本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種定量聯(lián)合檢測PA與CRP的方法、試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

住院和門診病人的營養(yǎng)診斷率低是我國醫(yī)療服務(wù)中存在的一個普遍現(xiàn)象。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年近億人次的住院病人中，營養(yǎng)診斷率不足1％。按公認(rèn)的住院病人營養(yǎng)不良率40％計(jì)算，則每年有4千萬患有營養(yǎng)不良的住院病人得不到合理有效的營養(yǎng)支持，影響了其臨床結(jié)局。

營養(yǎng)不良與臟器功能損傷是一個漸進(jìn)的過程，不同階段的代謝特點(diǎn)不同，因此，營養(yǎng)與代謝狀況評價(jià)和臟器功能評價(jià)必須采用多指標(biāo)組合分析。例如，蛋白質(zhì)/能量評價(jià)組合一般由前白蛋白(Prealbumin，PA)、轉(zhuǎn)鐵蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白和C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)組成，分別反映蛋白質(zhì)的丟失及其程度、營養(yǎng)治療后蛋白質(zhì)合成速率以及蛋白質(zhì)濃度下降是否為應(yīng)激反應(yīng)所致。然而，目前市場上使用的營養(yǎng)診斷體外診斷產(chǎn)品評價(jià)指標(biāo)單一，臨床接受程度很低。鑒于此，為了準(zhǔn)確了解臨床病人的營養(yǎng)狀況，更好地使病人得到治療，排除因營養(yǎng)支持方面的缺陷導(dǎo)致的臨床新問題，有必要研究開發(fā)操作簡便、臨床接受程度高、檢測效果好的營養(yǎng)診斷產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了準(zhǔn)確了解臨床病人的營養(yǎng)狀況，更好地使病人得到治療，排除因營養(yǎng)支持方面的缺陷導(dǎo)致的臨床新問題，而提供一種操作簡便、臨床接受程度高、檢測效果好的定量聯(lián)合檢測PA與CRP的方法、試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之一是：一種定量聯(lián)合檢測PA與CRP的試劑盒，其包括試紙條I和試紙條II，所述試紙條I用于定量檢測PA，由底板I、樣品墊I、結(jié)合墊I、硝酸纖維素膜I和吸水紙I構(gòu)成，所述樣品墊I、結(jié)合墊I、硝酸纖維素膜I和吸水紙I依次搭接地粘貼在底板I上且分別部分重合，在硝酸纖維素膜I上分布有檢測線I和質(zhì)控線I，所述檢測線I靠近結(jié)合墊I端，所述質(zhì)控線I靠近吸水紙I端，所述結(jié)合墊I上噴涂有熒光微球標(biāo)記的抗PA抗體I，所述檢測線I上包被有抗PA抗體II，所述質(zhì)控線I上包被有驢抗鼠抗體；所述試紙條II用于檢測CRP，由底板II、樣品墊II、結(jié)合墊II、硝酸纖維素膜II和吸水紙II構(gòu)成，所述樣品墊II、結(jié)合墊II、硝酸纖維素膜II和吸水紙II依次搭接粘貼在底板II上且分別部分重合，在硝酸纖維素膜II上分布有檢測線II和質(zhì)控線II，所述檢測線II靠近結(jié)合墊II端，所述質(zhì)控線II靠近吸水紙II端，所述結(jié)合墊II上噴涂有熒光微球標(biāo)記的抗CRP抗體I，所述檢測線II上包被有抗CRP抗體II，所述質(zhì)控線II上包被有驢抗鼠抗體；其中，所述抗PA抗體I和所述抗PA抗體II具有不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述抗CRP抗體I和所述抗CRP抗體II具有不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)。

本發(fā)明中，所述PA指前白蛋白(Prealbumin，PA)，所述CRP指C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)。

本發(fā)明中，所述的熒光微球較佳地是直徑為0.1～10μm的用聚合材料或二氧化硅包裹熒光物質(zhì)制得的微球，其表面連接有活性基團(tuán)或與鏈霉親和素偶聯(lián)；所述熒光物質(zhì)為有機(jī)或無機(jī)的熒光物質(zhì)或多種熒光物質(zhì)的摻雜物以及量子點(diǎn)。

