1.一種可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器,其特征在于,在一組石墨烯量子點(diǎn)表面修飾上與微囊藻毒素核酸適配體DNA互補(bǔ)的一種探針DNA1,在另一組石墨烯量子點(diǎn)表面修飾上與微囊藻毒素核酸適配體DNA互補(bǔ)的另一種探針DNA2,然后將兩種石墨烯量子點(diǎn)溶液混合均勻后再加入微囊藻毒素核酸適配體DNA,通過(guò)DNA雜交使石墨烯量子點(diǎn)聚集,發(fā)生激子能量轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致石墨烯量子點(diǎn)熒光信號(hào)淬滅;隨后加入微囊藻毒素,微囊藻毒素與核酸適配體DNA特異性結(jié)合,結(jié)構(gòu)發(fā)生轉(zhuǎn)變,引起石墨烯量子點(diǎn)聚集體解組裝而重新分散,體系熒光強(qiáng)度恢復(fù)。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器,其特征在于,兩組石墨烯量子點(diǎn)等量,探針DNA1和探針DNA2等摩爾量。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器,其特征在于,加入微囊藻毒素?zé)晒鈴?qiáng)度恢復(fù)后,再加入微囊藻毒素核酸適配體DNA,使得石墨烯量子點(diǎn)熒光信號(hào)淬滅,然后再加入微囊藻毒素?zé)晒鈴?qiáng)度恢復(fù),如此可循環(huán)使用。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器,其特征在于,微囊藻毒素包括但不限于微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-YR、微囊藻毒素-LA和微囊藻毒素-RR,不同的微囊藻毒素采用各自對(duì)應(yīng)的核酸適配體DNA以及與核酸適配體DNA互補(bǔ)的兩種不同的探針DNA1和DNA2。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器,其特征在于,微囊藻毒素為微囊藻毒素-LR時(shí),微囊藻毒素-LR適配體DNA結(jié)構(gòu)優(yōu)選為5’-GGCGCCAAACAGGACCACCATGACAATTACCCATACCACCTCATTATGCCCCATCTCCGC-3’;互補(bǔ)的探針DNA1結(jié)構(gòu)優(yōu)選為P1DNA,P1DNA結(jié)構(gòu)為5’-NH2-C6H12-CTGTGACGGTAATT-3’,探針DNA12結(jié)構(gòu)優(yōu)選為P2DNA,P2DNA結(jié)構(gòu)為5’-TGGTATGGTCACAG-C6H12-NH2-3’。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的可循環(huán)使用的微囊藻毒素?zé)晒膺m配體傳感器的應(yīng)用方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)DNA雜交使石墨烯量子點(diǎn)聚集,熒光信號(hào)猝滅:首先利用TE緩沖液分別離心溶解粉末狀微囊藻毒素對(duì)應(yīng)的適配體DNA以及與適配體DNA互補(bǔ)的兩種不同的探針DNA1和DNA2;然后通過(guò)水熱法合成出石墨烯量子點(diǎn),并在兩組石墨烯量子點(diǎn)表面分別修飾與微囊藻毒素核酸適配體DNA互補(bǔ)的兩種不同探針DNA1和DNA2,然后將表面分別修飾有探針DNA1和DNA2的兩種石墨烯量子點(diǎn)溶液混合,再加入微囊藻毒素核酸適配體DNA,通過(guò)DNA雜交引起石墨烯量子點(diǎn)發(fā)生聚集,熒光信號(hào)猝滅;
(2)微囊藻毒素的熒光檢測(cè):把不同標(biāo)準(zhǔn)濃度的微囊藻毒素加入到步驟(1)熒光信號(hào)淬滅的溶液中,在室溫條件下孵育一段時(shí)間,設(shè)定熒光分光光度計(jì)激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)及入射發(fā)射狹縫,取孵育好的反應(yīng)溶液加入石英比色皿中檢測(cè),得出不同濃度的微囊藻毒素對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度,制備出曲線;
(3)熒光檢測(cè)微囊藻毒素的方法,步驟如下:把含微囊藻毒素的樣品加入到對(duì)應(yīng)的石墨烯量子點(diǎn)熒光信號(hào)淬滅溶液中,在室溫條件下孵育一段時(shí)間,設(shè)定與步驟(2)一樣的熒光分光光度計(jì)激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)及入射發(fā)射狹縫,取孵育好的反應(yīng)溶液加入石英比色皿中檢測(cè),得出微囊藻毒素的熒光強(qiáng)度,根據(jù)步驟(2)微囊藻毒素濃度和熒光強(qiáng)度的關(guān)系曲線,得出待測(cè)微囊藻毒素的濃度,進(jìn)一步計(jì)算轉(zhuǎn)換成含微囊藻毒素的樣品中微囊藻毒素的含量。
7.按照權(quán)利要求6的應(yīng)用方法,其特征在于,所述步驟(1)中所述的TE緩沖液組成為40mMTris,2mM EDTA,pH=7.4。
8.按照權(quán)利要求6的應(yīng)用方法,其特征在于,步驟(2)熒光分光光度計(jì)激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)為315nm,入射發(fā)射狹縫為5.0nm,發(fā)射譜檢測(cè)范圍為375-600nm。微囊藻毒素-LR的標(biāo)準(zhǔn)濃度為0-80ng/mL。
9.按照權(quán)利要求6的應(yīng)用方法,其特征在于,步驟(1)中DNA雜交使石墨烯量子點(diǎn)聚集、熒光信號(hào)猝滅的方法,步驟如下:合成出的石墨烯量子點(diǎn)溶液,然后加入N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽,調(diào)節(jié)溶液pH為5,反應(yīng)一段時(shí)間后,分別加入兩種探針DNA1溶液和DNA2溶液,調(diào)節(jié)溶液pH為7.4,再反應(yīng)一段時(shí)間;將修飾有兩種探針的石墨烯量子點(diǎn)溶液混合,然后再加入微囊藻毒素適配體DNA,在室溫下混合均勻,孵育一段時(shí)間,使石墨烯量子點(diǎn)發(fā)生聚集,體系熒光信號(hào)猝滅。
10.按照權(quán)利要求9的應(yīng)用方法,其特征在于,步驟(1)中DNA雜交使石墨烯量子點(diǎn)聚集、熒光信號(hào)猝滅的方法,步驟如下:合成出0.1mg/mL的石墨烯量子點(diǎn)溶液,加入N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽,調(diào)節(jié)溶液pH為5,反應(yīng)30min后,均分裝在兩個(gè)容器中,分別加入與微囊藻毒素適配體DNA溶液互補(bǔ)的探針DNA1溶液和DNA2溶液(P1DNA溶液和P2DNA溶液),然后將修飾有兩種探針的石墨烯量子點(diǎn)溶液混合,然后再加入微囊藻毒素適配體DNA溶液,在室溫下混合均勻,孵育一段時(shí)間,使石墨烯量子點(diǎn)發(fā)生聚集,體系熒光信號(hào)猝滅;
與微囊藻毒素適配體DNA溶液互補(bǔ)的兩種探針溶液以及適配體DNA溶液濃度均為100μM,石墨烯量子點(diǎn)溶液:N-羥基琥珀酰亞胺:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽:與適配體DNA互補(bǔ)的探針DNA1溶液:DNA2溶液為10mL:(20-25)mg:(18-20mg):24μL:24μL。