本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，具體地說涉及利伐沙班片有關物質(zhì)的檢測方法。
背景技術：
：利伐沙班，Rivaroxaban，其化學名稱為5-氯-N-({(5S)-2-氧-3-[4-(3-氧代嗎啉-4-基)苯基]-1,3-噁唑啉-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺。利伐沙班片結構式為：利伐沙班的制劑是一種高選擇性，直接抑制因子Xa的口服藥物。通過抑制因子Xa可以中斷凝血瀑布的內(nèi)源性和外源性途徑，抑制凝血酶的產(chǎn)生和血栓形成，對血小板聚集沒有直接作用。利伐沙班的合成工藝如下：根據(jù)合成工藝可以推斷出利伐沙班可能存在的有關物質(zhì)，詳見下表：雜質(zhì)序號化學結構雜質(zhì)1.雜質(zhì)2.雜質(zhì)3.雜質(zhì)4.雜質(zhì)5.雜質(zhì)6.雜質(zhì)7.雜質(zhì)8.雜質(zhì)9.雜質(zhì)10.雜質(zhì)11.雜質(zhì)12.雜質(zhì)13.雜質(zhì)14.雜質(zhì)15.目前文獻J.Org.Chem.1981,46,175-177報道了雜質(zhì)1、雜質(zhì)15及其定向合成的方法；專利CN103896933報道了雜質(zhì)2及其定向合成的方法；文獻中國醫(yī)藥工業(yè)雜志ChineseJournalofPhannaceuticals2014，45(4)報道了雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)7、雜質(zhì)8、雜質(zhì)9和雜質(zhì)13及其定向合成的方法；專利WO2012/035057A2也報道了雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5及其定向合成的方法；專利WO2004/060887和WO/2013/156936報道了雜質(zhì)14的合成方法。利伐沙班有關物質(zhì)檢測的難度在于：利伐沙班在合成過程中可能存在的有關物質(zhì)種類較多，為了更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，開發(fā)新的檢測方法對各有關物質(zhì)進行有效控制，具有實際的重要意義。由于各有關物質(zhì)種類較多，若開發(fā)一種方法能將所有的有關物質(zhì)一次性檢測完，將大大提高效率，節(jié)省能源。但有關物質(zhì)之間極性差異巨大，雜質(zhì)1、雜質(zhì)12均為極性較大的雜質(zhì)，在色譜系統(tǒng)中保留較弱或幾乎無保留；雜質(zhì)10、雜質(zhì)11極性較小，在色譜系統(tǒng)中保留極強，不易被洗脫。經(jīng)檢索，未查到利伐沙班片有關物質(zhì)的檢測方法。故開發(fā)一種高效液相色譜法，能夠將利伐沙班中各有關物質(zhì)與溶劑進行有效的分離，分析時間短，從而實現(xiàn)了對利伐沙班有關物質(zhì)有效控制，保證了利伐沙班的質(zhì)量控制，具有現(xiàn)實意義，從而有效解決了上述問題。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種利伐沙班片有關物質(zhì)的檢測方法，不僅實現(xiàn)了各有關物質(zhì)與利伐沙班均達到基線分離，極性較大和較小的有關物質(zhì)均能有效的檢出，操作簡便快捷，分析時間短，成本低，能有效的控制利伐沙班片的有關物質(zhì)，確保產(chǎn)品的安全性和有效性。本發(fā)明的目的是提供一種高效液相色譜檢測利伐沙班有關物質(zhì)的方法。具體地說，在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供了一種高效液相色譜檢測利伐沙班有關物質(zhì)的方法，選用十八烷基鍵合硅膠為固定相的色譜柱，以緩沖鹽水溶液和乙腈為流動相，以紫外檢測器為檢測器；這里，所述的緩沖鹽水溶液包含磷酸鹽與離子對試劑。在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中，所述流動相中緩沖鹽水溶液與乙腈體積比為5～95:5～95，優(yōu)選地50～90:10～50，更優(yōu)選地采用下列體積比進行梯度洗脫：時間（min）緩沖鹽（%）乙腈（%）0821858218126040406040428218548218在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中，所述緩沖鹽水溶液的pH值為2～3，包括2和3；所述的磷酸鹽為磷酸堿金屬鹽，選自磷酸的鈉鹽、或鉀鹽，更優(yōu)選地所述緩沖鹽選自磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉中的一種或幾種。所述磷酸鹽在所述緩沖鹽水溶液中的濃度為0.01~0.10mol/L，優(yōu)選0.02~0.05mol/L。在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中，所述的離子對試劑選自戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉中的一種或幾種。所述離子對試劑在所述緩沖鹽水溶液中的濃度為0.003~0.03mol/L，優(yōu)選0.005~0.03mol/L。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中，所述緩沖鹽優(yōu)選為磷酸氫二鉀或磷酸二氫鈉；離子對試劑優(yōu)選辛烷磺酸鈉或癸烷磺酸鈉。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中所述流動相，其流速為0.5～1.5ml/min，優(yōu)選地為1ml/min。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中所述紫外檢測器，其檢測波長為240～260nm，優(yōu)選地為250nm。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供的一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，其中所述色譜柱的柱溫為20～40℃，優(yōu)選地為30℃。