一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，步驟包括：提??；富集凈化；空白樣品測試；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作；待測蔬菜樣品的測定。本發(fā)明利用在一定條件下、有機磷農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)的原理，快速檢測出蔬菜中的有機磷農(nóng)藥的殘留量，滿足市場對蔬菜中有機磷農(nóng)藥快速檢測的需求，有利于食品健康。
【專利說明】
一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蔬菜與人們的生活息息相關(guān)，蔬菜的營養(yǎng)物質(zhì)主要包含礦物質(zhì)、維生素、纖維等，這些物質(zhì)的含量越高，蔬菜的營養(yǎng)價值也越高。此外，蔬菜中的水分和膳食纖維的含量也是重要的營養(yǎng)品質(zhì)指標(biāo)。蔬菜的營養(yǎng)素不可低估，1990年國際糧農(nóng)組織統(tǒng)計人體必需的維生素C的90 %、維生素A的60%均來自蔬菜，可見蔬菜對人類健康的貢獻(xiàn)之巨大。此外，蔬菜中還有多種植物化學(xué)物質(zhì)是被公認(rèn)的對人體健康有益的成分，如類胡蘿卜素、二丙烯化合物、甲基硫化合物等，許多蔬菜還含有獨特的微量元素，對人體具有特殊的保健功效，如西紅柿中的番茄紅素、洋蔥中的前列腺素等。
[0003]蔬菜在種植過程中，為了防治病蟲害，均需要噴灑農(nóng)藥，其中有機磷農(nóng)藥因品種多、藥效高、用途廣等原因得到了廣泛的使用。有機磷農(nóng)藥的大量使用不但造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且也危及到人類的健康。目前檢測有機磷農(nóng)藥的分析方法主要有波譜法、色譜法和酶抑制法。波譜法靈敏度不高，一般只能作為定性的鑒別方法用于粗選;色譜法是目前檢測有機磷農(nóng)藥的最主要檢測方法，根據(jù)檢測過程中的物理化學(xué)特性又可分為薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法三類。其中氣相色譜法是進(jìn)入20世紀(jì)50年代以后，在柱層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的儀器分析方法，已成為目前典型的、應(yīng)用最廣的儀器分析方法。薄層色譜法受分析的靈敏度、定量困難的制約。液相色譜法與氣相色譜法相比，雖說不受樣品的揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，非常適合于大分子、不穩(wěn)定的化合物的分析，但在實際應(yīng)用中，凡是能用氣相色譜法分析的樣品一般不用液相色譜法，因為氣相色譜更快，更靈敏，更方便，并且耗費更低。所以氣相色譜法在分析有機磷農(nóng)藥時，無論在分析速度、靈敏度還是分離效率上，都呈現(xiàn)出明顯的優(yōu)越性。該方法是利用經(jīng)提取、純化、濃縮后的有機磷農(nóng)藥注入氣相色譜柱，程序升溫氣化后，不同的有機磷農(nóng)藥在固定相中分離，經(jīng)不同的檢測器檢測掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時間來定性，通過峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照來定量。但氣相色譜儀使用條件要求高，對使用環(huán)境和操作條件要求嚴(yán)格，使用人員要經(jīng)過專門的培訓(xùn)，操作繁瑣，時間較長。因此，在一般實驗室不能實現(xiàn)快速定量檢測有機磷農(nóng)藥。
[0004]隨著人們生活水平的提高，人們對食品安全問題越來越重視，蔬菜作為一種與人們生活息息相關(guān)的食品，檢測其有機磷農(nóng)藥殘留意義重大，另外，由于蔬菜不易長時間儲藏，因此若檢測周期過長，則檢測意義大大降低，發(fā)展蔬菜中有機磷農(nóng)藥快速檢測方法是市場的迫切需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0007]一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，步驟如下:
[0008]I)提取:將蔬菜烘干，粉碎，獲得蔬菜粉末，將蔬菜粉末加入到離心管中，再加入聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液，在80-100kHz下超聲提取10-20min，并在轉(zhuǎn)速為3000-3500rpm條件下離心15_20min，取上層萃取液；
[0009]2)富集凈化:向上層萃取液中加入無機鹽，攪拌混合均勻，再加入已活化的吸附劑，在60-70 °C條件下水浴30-35min，然后在轉(zhuǎn)速為3000_3500rpm離心15_20min，取上層溶液，向上層溶液中加入甲醇，過濾后獲得富集凈化液；
[0010]3)空白樣品測試:取不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，向空白富集凈化液中加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35-40 °C下水浴20_30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8_10min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量ΛΑο;
[0011]4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:另取5份不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，分別向其中加入有機磷農(nóng)藥標(biāo)品使其終濃度分別為0.01,0.KU 10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL 丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35-40 °C下水浴20-30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8-10111；[11，取上層清液，用分光光度計在412111]1處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前的吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA1;然后將本步驟4)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量平均值，并計算出上述0.01、0.1、1、
10、100mg/mL的不同濃度的有機磷農(nóng)藥溶液對酶的抑制率，分別對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取log1Q，以對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取1g1Q為底得到的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其抑制率為縱坐標(biāo)，并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；
[0012]5)待測蔬菜樣品的測定:取待測蔬菜樣品，按照步驟I)和步驟2)，獲取待測富集凈化液，向待測富集凈化液加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35-40 °C下水浴20_30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8_10min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA2;然后將本步驟5)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量AA2的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，就可以計算出待測蔬菜中有機磷農(nóng)藥的殘留量。
[0013]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟I)中所述的蔬菜粉末的質(zhì)量與聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液的體積比為Ig: (28-35)mL;步驟I)中所述的聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯單叔辛基苯基醚的體積濃度為1.5-2%。
