1、本發(fā)明涉及一種二肽基肽酶-4抑制劑的檢測(cè)方法，尤其是涉及一種琥珀酸曲格列汀制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

2、琥珀酸曲格列汀(Trelagliptin Succinate)，其化學(xué)名稱為：：2-({6-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-3-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶基-1(2H)-基}甲基)-4-氟苯甲腈一琥珀酸鹽

3、其結(jié)構(gòu)式為：

4、琥珀酸曲格列汀雜質(zhì)Ⅲ的結(jié)構(gòu)式為：

5、Trelagliptin(曲格列汀)是一種每周一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制劑，通過(guò)選擇性、持續(xù)性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一種酶，能夠引發(fā)腸促胰島素(胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)和葡萄糖依賴性促胰島素多肽(GIP))的失活，而這2種腸降胰島素在血糖調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。抑制DPP-4，能夠增加血糖水平依賴性胰島素分泌，從而控制血糖水平。

6、琥珀酸曲格列汀制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法雖有報(bào)道，但未見(jiàn)雜質(zhì)Ⅲ回收率的相關(guān)研究，其檢測(cè)方法的難度在于雜質(zhì)Ⅲ的回收率受溶劑影響較大，回收率不容易達(dá)到藥典規(guī)定要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

7、本發(fā)明的目的是提供一種能測(cè)定琥珀酸曲格列汀制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法。

8、本發(fā)明提供一種琥珀酸曲格列汀制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，采用紫外檢測(cè)器，該方法采用的色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動(dòng)相A為氯化銨緩沖液，流動(dòng)相B為甲醇-乙腈(15∶85)，且所述的氯化銨緩沖液與乙腈的體積比為15∶85～85∶15，氯化銨緩沖液的pH值為3.5～5.0，氯化銨緩沖液的濃度為0.01～0.1mol/L，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，甲酸水的濃度為0.01～2.0％。

9、所述的氯化銨緩沖液為氯化銨和甲酸的水溶。氯化銨和甲酸是改性劑，通常加在反相或離子對(duì)流動(dòng)相中，增加離子強(qiáng)度，減少樣品中的拖尾峰。

10、所述的氯化銨緩沖液中氯化銨和甲酸的質(zhì)量體積比為1∶10～3∶10。

11、所述的氯化銨緩沖液為0.03mol/L。

12、所述的氯化銨緩沖液的pH值為4.0。

13、所述的氯化銨緩沖液的pH值用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)。

14、所述的配樣溶劑甲酸水的濃度為0.2％。

15、本發(fā)明的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，步驟如下：

(1)雜質(zhì)儲(chǔ)備液：取雜質(zhì)Ⅱ、雜質(zhì)Ⅲ、雜質(zhì)Ⅶ和雜質(zhì)Ⅺ各10mg，琥珀酸曲格列汀對(duì)照品14mg，精密稱定，分別置25ml量瓶中，加50％乙腈水溶液適量，超聲使溶解，加50％乙腈水溶液稀釋至刻度，搖勻。取雜質(zhì)XⅢ對(duì)照品10mg，置25ml量瓶中，加乙腈適量，超聲使溶解，加乙腈稀釋定容至刻度，搖勻，即得各雜質(zhì)儲(chǔ)備液。

(2)混合對(duì)照溶液：精密量取各雜質(zhì)儲(chǔ)備液2.5ml，置同一100ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照溶液。

(3)供試品溶液：取本品適量，加溶劑適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

(4)取混合對(duì)照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰峰高約為滿量程的20％，再精密量取供試品溶液和混合對(duì)照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)；

16、色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(Phenomenex 250×4.6mm，5μm)，以30mmol/L氯化銨(甲酸0.1％，1mol/L NaOH溶液調(diào)pH4.0)作為流動(dòng)相A，甲醇：乙腈＝15：85為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫，流速為每分鐘1.0ml，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，柱溫為30℃。

17、其中所述有關(guān)物質(zhì)是指琥珀酸曲格列汀合成過(guò)程中帶入的雜質(zhì)，如：溶劑，中間體，副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物等，雜質(zhì)成分為限制成分，測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的目的在于限制其含量。

