜10^-18和p＜0.001)。然而，MIF,AGP,HGF,sE-selectin和GRO在NSCLC或SCLC患者組中，與對(duì)照組相比，并未有顯著的不同或只有少量差異。SCLC患者組和NSCLC患者組之間的唯一的最主要的差別是NSE，在SCLC患者組中NSE的水平值比對(duì)照組高出8.7倍(p＝0.0011)，但NSCLC患者組僅比對(duì)照組高1.6倍(p＝0.000013)。

(二)不同蛋白與肺癌(NSCLC和SCLC)之間的相關(guān)性

混雜變量也許會(huì)導(dǎo)致患者和對(duì)照組之間的差異，為了排除由混雜變量導(dǎo)致的影響，我們用Logistic回歸進(jìn)行分析處理，因變量是蛋白質(zhì)濃度，性別和年齡作為協(xié)變量。

如表1A所示，在調(diào)整過年齡和性別后，這8種蛋白與NSCLC表現(xiàn)出明顯的關(guān)聯(lián)性。這些結(jié)果表明，這些蛋白與NSCLC的關(guān)聯(lián)性是會(huì)受其他的協(xié)變量影響的。

如表1B所示，在年齡和性別調(diào)整后，這8種在NSCLC中表現(xiàn)出顯著變化的蛋白中的5種，也在SCLC中表現(xiàn)出了顯著的差異。此外，NSE在SCLC患者中升高(OR＝2.4,P_adj＝0.01)，但在NSCLC中卻沒有(OR＝1.3，P_adj＝0.08)。

表1:非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌患者血清蛋白的Logistic回歸分析。

A

B

如圖7所示：轉(zhuǎn)移患者組中的CEA明顯高于非轉(zhuǎn)移患者組(FC＝2.1,p<0.004)；而MIF略低于非轉(zhuǎn)移患者組(FC＝0.8,p＝0.1)。除此之外，沒有其他的顯著差異。

(三)不同血清蛋白彼此之間的相關(guān)性

對(duì)三個(gè)不同的組的十一中血清蛋白水平進(jìn)行了分析，并用聚類分析的方法對(duì)不同蛋白的水平彼此之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，確定相關(guān)蛋白組合。

如圖1B中的熱圖所示。在對(duì)照組中只有CRP和SAA相關(guān)聯(lián)。在兩個(gè)肺癌患者組中都有兩個(gè)子集的相關(guān)蛋白。第一個(gè)子集CRP,SAA,AGP,GRO,HGF和OPN，第二個(gè)子集包括了HGF,OPN,CYFR21.1,sE-selectin,MIF和NSE。

(四)血清蛋白對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值

利用ROC曲線的曲線下面積(AUC)對(duì)血清蛋白作為L(zhǎng)C生物標(biāo)記物的潛在效用進(jìn)行評(píng)估。

如圖2A所示，我們對(duì)11種蛋白區(qū)分正常人和NSCLC患者的能力進(jìn)行了評(píng)估。一些蛋白具有優(yōu)秀的AUC值，但并非完美。最好的蛋白是OPN(AUC＝0.919),CRP(AUC＝0.832),SAA(AUC＝0.823)和CEA(AUC＝0.805)。癌癥抗原CYFRA21.1和NSE的AUC值分別是0.77和0.60。

如圖2B所示，我們對(duì)OPN,CEA,CRP,SAA,CYFRA21.1和NSE中的三到四種蛋白組合應(yīng)用，區(qū)分正常人和NSCLC患者的能力進(jìn)行了評(píng)估。三到四種蛋白組合應(yīng)用后對(duì)NSCLC的AUC值有所提升。其中出現(xiàn)了4組三種蛋白組合的AUC值近乎完美(～0.96)。這4組組合都含有OPN和CEA，外加NSE，CYFRA21.1，CRP，SAA這四種蛋白中的一種。

如表2所示，以4個(gè)不同的特異性閾值(90％,95％,99％和100％)表現(xiàn)不同蛋白的靈敏度值。在個(gè)別蛋白之中，OPN的性能最佳，其靈敏度在90％,95％,99％和100％這四個(gè)特異性閾值中達(dá)到了78％,72％,58％和29％。CEA,CRP和SAA的性能雖不如OPN，但也是不錯(cuò)的。在最高的特異性要求為99％和100％時(shí)，4組由三種蛋白(OPN-CEA加CYFRA21.1,NSE,CRP或SAA)組合靈敏度等級(jí)達(dá)到了約70％和60％。