所述底板I和底板II的材料較佳地為PVC塑料膠板。

所述樣品墊I和樣品墊II的材料較佳地為玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。

所述結(jié)合墊I和結(jié)合墊II的材料較佳地為玻璃纖維膜或聚酯纖維 膜。

所述試紙條I和所述試紙條II較佳地以平行方式排布于同一卡座上，以方便操作和讀取數(shù)據(jù)。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之二是：前述定量聯(lián)合檢測PA與CRP的試劑盒的制備方法，其包括如下步驟：

(1)硝酸纖維素膜的制備：將抗PA抗體II和驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜I上，分別作為檢測線I和質(zhì)控線I，包被的量均為0.5～1.25μL/cm，干燥后備用；將抗CRP抗體II和驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜II上，分別作為檢測線II和質(zhì)控線II，包被的量均為0.5～1.25μL/cm，干燥后備用；

(2)結(jié)合墊的制備：以EDC為偶聯(lián)劑，將熒光微球分別標(biāo)記在抗PA抗體I和抗CRP抗體I上，將標(biāo)記有熒光微球的抗PA抗體I噴涂至結(jié)合墊I上，將標(biāo)記有熒光微球的抗CRP抗體I噴涂至結(jié)合墊II上，干燥后備用；

(3)試紙條的組裝：將樣品墊I、結(jié)合墊I、包被有抗PA抗體II作為檢測線I與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線I的硝酸纖維素膜I和吸水紙I依次搭接地粘貼在粘性底板I上且分別部分重合，得試紙條I；將樣品墊II、結(jié)合墊II、包被有抗CRP抗體II作為檢測線II與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線II的硝酸纖維素膜II和吸水紙II依次搭接地粘貼在粘性底板II上且分別部分重合，得試紙條II。

本發(fā)明中，步驟(1)為硝酸纖維素膜的制備。

其中，優(yōu)選地，所述的抗PA抗體II、所述的抗CRP抗體II和驢抗鼠抗體在包被前用抗體保護(hù)劑調(diào)節(jié)濃度。所述的抗體保護(hù)劑為本領(lǐng)域常規(guī)所述，如在PB緩沖溶液中加入適量的蔗糖、疊氮鈉或BSA等均可以作為適用于本發(fā)明的抗體保護(hù)劑。所述的抗體保護(hù)劑的pH值優(yōu)選7.2～7.4。所述調(diào)節(jié)濃度優(yōu)選將所述的抗PA抗體II和所述的抗CRP抗體II的濃度調(diào)節(jié)至0.3～1.5mg/mL(最優(yōu)選0.5mg/mL)，將驢抗鼠抗體的 濃度調(diào)節(jié)至0.5～2.0mg/mL(最優(yōu)選1.0mg/mL)。

所述檢測線I和所述質(zhì)控線I間的距離以及所述檢測線II和所述質(zhì)控線II間的距離均為本領(lǐng)域常規(guī)，一般檢測試紙條的檢測線和質(zhì)控線之間的距離均適用于本發(fā)明，本發(fā)明優(yōu)選所述檢測線I和所述質(zhì)控線I間的距離以及所述檢測線II和所述質(zhì)控線II間的距離均為4～8mm。

所述包被的量優(yōu)選均為1.0μL/cm。

所述干燥優(yōu)選環(huán)境的濕度低于40％。

本發(fā)明中，步驟(2)為結(jié)合墊I和結(jié)合墊II的制備。較佳地，步驟(2)為將熒光微球加入MES緩沖溶液，再加入EDC溶液混勻，然后加入用MES緩沖溶液稀釋的抗PA抗體I或抗CRP抗體I，混勻后室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1～3h，加入BSA封閉1～2h，離心棄上清，沉淀用MES緩沖溶液復(fù)溶至起始體積，將制備好的熒光微球標(biāo)記的抗PA抗體I和抗CRP抗體I分別噴涂至結(jié)合墊I和結(jié)合墊II上，干燥后備用即可。

其中，所述結(jié)合墊I或結(jié)合墊II優(yōu)選經(jīng)過緩沖液、表面活性劑、穩(wěn)定劑、非離子表面活性劑和防腐劑中的一種或多種處理后再使用；所述緩沖液更優(yōu)選磷酸鹽緩沖液；所述表面活性劑更優(yōu)選聚乙烯吡咯烷酮或TWEEN-20；所述穩(wěn)定劑更優(yōu)選蔗糖或牛血清白蛋白；所述非離子表面活性劑更優(yōu)選聚乙二醇對異辛基苯基醚；所述防腐劑更優(yōu)選疊氮化鈉。