[0014]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:步驟2)中所述無機鹽的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg: (8-10)mL;步驟2)中所述已活化的吸附劑的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為Ig: (4-6)mL;所述的上層溶液與甲醇的體積比為1:(1-1.5)。
[0015]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:步驟2)中所述已活化的吸附劑為活化活性炭或活化娃藻土。
[0016]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:所述顯色劑的制備方法為:稱取SOmg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至1ml后保存。
[0017]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:所述底物碘化硫代丁酸膽堿溶液的制備方法為:稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0ml蒸餾水，充分搖勻溶解后保存。
[0018]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:所述抑制率(％ ) = [(ΔΑ-ΔΑο)/ΔΑο] X 100%，其中:公式中ΛΑο表示對照溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量;ΛΑ表示樣品溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明利用在一定條件下、有機磷農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)的原理，快速檢測出蔬菜中的有機磷農(nóng)藥的殘留量，滿足市場對蔬菜中有機磷農(nóng)藥快速檢測的需求，有利于食品健康。本發(fā)明操作簡便，靈敏度高，檢測成本低。
【具體實施方式】
[0020]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。
[0021]實施例1
[0022]—種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，步驟如下:
[0023]I)提取:將蔬菜烘干，粉碎，獲得蔬菜粉末，將蔬菜粉末加入到離心管中，再加入聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液，在80kHz下超聲提取1min，并在轉(zhuǎn)速為3000rpm條件下離心15min，取上層萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的質(zhì)量與聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液的體積比為lg: 28mL，所述的聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙稀單叔辛基苯基醚的體積濃度為1.5% ；
[0024]2)富集凈化:向上層萃取液中加入無機鹽，攪拌混合均勻，再加入已活化的吸附劑，在60°C條件下水浴30min，然后在轉(zhuǎn)速為3000rpm離心15min，取上層溶液，向上層溶液中加入甲醇，過濾后獲得富集凈化液，其中，所述無機鹽的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為Ig:8mL，所述已活化的吸附劑的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg:4mL;所述的上層溶液與甲醇的體積比為I: I，所述已活化的吸附劑為活化活性炭；
[0025]3)空白樣品測試:取不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，向空白富集凈化液中加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在35°C下水浴20min，在轉(zhuǎn)速5000rpm下離心8min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量ΛΑο;
[0026]4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:另取5份不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，分別向其中加入有機磷農(nóng)藥標(biāo)品使其終濃度分別為0.01,0.KU 10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在35°C下水浴20min，在轉(zhuǎn)速5000rpm下離心8min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前的吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA1;然后將本步驟4)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量平均值，并計算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同濃度的有機磷農(nóng)藥溶液對酶的抑制率，分別對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取log1Q，以對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取1g1Q為底得到的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其抑制率為縱坐標(biāo)，并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；
[0027]5)待測蔬菜樣品的測定:取待測蔬菜樣品，按照步驟I)和步驟2)，獲取待測富集凈化液，向待測富集凈化液加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35°C下水浴20min，在轉(zhuǎn)速5000rpm下離心8min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)2,再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA2;然后將本步驟5)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量AA2的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，就可以計算出待測蔬菜中有機磷農(nóng)藥的殘留量。
[0028]所述顯色劑的制備方法為:稱取SOmg二硫化二硝基苯甲酸和7.Smg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至1ml后保存。
[0029]所述底物碘化硫代丁酸膽堿溶液的制備方法為:稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0ml蒸餾水，充分搖勻溶解后保存。
[0030]所述抑制率(％) = [(ΛΑ-ΛΑο)/ΛΑ()] X 100%，其中:公式中ΛΑο表示對照溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量;ΛΑ表示樣品溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量。
[0031]實施例2
[0032]—種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，步驟如下:
[0033]I)提取:將蔬菜烘干，粉碎，獲得蔬菜粉末，將蔬菜粉末加入到離心管中，再加入聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液，在10kHz下超聲提取20min，并在轉(zhuǎn)速為3500rpm條件下離心20min，取上層萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的質(zhì)量與聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液的體積比為lg: 35mL，所述的聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙稀單叔辛基苯基醚的體積濃度為2% ；