以上均表明：4組由三種蛋白(OPN-CEA加CYFRA21.1,NSE,CRP或SAA)組合具有極佳的診斷潛力。

表2：不同蛋白在不同的特異性閾值(90％,95％,99％and 100％)下表現(xiàn)的靈敏度值

(五)肺癌患者治療后血清蛋白的變化

68位接受鉑類藥物化療的NSCLC患者被考察治療前后的血清樣本血清蛋白的變化。按照治療方案不同分為三組：第一組中的43位患者使用鉑類加培美曲塞(PEM)，第二組中的17位患者接受了鉑類加紫杉醇的治療(TAX)，第三組的8位患者采用鉑類加吉西他濱(GEM)的治療方法。

如圖3所示：為三組的平均比率(每一位患者的每一個(gè)蛋白在治療后和治療前水平的比率都已被計(jì)算出)。數(shù)據(jù)表明在所有三組中有一些蛋白在治療后有所降低。降低的較多的蛋白有CYFRA21.1,NSE,CRP和SAA。然而CEA的平均水平在使用吉西他濱和紫杉醇的組中有所降低，但在培美曲塞組中卻增高。

如圖4所示：表明了這三個(gè)組中每個(gè)病人體內(nèi)蛋白水平的變化。治療后多數(shù)患者同樣也表現(xiàn)出了CYFRA21.1,NSE,CRP和SAA的水平的急劇降低，并且與使用Taxane和PEM治療的患者相比，在用GEM治療的患者中更明顯。

(六)通過蛋白水平對(duì)治療應(yīng)答的評(píng)估

為了評(píng)估血清蛋白的總變化，我們計(jì)算了治療應(yīng)答指數(shù)(TRI)，TRI為多種蛋白在治療前后濃度的比率再取Log 2后的結(jié)果的總和。我們集中計(jì)算了四蛋白組合(CYFRA21.1-CRP-SAA-NSE)和五蛋白組合(4proteins+CEA)

如圖5所示：為TRI的點(diǎn)陣的形式圖。在三個(gè)月治療過程中的整個(gè)患者群體中，27％的患者的蛋白水平有明顯的降低(TRI<2^-10或1/1028)，17.5％的患者有適度的降低(TRI＝2^-5-2^-10)，剩余55.5％的患者有少量的降低、不變或少量的上升。與對(duì)照組相比，NSCLC患者體的血清蛋白水平有所上升，治療后血清蛋白水平有所下降，表明了治療后腫瘤負(fù)荷的降低，這一下降的程度可能反映了治療的成功程度。在3到5個(gè)月的治療后，有62.5％接受吉西他濱治療的患者與使用培美曲塞的患者相比得到了更好的治療效果(OR＝5.1，p＝0.04和OR＝10.8，p＝0.01,)。在紫杉醇治療組中，在治療3個(gè)月和5個(gè)月中的12％和18％的患者具有較好的響應(yīng)，這與使用吉西他濱治療的患者組相比來說具有顯著的不同(OR＝10.8,p＝0.01and OR＝7.0,p＝0.06)。但與培美曲塞的患者組相比沒有顯著差異。這些結(jié)果可能表明了鉑類藥物對(duì)NSCLC有更好的治療效果。

我們也分析了是否可以用治療前的蛋白水平去預(yù)估治療應(yīng)答中蛋白水平的改變。

如圖6A所示，為TRI和治療前每個(gè)蛋白的水平間的相關(guān)性。這些結(jié)果表明，具有較好療效的患者的CRP，SAA和CYFRA21.1蛋白水平較高。盡管具有更高的蛋白表達(dá)水平的患者其治療療效更好，但不是所有的高蛋白表達(dá)的患者的治療效果都更好。

如圖6A所示，為TRI和治療前四蛋白(CRP-SAA-CYFRA21.1-NSE)組合的的水平間的相關(guān)性。TRI和多蛋白組合的總蛋白水平間的相關(guān)性很高，證明具有更高的蛋白水平的患者得到了更好的治療療效。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變形，這些改進(jìn)和變形也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。