所述MES緩沖溶液為本領(lǐng)域常規(guī)所述，MES是4-Morpholine Ethane Sulfonic Acid的簡稱，即2(N-嗎啉)乙磺酸，所述EMS緩沖溶液的pH值優(yōu)選為5.0～7.0，更優(yōu)選為5.5。

所述EDC溶液為本領(lǐng)域常規(guī)所述，EDC是1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的英文字母簡稱，所述EDC溶液的濃度沒有特殊要求，常規(guī)的濃度均適用。

步驟(2)中還可以EDC/NHS(Hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-s ulfonicacid sodium salt，N-羥基硫代琥珀酰亞胺)作為偶聯(lián)劑；即， 在熒光微球中加入EDC和NHS混勻，活化羧基官能團(tuán)，離心后再加入抗PA抗體I或抗CRP抗體I進(jìn)行偶聯(lián)。以此方法偶聯(lián)能夠使不同批次生產(chǎn)的試紙條產(chǎn)品的質(zhì)量更穩(wěn)定，數(shù)據(jù)指標(biāo)均一性更優(yōu)良。

所述抗PA抗體I或抗CRP抗體I在加入體系前優(yōu)選用MES緩沖溶液稀釋至0.3～0.8mg/mL，更優(yōu)選稀釋至0.5mg/mL。

所述抗PA抗體I或抗CRP抗體I的加入量優(yōu)選為每mg熒光微球中加入20～80μg(更優(yōu)選25～50μg)抗體。

所述干燥優(yōu)選環(huán)境的濕度低于40％。

本發(fā)明中，步驟(3)為試紙條的組裝。

其中，所述試紙條I和所述試紙條II在制得后切成寬度為3.5～4.5mm的條狀。

較佳地，步驟(3)還包括將所述試紙條I和所述試紙條II安裝于同一卡座上，以方便操作和讀取數(shù)據(jù)。所述卡座起固定試紙條的作用，同時使樣品墊上方形成易于操作的加樣孔。

本發(fā)明的一較佳實(shí)例包括如下步驟：

(1)硝酸纖維素膜的制備：

用0.01M pH 7.2～7.4的抗體保護(hù)劑分別調(diào)節(jié)抗PA抗體II和抗CRP抗體II的濃度為0.5mg/mL、驢抗鼠抗體的濃度為1.0mg/mL，使用Bio-Dot XYZ3050型三維噴點(diǎn)平臺(Bio-Dot，美國)將抗PA抗體II及驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜I上，分別作為檢測線I和質(zhì)控線I，兩線相隔5mm，噴膜量均為1.0μL/cm，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆?，將抗CRP抗體II及驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜II上，分別作為檢測線II和質(zhì)控線II，兩線相隔5mm，噴膜量均為1.0μL/cm，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)結(jié)合墊的制備：

以5mL體系計(jì)，取250μL10mg/mL的熒光微球加入5mL 0.05 M pH 5.5的MES緩沖溶液，再加入50μL 5.0mg/mL EDC溶液，攪拌混勻后，分別加入100～250μL 0.5mg/mL的用MES緩沖溶液稀釋的抗PA抗體I或抗CRP抗體I，充分混勻后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，加入占反應(yīng)體系體積1/10的濃度為10％的BSA封閉1h，在4℃條件下11000r/min離心20min，棄上清，沉淀用3mL 0.05M pH 5.5的MES緩沖溶液復(fù)溶，4℃條件下11000r/min離心20min，最后棄上清，沉淀用0.05M pH 5.5的MES緩沖溶液復(fù)溶至起始體積，將制備好的以熒光微球標(biāo)記的抗PA抗體I和抗CRP抗體I用Bio-Dot XYZ3050型三維噴點(diǎn)平臺分別噴涂至結(jié)合墊I和結(jié)合墊II上，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)試紙條的組裝：將樣品墊I、結(jié)合墊I、包被有抗PA抗體II作為檢測線I與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線I的硝酸纖維素膜I和吸水紙I依次搭接地粘貼在粘性底板I上且分別部分重合，得試紙條I；將樣品墊II、結(jié)合墊II、包被有抗CRP抗體II作為檢測線II與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線II的硝酸纖維素膜II和吸水紙II依次搭接地粘貼在粘性底板II上且分別部分重合，得試紙條II；將所述試紙條I和所述試紙條II切成寬度為4.0mm的條狀，安裝于同一卡座上。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之三是：利用前述試劑盒定量聯(lián)合檢測PA與CRP的方法，其包括如下步驟：

