1.一種用于直腸癌體外診斷試劑盒,包括捕獲抗體,其特征在于:所述捕獲抗體是X型膠原蛋白α1制得的單克隆抗體,所述試劑盒還包括檢測抗體,所述檢測抗體為X型膠原蛋白α1制得的多克隆抗體;
其制備方法包括如下步驟:
(1) 抗原的制備:將X型膠原蛋白α1的基因克隆到真核表達載體,并在哺乳動物細胞中實現(xiàn)蛋白的表達,純化后得到所需的抗原,其中,所述抗原作為標準品用;
(2)捕獲抗體的制備:將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的單克隆抗體,所述單克隆抗體作為本試劑盒的捕獲抗體;
(3)檢測抗體的制備:將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的多克隆抗體,所述多克隆抗體作為本試劑盒的檢測抗體;
(4)捕獲抗體包被:
①.用碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液將濃度為 1μg/ml 的捕獲抗體包被 微量滴定板的孔;②.封蓋微量滴定板并在 4℃ 下孵育過夜;③. 棄去包被液,并用洗滌液洗滌微量滴定板兩次,每次在微孔中加入 200 μl PBST,在水槽上方輕輕甩動微量滴定板,除去洗滌液,在紙巾上輕拍微量滴定板,除去剩余的液滴,晾干放于4℃環(huán)境中備用;
(5)封閉和加樣:每孔添加 200μl 封閉緩沖液,封閉包被孔中剩余的蛋白質結合位點。