本發(fā)明涉及到化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法。
背景技術(shù)：
：目前蔬菜和水果中矮壯素、氯吡脲、赤霉素、脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中日益增長(zhǎng)，使用后對(duì)人體健康存在極大風(fēng)險(xiǎn)，然而。在我國(guó)未出現(xiàn)對(duì)蔬菜和水果中矮壯素、氯吡脲、赤霉素、脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的測(cè)定?，F(xiàn)有國(guó)標(biāo)中未見專門針對(duì)蔬菜水果中多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑同時(shí)檢測(cè)的方法，而且單一成分檢測(cè)多為液相分析法，檢出限較高，很多無(wú)參考檢測(cè)方法。文獻(xiàn)對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)測(cè)定不準(zhǔn)確、不精確的問題，該方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定，完全滿足國(guó)內(nèi)外有關(guān)法規(guī)對(duì)蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的要求，可為蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的監(jiān)管提供技術(shù)支持。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，所述測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法的計(jì)算公式為：被測(cè)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，單位以微克每千克表示，按公式計(jì)算：式中：X——樣品中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑含量，單位為微克每千克；C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的被測(cè)組分溶液質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升；V——樣品提取液體積，單位為毫升；m——試樣的質(zhì)量，單位為克。進(jìn)一步，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法包括：分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；矮壯素、氯吡脲、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL；脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、4-氟苯氧乙酸濃度為5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL；赤霉素濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL；3-吲哚丁酸、3-吲哚丙酸、3-吲哚乙酸濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS分析，采用外標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；以濃度為橫坐標(biāo)(x，ng/mL)，定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，所得相關(guān)系數(shù)均大于0.99。進(jìn)一步，所述樣品的處理及測(cè)定包括：稱取試樣10g于50mL離心管中，加入10mL含1％V/V乙酸的乙腈溶液，渦旋2min后，超聲10min，加入脫水試劑，4g無(wú)水硫酸鎂和1g氯化鈉，渦旋振蕩1min，以10000r/min離心3min，取2.0mL上清液于，加入100mgC18和100mg無(wú)水硫酸鎂，渦旋混勻1min后于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，上機(jī)測(cè)定。本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法測(cè)定的蔬菜。本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法測(cè)定的水果。本發(fā)明的測(cè)定方法采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、可靠，檢測(cè)限、回收率和精密度均符合要求；本發(fā)明線性范圍和檢測(cè)下限能夠滿足產(chǎn)品檢測(cè)的要求，準(zhǔn)確度和精密度符合檢測(cè)方法要求。以濃度為橫坐標(biāo)(x，ng/mL)，定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，所得相關(guān)系數(shù)均大于0.99，線性良好。以3倍信噪比估算檢出限(LOD)，以10倍信噪比對(duì)應(yīng)濃度作為定量限(LOQ)，17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢出限在0.09—15.7μg/kg之間，較文獻(xiàn)低(2,4一二氯苯氧乙酸(3.5μg/kg),氯吡脲(5.0μg/kg)。對(duì)含糖量不同的紅棗樣品，進(jìn)行添加回收和精密度實(shí)驗(yàn)。3個(gè)添加水平的回收率為76.6％—119.0％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均不大于9.1％本發(fā)明首次開發(fā)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，填補(bǔ)了技術(shù)空白；本發(fā)明用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)果蔬中17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的同時(shí)檢測(cè)，減少分析時(shí)間，降低檢測(cè)成本，本標(biāo)準(zhǔn)中針對(duì)水果蔬菜中廣泛使用的17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的殘留檢測(cè)問題進(jìn)行研究，解決了目前缺乏專門針對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑多殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的問題。為農(nóng)產(chǎn)品中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留篩查和控制提供重要的手段，有助于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平的提高提供了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法的最優(yōu)條件。附圖說明圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法流程圖。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細(xì)的描述。如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供的測(cè)定蔬菜和水果中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的方法包括以下步驟：S101：對(duì)樣品去除雜質(zhì)、粉碎、密封、貯存處理；S102：標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液在設(shè)定的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件下測(cè)定；S103：除不加試樣外，均按上述步驟1)、步驟2)操作進(jìn)行空白試驗(yàn)；S104：按照公式計(jì)算試樣中被測(cè)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)；S105：相對(duì)離子豐度與濃度接近的對(duì)照品相對(duì)離子豐度進(jìn)行比較，若偏差不超過規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步的描述。