專利名稱：去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制劑的提純方法，具體說(shuō)是涉及一種去除牛血清白蛋白提取過(guò)程中殘留脂肪酸的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)在的牛血清白蛋白廣泛用于診斷試劑行業(yè)，生物工程、細(xì)胞培養(yǎng)等科學(xué)研究領(lǐng)域。制備牛血清白蛋白的方法很多，但在制備過(guò)程中均需添加辛酸鈉作為牛血清白蛋白的保護(hù)劑，產(chǎn)品存在制備純度不高，脂肪酸殘留量過(guò)高的弊端。一些生物醫(yī)學(xué)研究要求使用不含游離脂肪酸的牛血清白蛋白，否則牛血清白蛋白所含高濃度的脂肪酸將影響細(xì)胞培養(yǎng)、分化、代謝反應(yīng)、生化測(cè)定等。例如，在3T3-L1脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中不能使用普通牛血清白蛋白試劑，否則影響分化和細(xì)胞代謝狀態(tài)；在測(cè)定培養(yǎng)的組織細(xì)胞釋放的游離脂肪酸濃度時(shí)，也必須用不含脂肪酸的牛血清白蛋白，否則難以準(zhǔn)確測(cè)定甘油三酯水解和游離脂肪酸釋放。因此，對(duì)傳統(tǒng)工藝提取的牛血清白蛋白進(jìn)行脫脂肪酸處理可提高牛血清白蛋白的純度，擴(kuò)大牛血清白蛋白產(chǎn)品的應(yīng)用范圍。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生產(chǎn)方法， 它用料少，成本低，工藝簡(jiǎn)單，用以解決傳統(tǒng)工藝提取的牛血清白蛋白中脂肪酸含量過(guò)高， 不能適用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物工程學(xué)實(shí)驗(yàn)的難題，提高產(chǎn)品品質(zhì)。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的生產(chǎn)方法由如下步驟組成A、溶解，稱取牛血清白蛋白放到容器中，加入其重量10倍的蒸餾水溶解，充分?jǐn)嚢柚寥芤撼吻澹芙鉁囟仍?3 27°C ；B、解析，用濃度為0. 2N的HC1，調(diào)節(jié)PH至3 3. 5，將裝有充分溶解后的牛血清白蛋白溶液的容器移置冰水混合物中進(jìn)行冰水浴或冷卻至0 4°C，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持 30min ；C、吸附，加入步驟A溶液重量的4 5%的活性炭，混勻，得到混懸液，將裝混懸液的容器置于冰水混合物中進(jìn)行冰水浴或冷卻至0 4°C，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持1小時(shí)，D、過(guò)濾，將混懸液用定性濾紙過(guò)濾，收集濾液，濾渣回收后再利用；E、濃縮，將上一步驟濾液用0. 2N的NaOH調(diào)節(jié)PH值至7. 0，然后用10000 20000
分子量的超濾裝置進(jìn)行超濾濃縮；F、凍干，將濃縮液按凍干曲線凍干，即將超濾后的濃縮液迅速冷凍至-40°c，持續(xù) 50 70min，升到_25°C，持續(xù)10 20小時(shí)，再緩慢升溫至0°C，維持1 4小時(shí)，升溫至保存溫度20°C，保持30 60分鐘，分裝為成品。上述步驟C中的冰水混合物的溫度為0 4°C。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、用料少、成本低、工藝簡(jiǎn)單。本方法利用少量的活性炭在 0 4°C溫度下攪拌吸附1小時(shí)即可完成。2、可操作性強(qiáng)、易于工業(yè)化生產(chǎn)。3、所產(chǎn)的成品純度高，脂肪酸含量極微，可以滿足細(xì)胞培養(yǎng)、生物工程實(shí)驗(yàn)要求的標(biāo)準(zhǔn)。4、本方法的回收率高，回收率可以達(dá)到90%。5、成本低、經(jīng)濟(jì)效益顯著。表1用本發(fā)明方法處理前、后質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比表
權(quán)利要求
1.一種去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生產(chǎn)方法，其特征在于它由如下步驟組成A、溶解，稱取牛血清白蛋白放到容器中，加入其重量10倍的蒸餾水溶解，充分?jǐn)嚢柚寥芤撼吻澹芙鉁囟仍?3 27°C ；B、解析，用濃度為0.2N的HCl，調(diào)節(jié)PH至3 3. 5，將裝有充分溶解后的牛血清白蛋白溶液的容器置于冰水混合物中進(jìn)行冰水浴或冷卻至0 4°C，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持30min ；C、吸附，加入步驟A溶液重量的4 5%的活性炭，混勻，得到混懸液，將裝混懸液的容器置于冰水混合物中進(jìn)行冰水浴或冷卻至0 4°C，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持1小時(shí)；D、過(guò)濾，將混懸液用定性濾紙過(guò)濾，收集濾液，濾渣回收；E、濃縮，將上一步驟的濾液用0.2N的NaOH調(diào)節(jié)PH值至7. 0，然后用10000 20000分子量的超濾裝置進(jìn)行超濾濃縮；F、凍干，將濃縮液按凍干曲線凍干，即將超濾后的濃縮液迅速冷凍至-40V，持續(xù)50 70min，升到_25°C，持續(xù)10 20小時(shí)，再緩慢升溫至0°C，維持1 4小時(shí)，升溫至保存溫度20°C，保持30 60分鐘，分裝為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生產(chǎn)方法，其特征在于它的步驟C中的冰水混合物的溫度為0 4°C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生產(chǎn)方法，它由如下步驟組成溶解，稱取牛血清白蛋白加入其重量10倍的蒸餾水溶解，溫度在23～27℃；解析，用濃度為0.2N的HCl，調(diào)節(jié)PH至3～3.5，將溶液進(jìn)行冷卻；吸附，加入溶液重量的4～5％的活性炭，將混懸液冰水浴，攪拌，過(guò)濾，濾渣回收后再利用；濃縮，濾液用0.2N的NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0，然后20000分子量以下的超濾裝置進(jìn)行超濾濃縮；凍干，將濃縮液按凍干曲線凍干，分裝為成品。本方法用料少、成本低、工藝簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)、易于工業(yè)化生產(chǎn)。成品純度高，脂肪酸含量極微，可以滿足細(xì)胞培養(yǎng)、生物工程實(shí)驗(yàn)要求的標(biāo)準(zhǔn)。本方法的回收率高，回收率可以達(dá)到90％。
文檔編號(hào)C07K1/22GK102241765SQ20111012436
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者劉雪梅, 王欣, 陳志強(qiáng) 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古奇特生物高科技術(shù)(集團(tuán))有限公司