(1)在樣品墊I上加入含有不同已知濃度的PA標(biāo)準(zhǔn)物的溶液，在樣品墊II上加入含有不同已知濃度的CRP標(biāo)準(zhǔn)物的溶液，反應(yīng)10～25min后，將試紙條置于激發(fā)光源下，分別測定檢測線I、質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度以及檢測線II、質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度，分別根據(jù)檢測線I與質(zhì)控線I的熒光強(qiáng)度的比值以及檢測線II與質(zhì)控線II的熒光強(qiáng)度的比值繪制反映PA和CRP含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)在樣品墊I和樣品墊II上加入待測物溶液，反應(yīng)10～25min后，將試紙條置于激發(fā)光源下，分別測定檢測線I、質(zhì)控線I上條帶的熒光 強(qiáng)度以及檢測線II、質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度，將檢測線I與質(zhì)控線I的熒光強(qiáng)度的比值以及檢測線II與質(zhì)控線II的熒光強(qiáng)度的比值對照步驟(1)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀取待測物溶液中的PA含量和CRP含量。

本發(fā)明中，所述的激發(fā)光源包含于檢測本發(fā)明所述試紙條的熒光免疫讀取儀內(nèi)，所述熒光免疫讀取儀包含激發(fā)光源模塊、濾光模塊、光電轉(zhuǎn)換模塊、控制分析模塊和軟件系統(tǒng)，所述的激發(fā)光源的波長較佳地為450～500nm，更優(yōu)選470nm。

步驟(1)中所述反應(yīng)的時間較佳地為15min。

步驟(2)中所述反應(yīng)的時間較佳地為15min。

本發(fā)明的檢測原理為：

按照檢測步驟把樣本溶液加入到試紙條的樣品墊上，當(dāng)檢測樣本中不含PA或者CRP時，熒光微球-抗體復(fù)合物只會被硝酸纖維素膜質(zhì)控線上的驢抗鼠抗體捕獲，在激發(fā)光源的激發(fā)作用下只有質(zhì)控線出現(xiàn)熒光條帶當(dāng)檢測樣本中含有PA或CRP抗原時，熒光微球-抗體復(fù)合物就會和檢測樣本中的抗原結(jié)合形成熒光微球-抗體-抗原復(fù)合物，這種熒光微球-抗體-抗原復(fù)合物被硝酸纖維素膜檢測線上的抗PA或CRP抗體捕獲，未結(jié)合的熒光微球-抗體復(fù)合物在毛細(xì)作用下繼續(xù)向吸水紙方向移動，被質(zhì)控線上包被的驢抗鼠抗體捕獲，在激發(fā)光源的激發(fā)作用下檢測線和質(zhì)控線均出現(xiàn)熒光條帶；在一定范圍內(nèi)，隨檢測樣本中PA或CRP抗原的濃度增加，硝酸纖維素膜上檢測線的熒光亮度越強(qiáng)。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之五是：前述試劑盒在聯(lián)合檢測PA與CRP中的應(yīng)用。

在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：

相比傳統(tǒng)的檢測方法，本發(fā)明的試紙條和檢測方法有極大優(yōu)勢：

(1)靈敏度高，其靈敏度是用傳統(tǒng)的染料和有色標(biāo)記物質(zhì)檢測方法的10～1000倍，能達(dá)到pg/mL，可以與氣質(zhì)聯(lián)用和HPLC等精密檢測方法相媲美，使用雙抗夾心提高了捕獲效率，增強(qiáng)了靈敏度；

(2)微球表面攜帶活性化學(xué)基團(tuán)，抗體標(biāo)記使用的是化學(xué)偶聯(lián)方法，形成的熒光微球-抗體復(fù)合物能穩(wěn)固結(jié)合，標(biāo)記穩(wěn)定性好、非特異性低；