(1)樣品處理稱取試樣10g(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入10mL含1％(V/V)乙酸的乙腈溶液，渦旋2min后，超聲10min，加入脫水試劑(4g無(wú)水硫酸鎂和1g氯化鈉)，渦旋振蕩1min，以10000r/min離心3min，取2.0mL上清液于，加入100mgC18和100mg無(wú)水硫酸鎂，渦旋混勻1min后于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，上機(jī)測(cè)定。蔬菜、水果樣品，去除雜質(zhì)，取可食部分切碎，用粉碎機(jī)粉碎混勻，密封，標(biāo)明標(biāo)記。將試樣于－20℃貯存?zhèn)溆谩?2)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液在以下設(shè)定的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件下進(jìn)樣：色譜條件色譜柱：AcquityUPLCBEHC18柱，100mm×2.1mm(內(nèi)徑)，粒徑1.7μm或相當(dāng)者；流動(dòng)相：A相:乙腈；B相：5mM乙酸銨溶液(0.1％甲酸)；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μL；洗脫程序見表。洗脫程序時(shí)間min流速mL/minA相％B相％00.259520.2595120.27030140.2595180.2595質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源；電離方式：正負(fù)離子電離ESI±；監(jiān)測(cè)模式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM；毛細(xì)管電壓：2.8kV(+)；2.8kV(-)；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：350℃；脫溶劑氣流量：1000L/H；錐孔氣流量：50L/H；質(zhì)譜采集參數(shù)見表。質(zhì)譜采集參數(shù)*為定量離子。測(cè)定方式：LC-MS/MS分析，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量；定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差：相對(duì)離子豐度＞50％，允許的相對(duì)偏差±20％相對(duì)離子豐度＞20％～50％，允許的相對(duì)偏差±25％相對(duì)離子豐度＞10％～20％，允許的相對(duì)偏差±30％相對(duì)離子豐度≤10％，允許的相對(duì)偏差±50％；定性每種被測(cè)組分選擇1個(gè)母離子，2個(gè)子離子，在儀器最佳工作條件下，以保留時(shí)間和離子比率相結(jié)合進(jìn)行定性。樣品圖譜中各組分定性離子的相對(duì)離子豐度與濃度接近的對(duì)照品工作液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)離子豐度進(jìn)行比較，若偏差不超過規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。相對(duì)離子豐度偏差范圍見表。相對(duì)離子豐度偏差范圍相對(duì)豐度％允許偏差％＞50±2020～50±2510～20±30≤10±50檢出限本標(biāo)準(zhǔn)檢出限見表。17種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢出限化合物檢出限(μg/kg)矮壯素0.27縮節(jié)胺0.39噻苯隆0.346-芐基嘌呤0.09烯效唑0.11多效唑0.134-氟苯氧乙酸2.943-吲哚乙酸15.73-吲哚丙酸10.63-吲哚丁酸14.41-萘乙酸3.104-氯苯氧乙酸3.012,4-二氯苯氧乙酸1.32氯吡脲0.18脫落酸1.82赤霉素5.432-萘氧乙酸1.52(3)空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述步驟1)、步驟2)操作步驟進(jìn)行；(4)結(jié)果計(jì)算和表述用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按以下公式計(jì)算試樣中被測(cè)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，單位以微克每千克(μg/kg)表示，按公式(1)計(jì)算。式中：X——樣品中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑含量，單位為微克每千克(μg/kg)；C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的被測(cè)組分溶液質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V——樣品提取液體積，單位為毫升(mL)；m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。(5)判斷分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。矮壯素、氯吡脲、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL；脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、4-氟苯氧乙酸濃度為5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL；赤霉素濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL；3-吲哚丁酸、3-吲哚丙酸、3-吲哚乙酸濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS分析，采用外標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。以質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制5點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中藥物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)；在上述色譜條件下，判斷樣品中是否存在相應(yīng)的被測(cè)物，需要滿足如下條件：樣品溶液中出現(xiàn)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液一致，允許偏差小于±0.5％，該色譜峰所對(duì)應(yīng)的藥物在質(zhì)譜定性離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)?shù)幕旌匣|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過上述的規(guī)定，則可確定含有該藥物。在測(cè)定中判斷參數(shù)為：精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15％。準(zhǔn)確度在測(cè)定過程中，建議每測(cè)定20個(gè)～30個(gè)樣品用同一份標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢查儀器的穩(wěn)定性。為了保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確，要求每批樣品至少做一個(gè)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，當(dāng)樣品加標(biāo)為10倍檢出限時(shí)，回收率為在80％～120％之間。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3