本發(fā)明涉及分析化學領域，具體涉及一種測定曲格列汀原料中有關物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)：
在抗糖尿病藥物中，口服給藥的小分子化合物DPP-IV抑制劑研究最為活躍。DPP-IV是體內(nèi)的一種酶，能夠引發(fā)腸促胰島素，即胰葡萄糖素樣肽-1和葡萄糖依賴性促胰島素多肽的失活，而這2種腸降胰島素在血糖調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。抑制DPP-IV能夠增加血糖水平依賴性胰島素分泌，從而控制血糖水平。DPP-IV抑制劑類藥物被命名為“列汀類”，此類藥物共有17個，其中的曲格列汀由武田制藥開發(fā)，于2014年首次在日本獲批上市，是一種超長效的DPP-IV抑制劑，每周只需要口服一次，可產(chǎn)生持續(xù)的DPP-IV抑制作用，不僅降糖效果理想，同時具有不增加體重和不會引起低血糖反應等優(yōu)越性。曲格列汀(Trelagliptin)化學名稱為：2-[6-3-氨基-哌啶-1-基]-3-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶-1-基甲基]-4-氟-芐腈。其化學結(jié)構(gòu)式如下：在琥珀酸曲格列汀中我們發(fā)現(xiàn)了工藝雜質(zhì)，A、N、O、V、W，結(jié)構(gòu)式如下，在降解實驗中發(fā)現(xiàn)了降解雜質(zhì)P和R。以上雜質(zhì)，即有關物質(zhì)均會影響到藥品的純度和質(zhì)量，因此需要建立合適的分析方法對雜質(zhì)的含量加以控制。曲格列汀中潛在雜質(zhì)的名稱和化學結(jié)構(gòu)信息如下：中國專利申請(申請公布號CN104237421A)提供一種琥珀酸曲格列汀及其制劑的有關物質(zhì)檢測方法，采用二極管陣列檢測器，該方法采用的色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動相A為磷酸鹽緩沖液，流動相B為乙腈，且所述的磷酸鹽緩沖液與乙腈的體積比為60∶40～85∶15，磷酸鹽緩沖液的pH值為5.0～5.5，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.05～0.1mol/L，檢測波長為278nm。但該方法存在以下問題：1.該專利中未給出任何已知雜質(zhì)，無法判斷該方法的適用性；2.該分析方法的波長參數(shù)設置為278nm，不能涵蓋所有雜質(zhì)，經(jīng)過對各個已知雜質(zhì)的光譜圖分析，雜質(zhì)P在278nm沒有任何紫外吸收。以上問題表明，該分析方法無法保證對本品的質(zhì)量控制。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種測定琥珀酸曲格列汀原料中有關物質(zhì)的方法，所述方法采用高效液相色譜法，將樣品溶液注入高效液相色譜儀，完成曲格列汀原料中有關物質(zhì)的測定，色譜條件為：色譜柱：以十八烷基鍵合硅膠為填料的色譜柱；流動相：流動相A與流動相B均為酸性水溶液與有機溶劑的混合溶液，流動相A的體積百分比與流動相B的體積百分比的和始終保持為100％，進行線性梯度洗脫；所述線性洗脫梯度如下：進一步地，所述色譜柱為Kromasil公司的100-5C18色譜柱。進一步地，所述流動相A為酸性水溶液與有機溶劑體積比為90∶10的混合溶液；流動相B為酸性水溶液與有機溶劑體積比為40∶60的混合溶液。進一步地，所述酸性水溶液為三氟乙酸或高氯酸水溶液，并用堿調(diào)節(jié)溶液pH值至3.0，所述酸性水溶液中三氟乙酸或高氯酸的體積百分比為0.1％。具體地，所述酸性水溶液優(yōu)選為高氯酸水溶液。進一步地，所述有機溶劑為甲醇或乙腈。具體地，所述有機溶劑優(yōu)選乙腈。進一步地，所述流動相的流速為0.8ml/min～1.0ml/min；所述色譜柱的溫度為35℃～40℃；所述方法還包括檢測波長，所述檢測波長為197nm～235nm。具體地，所述流動相的流速優(yōu)選1.0ml/min；所述色譜柱的溫度優(yōu)選40℃；所述檢測波長優(yōu)選224nm。進一步地，所述方法還包括供試品溶液的制備：取琥珀酸曲格列汀原料藥樣品適量，用所述酸性水溶液溶解并稀釋樣品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的樣品溶液。本發(fā)明所述的測定方法，可按照以下方法實現(xiàn)：(1)取琥珀酸曲格列汀原料藥樣品適量，用0.1％高氯酸水溶液(pH3.0)溶解樣品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的樣品溶液。(2)設置流動相的流速為0.8ml/min～1.0ml/min，檢測波長為197nm～235nm，色譜柱溫度為35℃～40℃。(3)取(1)的樣品溶液10μl，注入液相色譜儀，完成琥珀酸曲格列汀原料藥中有關物質(zhì)的分離測定。其中：高效液相色譜儀的型號，無特別要求，本發(fā)明采用的色譜儀為島津公司的儀器：LC-20AD，色譜柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)，流動相A為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流動相B為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表1進行梯度洗脫；優(yōu)選流速為1.0ml/min；優(yōu)選柱溫為40℃；優(yōu)選檢測波長為224nm；進樣體積10μl。<表1>本發(fā)明采用100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)色譜柱，通過優(yōu)化流動相梯度洗脫程序，實現(xiàn)對琥珀酸曲格列汀原料藥中有關物質(zhì)，即所述雜質(zhì)A、N、O、V、W、P和R的有效分離。本發(fā)明解決了琥珀酸曲格列汀原料藥中有關物質(zhì)的分離測定問題，從而保證了琥珀酸曲格列汀原料藥的質(zhì)量可控。為了更好地理解和實施，下面結(jié)合附圖詳細說明本發(fā)明。