18、本發(fā)明的有益技術(shù)效果：

(1)被分析物中各成分間分離徹底，可操作性強(qiáng)，分析方法的專(zhuān)屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和靈敏度高，特別是雜質(zhì)Ⅲ的準(zhǔn)確度高，適用性強(qiáng)，為包裝藥品安全、有效、可控提供依據(jù)。

(2)主峰峰形良好，主峰前后雜質(zhì)峰與主峰分離度良好，色譜條件的系統(tǒng)適用性良好。

(3)該方法中各雜質(zhì)的平均回收率均在92.0％～108.0％之間，RSD均小于2.0％。

附圖說(shuō)明：

1、圖1為分離度溶液色譜圖

2、圖2為供試品溶液色譜圖

3、圖3為氧化破壞溶液色譜圖

4、圖4為回收率溶液色譜圖

5、圖5為檢測(cè)限溶液色譜圖

具體實(shí)施方式：

1以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。

2實(shí)施例1

3琥珀酸曲格列汀的有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法

4實(shí)驗(yàn)儀器及色譜條件：

5島津高效液相色譜儀，菲羅門(mén)C18色譜柱(5μm，250×4.6mm)，水相A(30mmol/L氯化銨水溶液，0.1％甲酸，氫氧化鈉調(diào)pH至4.0)-有機(jī)相B(甲醇∶乙腈＝15∶85)進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；流速為0.8～1.2ml/min；進(jìn)樣量為5～100μl。

試劑：乙腈(HPLC級(jí))來(lái)自MERDA公司，水為娃哈哈水。

5.1配樣溶劑的選擇

我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較了不同的配樣溶劑(水、0.1％甲酸水、0.2％甲酸水、0.5％甲酸水、流動(dòng)相A、20％乙腈水、0.2％磷酸水)對(duì)雜質(zhì)Ⅲ回收率的影響，溶劑為水時(shí)的回收率為34.22％，溶劑為0.1％甲酸水時(shí)的回收率為97.80％，溶劑為0.2％甲酸水時(shí)的回收率為99.64％，溶劑為0.5％甲酸水時(shí)的回收率為99.58％，溶劑為流動(dòng)相A時(shí)的回收率為95.51％，流動(dòng)相為20％乙腈水時(shí)的回收率為58.06％，流動(dòng)相為0.2％磷酸水時(shí)的回收率為102.56％。

5.2檢測(cè)條件的驗(yàn)證

5.2.1專(zhuān)屬性

取樣品適量，加0.2％甲酸水溶解并稀釋制成濃度為2mg/ml的溶液，加30％雙氧水約1ml，室溫放置3天，取20μl注入色譜儀，記錄色譜圖(見(jiàn)圖3)。結(jié)果表明，在此檢測(cè)條件下，破壞后的樣品中其他組分與主峰均可達(dá)到基線分離，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

5.2.2檢測(cè)限

取雜質(zhì)Ⅱ、雜質(zhì)Ⅲ、雜質(zhì)Ⅶ和雜質(zhì)Ⅺ各10mg，琥珀酸曲格列汀對(duì)照品14mg，精密稱定，分別置25ml量瓶中，加50％乙腈水溶液適量，超聲使溶解，加50％乙腈水溶液稀釋至刻度，搖勻。取雜質(zhì)XIII對(duì)照品10mg，置25ml量瓶中，加乙腈適量，超聲使溶解，加乙腈稀釋定容至刻度，搖勻，即得各雜質(zhì)儲(chǔ)備液。精密量取各雜質(zhì)儲(chǔ)備液2.5ml，置同一100ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照溶液。根據(jù)響應(yīng)值計(jì)算各雜質(zhì)的信噪比，配制各雜質(zhì)響應(yīng)值為基線噪音3倍的溶液，各雜質(zhì)的最低檢出量均小于0.03μg/mL

5.2.3回收率

分別配制各雜質(zhì)濃度為80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL3個(gè)濃度的樣品，取20μl注入色譜儀，計(jì)算回收率。該方法的平均回收率均在90.0％～108.0％之間，RSD均小于2.0％。

上述雖然結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范

圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。