1.一種維生素B12與BtuF蛋白相互作用的分析方法,其特征在于,具體步驟如下:
第一步,將BtuF蛋白和蛋白質(zhì)標準品用超濾膜進行脫鹽處理,將脫鹽后的BtuF蛋白置換到pH8.0的醋酸銨緩沖液中,蛋白質(zhì)標準品置換到pH7.4的醋酸銨緩沖液中;
第二步,在第一步得到的BtuF蛋白溶液中加入維生素B12的醋酸銨緩沖溶液,得到BtuF-VB復合物溶液;
第三步,在相同的質(zhì)譜條件下,對BtuF蛋白、BtuF-VB和蛋白質(zhì)標準品進行質(zhì)譜分析,采集各自的離子淌度數(shù)據(jù);
第四步,將得到的離子淌度數(shù)據(jù)處理,得到BtuF蛋白、BtuF-VB、蛋白質(zhì)標準品的漂移時間分布;
第五步,根據(jù)蛋白質(zhì)標準品的漂移時間分布和理論碰撞橫截面積,以及BtuF蛋白、BtuF-VB的漂移時間分布,得到BtuF蛋白、BtuF-VB的碰撞橫截面積,最后根據(jù)漂移時間分布和碰撞橫截面積,分析BtuF-VB的相互作用。
2.根據(jù)權利要求1所述的分析方法,其特征在于,第一步中,BtuF蛋白脫鹽時,溫度為4℃,離心轉(zhuǎn)速為14000rcf,時間不低于30min,重復不少于5次。
3.根據(jù)權利要求1所述的分析方法,其特征在于,第二步中,BtuF蛋白與維生素B12的摩爾比為1:1。
4.根據(jù)權利要求1所述的分析方法,其特征在于,第三步中,離子淌度質(zhì)譜儀條件為:針尖電壓1.5kV,錐孔電壓10V,源補償電壓10V,一級碰撞室電壓2V,二級碰撞室電壓2V,一級碰撞室和離子淌度分離室之間的反電壓28V,碰撞室內(nèi)氬氣流速2mL/min,氦氣室氣體流速150mL/min,離子淌度分離室中用氮氣做分離氣體且流速為60mL/min,離子淌度分離室行波速度1100m/s,離子淌度分離室行波振幅37V。
5.根據(jù)權利要求1所述的分析方法,其特征在于,第三步中,所述的蛋白質(zhì)標準品為乙醇脫氫酶、刀豆蛋白、抗生物素蛋白、β-乳球蛋白、肌球蛋白、細胞色素c和血清淀粉樣蛋白。