本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量的測定方法。

背景技術(shù)：

超微粉碎是近年來迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)高新技術(shù)，用于中藥領(lǐng)域能把原材料加工成微米甚至納米級的微粉。超微粉碎中藥最大的優(yōu)勢是有效提高了藥物的生物利用度。從藥物學(xué)原理來說，藥物的溶出速度與藥物的顆粒比表面積呈正相關(guān)，而比表面積與顆粒粒徑成反比。因此，藥物的粒徑越小，則其表面積越大，越有助于藥物有效成分的溶出。超微粉碎中藥及其顆粒達(dá)到超細(xì)粉末的水平，其比表面積顯著增大，藥物在胃腸道里的溶解度明顯增加，從而增加藥物的生物利用度，并加快藥物起效時(shí)間。此外，由于納米或微米粒的粘附性及小的粒徑，既有利于延長局部用藥時(shí)滯留性的增加，也有利于延長藥物與腸壁接觸時(shí)間，加大接觸面積，從而提高藥物口服吸收的生物利用度。傳統(tǒng)中藥飲片往往采用煎煮的方法，目前雖已進(jìn)行了中藥制劑的改良，但只是提取中藥所含的小部分成分，占總成分的10％-30％，藥效大受影響。使用超微粉碎技術(shù)可充分提取中藥成分，具有吸收快及使用方便等優(yōu)點(diǎn)。

將超微粉碎技術(shù)應(yīng)用于菊三七，制得菊三七超微粉，但是其中有效成分千里光寧生物堿沒有規(guī)定相應(yīng)的含量測定方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量的測定方法，解決菊三七超微粉中千里光寧生物堿無相應(yīng)含量測定方法的問題。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量的測定方法，該方法為高效液相色譜法，利用C₁₈色譜柱實(shí)施分離，并利用蒸發(fā)光散射檢測器實(shí)施檢測；

其色譜條件為：

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；

流動(dòng)相：體積百分比為15-25:75-85的乙腈和0.2％磷酸溶液的混合；

流動(dòng)相流速：0.8-1.2ml/min；

檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器；

進(jìn)樣體積：10μl；

漂移管溫度：90℃，氣體流速：30psi；

包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備：取千里光寧生物堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

(2)供試品溶液的制備：取菊三七超微粉末約1g，精密稱定置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻?yàn)V過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得；

(3)測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

優(yōu)選的,所述的乙腈和0.2％磷酸溶液的體積百分比為20:80。

優(yōu)選的,所述的流動(dòng)相流速為1.0ml/min。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量的測定方法具有以下優(yōu)勢：

本發(fā)明所述的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量的測定方法對菊三七超微粉中的有效成分千里光寧生物堿進(jìn)行含量測定方法進(jìn)一步探索，并確定一種更為簡單易操作的穩(wěn)定的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量測定方法，為千里光寧生物堿超微粉的質(zhì)量控制提供可靠的有效成分含量測定方法。

附圖說明

構(gòu)成本發(fā)明的一部分的附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1為本發(fā)明實(shí)施例所述的千里光寧生物堿對照品的HPLC檢測圖譜；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例所述的千里光寧生物堿含量與峰面積的線性關(guān)系圖。

具體實(shí)施方式

除非另外說明，本文中所用的術(shù)語均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)理解的含義，為了便于理解本發(fā)明，將本文中使用的一些術(shù)語進(jìn)行了下述定義。

下面結(jié)合實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。

實(shí)施例1

(1)色譜條件

色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，用Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流動(dòng)相是乙睛-0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱溫為35℃，蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為90℃，氣體流速為30psi，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量為10μl。

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加色譜甲醇超聲溶解后稀釋定容至刻度線，作為千里光寧標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液，逐級稀釋制成千里光寧含量為10、20、50、100、150、200ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別注入步驟(1)設(shè)置的進(jìn)入工作狀態(tài)的HPLC裝置的色譜柱10μl，分別計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，以濃度的對數(shù)log10(C)為橫坐標(biāo)X，以峰面積的對數(shù)log10(A)為縱坐標(biāo)Y，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝1.003X+1.301,R²＝0.9999，結(jié)果表明千里光寧在10-200ug/ml范圍內(nèi)，峰面積和濃度呈以上線性關(guān)系。

(2)檢測菊三七超微粉中千里光寧的含量

取菊三七超微粉約1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm有機(jī)濾頭過濾。注入步驟(1)設(shè)置的進(jìn)入工作狀態(tài)的HPLC裝置的色譜柱10μl，計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，帶入步驟(2)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出上機(jī)待測的菊三七中千里光寧溶液的濃度，再通過樣品的重量計(jì)算出千里光寧的含量，千里光寧含量的計(jì)算方法如下：

菊三七中千里光寧的含量(mg/g)＝待測菊三七中千里光寧溶液的濃度*稀釋因子/菊三七取樣重量*100％

根據(jù)上式計(jì)算出千里光寧的含量為0.21％(稀釋因子為樣品稀釋的倍數(shù))。

(3)精密度試驗(yàn)

對同一菊三七超微粉中千里光寧生物堿樣品，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積如表1所示：

表1菊三七超微粉中千里光寧含量測定方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

由結(jié)果可見，菊三七超微粉中千里光寧的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.94％，表明本方法的進(jìn)樣精密度良好。

(4)加樣回收率試驗(yàn)

供試品溶液的制備：精密稱取菊三七超微粉約1g 6份，置圓底燒瓶中，分別加入千里光寧生物堿對照品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

對照品溶液：取千里光寧生物堿對照品適量，精密稱定，加乙腈制成每1ml含50μg的溶液，即得。

表2千里光寧生物堿回收率試驗(yàn)結(jié)果

由結(jié)果可見，菊三七超微粉中千里光寧的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.97％，表明本方法的回收率良好。

實(shí)施例2

(1)對江西德興產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量進(jìn)行檢測

檢測儀器為Agilent C₁₈，DAD檢測器，色譜柱Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流動(dòng)相是乙睛-0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱溫為35℃，蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為90℃，氣體流速為30psi。自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量為10μl。

對照品溶液的制備：取千里光寧生物堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成，每1ml含50.00μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取江西都昌產(chǎn)地的菊三七超微粉，稱取三份1.0009g、1.0012g、1.0017g，分別置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

經(jīng)計(jì)算江西德興產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量結(jié)果見表3。

表3江西德興產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量測定結(jié)果

(2)對湖北神農(nóng)架產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量進(jìn)行檢測檢測儀器為Agilent C₁₈，DAD檢測器，色譜柱Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流動(dòng)相是乙睛一0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱溫為35℃，蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為90℃，氣體流速為30psi。自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量為10μl。

對照品溶液的制備：取千里光寧生物堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50.00μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取湖北神農(nóng)架產(chǎn)地的菊三七超微粉，稱取三份1.0021g、1.0018g、1.0002g，分別置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻?yàn)V過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)右译嫒芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

經(jīng)計(jì)算湖北神農(nóng)架產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量結(jié)果見表4。

表4湖北神農(nóng)架產(chǎn)地的菊三七超微粉中千里光寧生物堿含量測定結(jié)果

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。