(3)操作方便耗時短，檢測線性范圍寬，本發(fā)明試紙條的檢測范圍是5-100ng/mL，只需10～20min就能得到檢測結(jié)果；

(4)本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對PA和CRP的快速聯(lián)合檢測，所測指標(biāo)能夠更加有效地用于評價(jià)待測樣本的營養(yǎng)狀況。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中定量聯(lián)合檢測樣本中PA和CRP的試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2為圖1所示試劑盒中單一試劑條的細(xì)節(jié)結(jié)構(gòu)圖。

圖3為實(shí)施例1中卡座的實(shí)拍圖。

圖4為實(shí)施例2中反映PA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中，縱坐標(biāo)為檢測線I和質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度的比值，橫坐標(biāo)為PA的濃度。

圖5為實(shí)施例2中反映CRP含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中，縱坐標(biāo)為檢測線II和質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度的比值，橫坐標(biāo)為CRP的濃度。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但并不用來限制本發(fā)明的范圍。除特殊說明的之外，各實(shí)施例中所用的設(shè)備和試劑均常規(guī)市售可得。

實(shí)施例1定量聯(lián)合檢測樣本中PA和CRP的試劑盒的制備

本實(shí)施例中，底板材料為PVC塑料膠板，材料購自余姚市富誠塑化有限公司；樣品墊材料為玻璃纖維膜，材料購自上海金標(biāo)生物科技有限公司；結(jié)合墊的材料為玻璃纖維膜，材料購自上海金標(biāo)生物科技 有限公司公司?？筆A抗體I和抗PA抗體II具有不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗CRP抗體I和抗CRP抗體II具有不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)。

(1)硝酸纖維素膜的制備

用pH 7.2～7.4的PB緩沖液(加入3％蔗糖)調(diào)節(jié)抗PA抗體II的濃度為0.5mg/mL、驢抗鼠抗體的濃度為1.0mg/mL，使用Bio-Dot XYZ3050型三維噴點(diǎn)平臺將抗PA抗體II及驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜I上，分別作為檢測線I和質(zhì)控線I，噴膜量均為1μL/cm，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆谩Ｋ龈稍锏沫h(huán)境濕度低于40％。

用pH 7.2～7.4的PB緩沖液(加入3％蔗糖)調(diào)節(jié)抗CRP抗體II的濃度為0.5mg/mL、驢抗鼠抗體的濃度為1.0mg/mL，使用Bio-Dot XYZ3050型三維噴點(diǎn)平臺將抗CRP抗體II及驢抗鼠抗體包被到硝酸纖維素膜II上，分別作為檢測線II和質(zhì)控線II，噴膜量均為1μL/cm，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆?。所述干燥的環(huán)境濕度低于40％。

(2)熒光微球標(biāo)記抗體及結(jié)合墊的制備

在兩個含有5mL 0.05M pH 5.5的MES緩沖溶液的容器中加入250μL10mg/mL的熒光微球，再加入50μL 5.0mg/mL EDC溶液，攪拌混勻后，分別加入100-250μL 0.5mg/mL的抗PA抗體I與抗CRP抗體I，充分混勻后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，加入十分之一體積10％的BSA封閉1h，在4℃條件下11000r/min離心20min，棄上清，沉淀用5mL的0.05M pH 5.5的MES緩沖溶液清洗，用上述的離心條件再次離心，最后棄上清，沉淀用MES緩沖溶液復(fù)溶至起始體積。將制備好的標(biāo)記有熒光微球的抗PA抗體I和抗CRP抗體I用Bio-Dot XYZ3050型三維噴點(diǎn)平臺分別噴涂至檢測PA的結(jié)合墊I和檢測CRP的結(jié)合墊II上，37℃條件下真空干燥2h，室溫干燥的環(huán)境下保存?zhèn)溆?。所述干燥的環(huán)境濕度低于40％。