[0034]2)富集凈化:向上層萃取液中加入無機鹽，攪拌混合均勻，再加入已活化的吸附劑，在70°C條件下水浴35min，然后在轉(zhuǎn)速為3500rpm離心20min，取上層溶液，向上層溶液中加入甲醇，過濾后獲得富集凈化液，其中，所述無機鹽的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為Ig:10mL，所述已活化的吸附劑的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg:6mL;所述的上層溶液與甲醇的體積比為I: 1.5，所述已活化的吸附劑為活化硅藻土；
[0035]3)空白樣品測試:取不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，向空白富集凈化液中加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在40°C下水浴30min，在轉(zhuǎn)速6000rpm下離心1min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量ΛΑο;
[0036]4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:另取5份不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，分別向其中加入有機磷農(nóng)藥標(biāo)品使其終濃度分別為0.01,0.KU 10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在40°C下水浴30min，在轉(zhuǎn)速6000rpm下離心1min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前的吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA1;然后將本步驟4)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量平均值，并計算出上述0.01,0.KU 10、100mg/mL的不同濃度的有機磷農(nóng)藥溶液對酶的抑制率，分別對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取log1Q，以對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取1g1Q為底得到的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其抑制率為縱坐標(biāo)，并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；
[0037]5)待測蔬菜樣品的測定:取待測蔬菜樣品，按照步驟I)和步驟2)，獲取待測富集凈化液，向待測富集凈化液加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在40°C下水浴30min，在轉(zhuǎn)速6000rpm下離心1min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)2,再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA2;然后將本步驟5)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量AA2的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，就可以計算出待測蔬菜中有機磷農(nóng)藥的殘留量。
[0038]所述顯色劑的制備方法為:稱取SOmg二硫化二硝基苯甲酸和7.Smg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至1ml后保存。
[0039]所述底物碘化硫代丁酸膽堿溶液的制備方法為:稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0ml蒸餾水，充分搖勻溶解后保存。
[0040]所述抑制率(％) = [(ΛΑ-ΛΑο)/ΛΑ()] X 100%，其中:公式中ΛΑο表示對照溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量;ΛΑ表示樣品溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量。
[0041 ] 實施例3
[0042]—種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，步驟如下:
[0043]I)提取:將蔬菜烘干，粉碎，獲得蔬菜粉末，將蔬菜粉末加入到離心管中，再加入聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液，在90kHz下超聲提取15min，并在轉(zhuǎn)速為3300rpm條件下離心18min，取上層萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的質(zhì)量與聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液的體積比為lg: 35mL，所述的聚氧乙稀單叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙稀單叔辛基苯基醚的體積濃度為1.8% ；
[0044]2)富集凈化:向上層萃取液中加入無機鹽，攪拌混合均勻，再加入已活化的吸附劑，在65°C條件下水浴32min，然后在轉(zhuǎn)速為3200rpm離心18min，取上層溶液，向上層溶液中加入甲醇，過濾后獲得富集凈化液，其中，所述無機鹽的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為Ig:9mL，所述已活化的吸附劑的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg:5mL;所述的上層溶液與甲醇的體積比為I: 1.2，所述已活化的吸附劑為活化活性炭；
[0045]3)空白樣品測試:取不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，向空白富集凈化液中加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在38°C下水浴25min，在轉(zhuǎn)速5500rpm下離心9min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量ΛΑο;
[0046]4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:另取5份不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，分別向其中加入有機磷農(nóng)藥標(biāo)品使其終濃度分別為0.01,0.KU 10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在38°C下水浴25min，在轉(zhuǎn)速5500rpm下離心9min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前的吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA1;然后將本步驟4)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量平均值，并計算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同濃度的有機磷農(nóng)藥溶液對酶的抑制率，分別對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取log1Q，以對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取1g1Q為底得到的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其抑制率為縱坐標(biāo)，并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；