附圖說明圖1為實施例1空白溶液的高效液相色譜圖；圖2為實施例1琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖3為實施例2波長197nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖4為實施例2波長197nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖5為實施例2波長197nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖；圖6為實施例2波長224nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖7為實施例2波長224nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖8為實施例2波長224nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖；圖9為實施例2波長235nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖10為實施例2波長235nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖11為實施例2波長235nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖；圖12實施例3波長197nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖13實施例3波長197nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖14實施例3波長197nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖；圖15實施例3波長224nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖16實施例3波長224nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖17實施例3波長224nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖；圖18實施例3波長235nm空白溶液的高效液相色譜圖；圖19實施例3波長235nm琥珀酸曲格列汀原料藥混合雜質(zhì)對照品高效液相色譜圖；圖20實施例3波長235nm琥珀酸曲格列汀原料藥樣品測定高效液相色譜圖。具體實施方式空白溶液：0.1％(v/v)高氯酸水溶液，用三乙胺調(diào)節(jié)溶液pH值至3.0。雜質(zhì)對照品儲備液：分別精密稱取雜質(zhì)A、N、O、V、W、P和R的對照品約10mg，分別置于200ml容量瓶中，用空白溶液溶解并稀釋至刻度，混勻?；旌想s質(zhì)對照品溶液：取琥珀酸曲格列汀供試品約25mg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，用適量空白溶液溶解后，精密加入雜質(zhì)A、N、O、V、W、P和R的儲備液各0.5ml，用空白溶液定容至刻度，混勻。實施例1儀器與實驗條件高效液相色譜儀：島津LC-20AD色譜柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)流動相A為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流動相B為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表2梯度洗脫。<表2>流速為1.0ml/min；柱溫40℃；檢測波長224nm；進樣體積10μl。實驗步驟：分別取空白溶液和混合雜質(zhì)對照品溶液，按上述實驗條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖1和附圖2。圖2中為曲格列汀和各個已知雜質(zhì)對應的色譜圖，由圖可以看出，曲格列汀與其各個已知雜質(zhì)能夠達到基線分離，符合雜質(zhì)測定要求。實施例2儀器與實驗條件高效液相色譜儀：島津LC-20AD色譜柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)流動相A為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流動相B為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表3線性梯度洗脫。<表3>流速為1.0ml/min；柱溫40℃；檢測波長197nm、224nm、235nm；進樣體積10μl。實驗步驟：取琥珀酸曲格列汀原料藥劑樣品約25mg(WY022-12批)，置50ml容量瓶中，用空白溶液溶解樣品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的樣品溶液。分別取空白溶液、混合雜質(zhì)對照品溶液和琥珀酸曲格列汀原料藥樣品溶液，按上述實驗條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，附圖3～5為波長197nm下的檢測圖譜，附圖6～8為波長224nm下的檢測圖譜，附圖9～11為波長224nm下的檢測圖譜。各檢測波長下，空白圖譜無干擾，混合雜質(zhì)對照品溶液圖譜中各雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，可滿足分離要求；各樣品檢測圖譜中主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離良好。實施例3儀器與實驗條件高效液相色譜儀：島津LC-20AD色譜柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)流動相A為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流動相B為用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表4線性梯度洗脫。<表4>流速為0.8ml/min；柱溫35℃；檢測波長197nm、224nm、235nm；進樣體積10μl。實驗步驟：取琥珀酸曲格列汀原料藥樣品約25mg(WY022-12批)，置50ml容量瓶中，用空白溶液溶解樣品，配制成每1ml含曲格列汀0.5mg的樣品溶液。分別取空白溶液、混合雜質(zhì)對照品溶液和琥珀酸曲格列汀原料藥樣品溶液，按上述實驗條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，附圖12～14為波長197nm下的檢測圖譜，附圖15～17為波長224nm下的檢測圖譜，附圖18～20為波長224nm下的檢測圖譜。各檢測波長下，空白圖譜無干擾，混合雜質(zhì)對照品溶液圖譜中各雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，可滿足分離要求；各樣品檢測圖譜中主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離良好。從實驗結(jié)果可知，本發(fā)明公開的有關物質(zhì)分析方法，可以將曲格列汀和其他的雜質(zhì)完全分離，并可以準確測定各個雜質(zhì)的含量，從而有效地控制琥珀酸曲格列汀的產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明并不局限于上述實施方式，如果對本發(fā)明的各種改動或變形不脫離本發(fā)明的精神和范圍，倘若這些改動和變形屬于本發(fā)明的權(quán)利要求和等同技術(shù)范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動和變形。