(3)試紙條的組裝

如圖1和圖2所示，將樣品墊I、結(jié)合墊I、包被有抗PA抗體II作為檢測線I與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線I的硝酸纖維素膜I和吸水紙I依次搭接地粘貼在粘性底板I上且分別部分重合，得試紙條I；將樣品墊II、結(jié)合墊II、包被有抗CRP抗體II作為檢測線II與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線II的硝酸纖維素膜II和吸水紙II依次搭接地粘貼在粘性底板II上且分別部分重合，得試紙條II；將所述試紙條I和所述試紙條II切成寬度為4.0mm的長條狀，安裝于同一卡座上。圖1中，6和7分別為卡座與樣品墊間形成的加樣孔，其中一個為檢測PA所設(shè)，另一個為檢測CRP所設(shè)。1為卡座底板，用于安裝試紙條。2和3分別為檢測PA/CRP和CRP/PA的試紙條，平行排列于卡座底板上，5和4分別對應(yīng)檢測線和質(zhì)控線。圖2為單個試紙條的細(xì)節(jié)圖，其中，8為樣品墊，9為結(jié)合墊，10為硝酸纖維素膜，11為檢測線，12為質(zhì)控線，13為吸水紙，從圖中可以看出，樣品墊、結(jié)合墊、包被有抗PA/CRP抗體作為檢測線與驢抗鼠抗體作為質(zhì)控線的硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接地粘貼在粘性底板上且分別部分重合。將試紙條I和試紙條II安裝于同一卡座(如圖3所示)，樣品墊I和樣品墊II與卡座之間分別形成一個方便加樣操作的加樣孔，即得。

(5)將試紙條裝入鋁箔袋，加入干燥劑后，封口保存，于室溫干燥的環(huán)境下至少可保存一年。

實(shí)施例2樣本中PA和CRP的定量檢測

使用實(shí)施例1制備的試紙條對樣本中的PA和CRP進(jìn)行檢測，其步驟包括：

(1)在樣品墊I的加樣孔中加入含有不同已知濃度(具體為0.0、2.5、5.0、12.5、25.0、37.5、75.0、100、200μg/L)的PA標(biāo)準(zhǔn)物的溶液，在樣品墊II的加樣孔中加入含有不同已知濃度(具體為0.0、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、50.0、100.0、200.0、400.0μg/L)的CRP標(biāo)準(zhǔn)物 的溶液，反應(yīng)15min后，將試紙條置于470nm激發(fā)光源下，分別測定檢測線I、質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度以及檢測線II、質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度，分別根據(jù)檢測線I與質(zhì)控線I的熒光強(qiáng)度的比值以及檢測線II與質(zhì)控線II的熒光強(qiáng)度的比值繪制反映前PA和CRP含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以檢測線I和質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度的比值為縱坐標(biāo)，PA的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖4所示，結(jié)果表明在PA濃度為5.0～100.0μg/L的范圍內(nèi)有很好的線性相關(guān)(R²＝0.998)，其靈敏度為2.5μg/L；以檢測線II和質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度的比值為縱坐標(biāo)，CRP的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖5所示，結(jié)果表明在CRP濃度為5.0～100.0μg/L的范圍內(nèi)有很好的線性相關(guān)(R²＝0.998)，其靈敏度為1.0μg/L。

(2)在樣品墊I的加樣孔和樣品墊II的加樣孔中分別加入待測物溶液，反應(yīng)15min后，將試紙條置于470nm激發(fā)光源下，分別測定檢測線I、質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度以及檢測線II、質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度，將檢測線I與質(zhì)控線I的熒光強(qiáng)度的比值以及檢測線II與質(zhì)控線II的熒光強(qiáng)度的比值對照步驟(1)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀取待測物溶液中的PA含量和CRP含量。

實(shí)施例3樣本中前白蛋白和C-反應(yīng)蛋白的定量檢測

取實(shí)施例1制備的試紙條，打開鋁箔袋取出試紙條，平放于桌面，取2μL血樣于裝有2mL 0.01M pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液的CRP試劑瓶中，充分混勻后分別取100μL加入裝有0.9mL 0.01M pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液的CRP試劑瓶中，在試劑瓶中取100uL溶液加入試紙條對應(yīng)檢測PA和CRP的加樣孔中，反應(yīng)15min后將試紙條放入置于激發(fā)光源下，分別測定檢測線I、質(zhì)控線I上條帶的熒光強(qiáng)度以及檢測線II、質(zhì)控線II上條帶的熒光強(qiáng)度，將檢測線I與質(zhì)控線I的熒光強(qiáng)度的比值以及檢測線II與質(zhì)控線II的熒光強(qiáng)度的比值對照實(shí)施例2得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀取待測物溶液中的PA含量和CRP含量。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、具體實(shí)施方式及試驗(yàn)，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明的基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。