[0047]5)待測蔬菜樣品的測定:取待測蔬菜樣品，按照步驟I)和步驟2)，獲取待測富集凈化液，向待測富集凈化液加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在38°C下水浴25min，在轉(zhuǎn)速5500rpm下離心9min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)2,再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA2;然后將本步驟5)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量AA2的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，就可以計算出待測蔬菜中有機磷農(nóng)藥的殘留量。
[0048]所述顯色劑的制備方法為:稱取SOmg二硫化二硝基苯甲酸和7.Smg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至1ml后保存。
[0049]所述底物碘化硫代丁酸膽堿溶液的制備方法為:稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0ml蒸餾水，充分搖勻溶解后保存。
[0050]所述抑制率(％) = [(ΛΑ-ΛΑο)/ΛΑ()] X 100%，其中:公式中ΛΑο表示對照溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量;ΛΑ表示樣品溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量。
[0051]上面對本發(fā)明的較佳實施方式作了詳細(xì)說明，但是本發(fā)明并不限于上述實施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識范圍內(nèi)，還可以在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下作出各種變化。
【主權(quán)項】
1.一種檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，步驟如下: 1)提取:將蔬菜烘干，粉碎，獲得蔬菜粉末，將蔬菜粉末加入到離心管中，再加入聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液，在80-100kHz下超聲提取10-20min，并在轉(zhuǎn)速為3000-3500rpm條件下離心15_20min，取上層萃取液； 2)富集凈化:向上層萃取液中加入無機鹽，攪拌混合均勻，再加入已活化的吸附劑，在60-70 °C條件下水浴30-35min，然后在轉(zhuǎn)速為3000_3500rpm離心15_20min，取上層溶液，向上層溶液中加入甲醇，過濾后獲得富集凈化液； 3)空白樣品測試:取不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，向空白富集凈化液中加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35-40°C下水浴20-30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8_10min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量ΛΑο; 4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:另取5份不含農(nóng)藥的蔬菜，按照步驟I)和步驟2)，獲取空白富集凈化液，分別向其中加入有機磷農(nóng)藥標(biāo)品使其終濃度分別為0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勾后，在35-40 °C下水浴20_30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8-10min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)o，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前的吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA1;然后將本步驟4)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量八六工的平均值，并計算出上述0.01、0.1、1、10、lOOmg/mL的不同濃度的有機磷農(nóng)藥溶液對酶的抑制率，分別對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取log1Q，以對有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同濃度取1g1Q為底得到的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其抑制率為縱坐標(biāo)，并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程； 5)待測蔬菜樣品的測定:取待測蔬菜樣品，按照步驟I)和步驟2)，獲取待測富集凈化液，向待測富集凈化液加入0.1mL丁酰膽堿酯酶溶液和0.1mL顯色劑，搖勻后，在35-40°C下水浴20_30min，在轉(zhuǎn)速5000-6000rpm下離心8_10min，取上層清液，用分光光度計在412nm處測定反應(yīng)前的吸光度值A(chǔ)2,再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸膽堿溶液，搖勻，然后檢測并記錄反應(yīng)后的吸光度值，計算出反應(yīng)前吸光度值與反應(yīng)后的吸光度值的變化量AA2;然后將本步驟5)中的前述過程重復(fù)做三次，并求得變化量AA2的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，就可以計算出待測蔬菜中有機磷農(nóng)藥的殘留量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，步驟I)中所述的蔬菜粉末的質(zhì)量與聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液的體積比為lg: (28-35)mL;步驟I)中所述的聚氧乙烯單叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯單叔辛基苯基醚的體積濃度為1.5-3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，步驟2)中所述無機鹽的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg: (8-10)mL;步驟2)中所述已活化的吸附劑的質(zhì)量與上層萃取液的體積比為lg: (4-6)mL;所述的上層溶液與甲醇的體積比為1: (1-1.5)。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，步驟2)中所述已活化的吸附劑為活化活性炭或活化硅藻土。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，所述顯色劑的制備方法為:稱取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至I Oml后保存。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，所述底物碘化硫代丁酸膽堿溶液的制備方法為:稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0ml蒸餾水，充分搖勻溶解后保存。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，所述抑制率(%) = [(ΔΑ-ΔΑο)/ΔΑο] X 100%，其中:公式中ΛΑο表示對照溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量;ΛΑ表示樣品溶液反應(yīng)前后的吸光度的變化量。
【文檔編號】G01N21/78GK105891200SQ201610195132
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年3月31日
【發(fā)明人】蔣燦, 宋曉平
【申請人】山東五洲檢測有限公司