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雞白痢抗體乳膠凝集負篩選檢測試劑盒及制備方法和應用與流程

文檔序號:12061546閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種雞白痢沙門氏菌抗體乳膠凝集負篩選檢測試劑盒,其特征在于,包括沙門氏菌表面抗原InvJ重組蛋白致敏乳膠試劑和分泌蛋白SopA C端重組蛋白致敏乳膠試劑,所述的InvJ重組蛋白致敏乳膠試劑是由水溶性碳二亞胺將原核表達和純化后的沙門氏菌表面抗原InvJ重組蛋白共價偶聯(lián)到羧化乳膠顆粒的表面而得,所述的SopA C端重組蛋白致敏乳膠試劑是由水溶性碳二亞胺將原核表達和純化后的沙門氏菌分泌蛋白SopA C端重組蛋白共價偶聯(lián)到羧化乳膠顆粒的表面而得。

2.根據(jù)權利要求1所述的雞白痢沙門氏菌抗體乳膠凝集負篩選檢測試劑盒,其特征在于,所述的沙門氏菌表面抗原InvJ重組蛋白致敏乳膠試劑由下述方法制成:

A、將1mL 10wt%的乳膠原液分別用碳酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液離心洗滌后,用0.625mL 0.01M磷酸緩沖鹽溶液重懸羧化乳膠;

B、加入0.625mL 2wt%的水溶性碳二亞胺,37℃水平搖動3h,離心棄上清,用0.01M硼酸鹽緩沖液洗滌沉淀后將羧化乳膠重懸至1wt%;

C、在上述羧化乳膠溶液中加入等體積0.1125mg/mL的重組InvJ/His-tag融合蛋白溶液進行偶聯(lián),37℃水平搖動6h;

D、偶聯(lián)結束后用0.1M甘氨酸0.05mL室溫緩慢終止30min;離心,沉淀用1mL1wt%的BSA溶液封閉后,懸浮于0.5mL儲存液中保存,所述的存儲液含0.01M磷酸鹽緩沖液、5wt%甘油、0.01wt%牛血清白蛋白、0.1wt%疊氮鈉,制得InvJ重組蛋白致敏乳膠試劑。

3.根據(jù)權利要求1所述的雞白痢沙門氏菌抗體乳膠凝集負篩選檢測試劑盒,其特征在于,所述的沙門氏菌分泌蛋白SopA C端重組蛋白致敏乳膠試劑由下述方法制成:

A、將1mL 10wt%的乳膠原液分別用碳酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液離心洗滌后,用0.625mL 0.01M磷酸緩沖鹽溶液重懸羧化乳膠;

B、加入0.625mL 2wt%的水溶性碳二亞胺,37℃水平搖動3h,離心棄上清,用0.01M硼酸鹽緩沖液洗滌沉淀后將羧化乳膠重懸至1wt%;

C、在上述羧化乳膠溶液中加入等體積的0.225mg/mL的重組SopA-C/His-tag融合蛋白溶液進行偶聯(lián),37℃水平水平搖動6h;

D、偶聯(lián)結束后用0.05mL 0.1M甘氨酸室溫緩慢終止30min;離心,沉淀用1mL1wt%的BSA溶液封閉后,懸浮于0.5mL儲存液中保存,所述的存儲液含0.01M磷酸鹽緩沖液、5wt%甘油、0.01wt%牛血清白蛋白、0.1wt%疊氮鈉,制得SopA C端重組蛋白致敏乳膠試劑。

4.權利要求1所述的雞白痢沙門氏菌抗體乳膠凝集負篩選檢測試劑盒在檢測雞白痢沙門氏菌感染抗體中的應用。

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