在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供了一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，進一步地包括下列操作：（1）取經(jīng)研細的利伐沙班片和雜質(zhì)1~15適量，用50%乙腈配制，配成每1ml含0.5μg的混合溶液；（2）設置流動相流速為0.5～1.5ml/min，優(yōu)選1.0ml/min；檢測波長為240～260nm，最佳檢測波長250nm；柱溫為20～40℃，最佳柱溫為30℃；色譜柱選擇C18柱；流動相中緩沖鹽水溶液與乙腈體積比為50～90:10～50,更優(yōu)選地采用上述體積比進行梯度洗脫；（3）精密量?。?）混合溶液10～50μl注入液相色譜儀，完成利伐沙班中的雜質(zhì)與利伐沙班的分離。在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供了一種高效液相色譜檢測利伐沙班片有關物質(zhì)的方法，進一步地包括下列操作：（1）取經(jīng)研細的利伐沙班片和雜質(zhì)1~15適量，用50%乙腈配制，配成每1ml含0.5μg的混合溶液；（2）設置流速為1ml/min，檢測波長為250nm，柱溫30℃；流動相中緩沖鹽水溶液與乙腈采用下列體積比進行梯度洗脫：時間（min）緩沖鹽（%）乙腈（%）0821858218126040406040428218548218（3）精密量取混合溶液10μl注入液相色譜儀，完成利伐沙班片的有關物質(zhì)檢測。在本發(fā)明的實施方案中，除特殊說明外，所述的“%”為體積百分比。本發(fā)明的特點是：各有關物質(zhì)與利伐沙班均達到基線分離，極性較大和較小的雜質(zhì)均能有效的檢出，操作簡便快捷，分析時間短，成本低，能有效的控制利伐沙班片的有關物質(zhì)，確保產(chǎn)品的安全性和有效性。附圖說明圖1表示的是本發(fā)明實施例1的高效液相色譜圖。保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子4.968雜質(zhì)193557035--2.1727.172雜質(zhì)4908778657.8641.1149.330雜質(zhì)223411013109.7951.20312.186雜質(zhì)12134057268919.1670.82115.596雜質(zhì)3544912099118.9361.01815.828雜質(zhì)591291520201.3581.11917.258雜質(zhì)1384692221389.2591.15917.873雜質(zhì)875801704853.8511.11118.354雜質(zhì)7109242099202.8811.09919.605雜質(zhì)14136091693417.1351.10520.056雜質(zhì)15149382404672.5481.15722.800利伐沙班1018613608813.3551.07525.808雜質(zhì)641449941310.4721.05230.726雜質(zhì)991157638812.7381.03542.447雜質(zhì)10188814577818.9321.00045.042雜質(zhì)1124588410203.0831.044圖2表示的是本發(fā)明實施例2的高效液相色譜圖。保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子4.870雜質(zhì)190737072--1.6766.552雜質(zhì)4911885766.5381.0706.992雜質(zhì)22444135761.6831.05010.424雜質(zhì)1213619978910.3761.07614.602雜質(zhì)355108265213.3781.06415.101雜質(zhì)596351331302.7061.08116.771雜質(zhì)13985518988710.455--16.929雜質(zhì)876341299880.921--17.665雜質(zhì)7109922048634.2831.07118.859雜質(zhì)14130251787417.1391.05519.771雜質(zhì)15172722279745.3001.03721.945利伐沙班994916268511.3451.05424.758雜質(zhì)6443911189610.9510.94029.005雜質(zhì)985778956012.4241.02440.676雜質(zhì)10174235622021.7361.05743.213雜質(zhì)1123134494623.4681.032圖3表示的是本發(fā)明對比例1的高效液相色譜圖。保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子0.663雜質(zhì)12126815662--1.3321.577雜質(zhì)1230543354.0810.6494.006雜質(zhì)22553811465.9390.5678.294雜質(zhì)132237324637.5111.00413.245雜質(zhì)15和73202225425.7591.24119.118雜質(zhì)4272268453.1900.70225.127雜質(zhì)3279951184934.111--25.585雜質(zhì)831588802871.4030.94127.266雜質(zhì)5275671745315.4030.92528.397雜質(zhì)14386452133994.4581.07431.288利伐沙班2911628917312.0831.09234.111雜質(zhì)61247842362312.7621.12835.123雜質(zhì)9252523482094.5211.10638.850雜質(zhì)102776645585215.9211.15439.598雜質(zhì)11372685193753.3241.143具體實施方式下面通過本發(fā)明實施例進行具體描述本發(fā)明的實施方案。實施例1儀器和條件島津LC-20A高效液相色譜儀，C18柱（4.6×250mm，5μm），檢測波長為250nm，流速1.0ml/min，柱溫20℃，進樣量為10μl，以緩沖鹽溶液（0.01mol/L辛烷磺酸鈉+0.02mol/L磷酸氫二鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.0）和乙腈為流動相按如下進行梯度洗脫：時間（min）緩沖鹽（%）乙腈（%）0821858218126040406040428218548218實驗步驟：取經(jīng)研細的利伐沙班片和利伐沙班有關物質(zhì)各適量，精密稱定，用50%乙腈超聲使溶解完全，制成每1ml含利伐沙班和利伐沙班有關物質(zhì)（雜質(zhì)1~15）各0.5μg/ml的混合溶液。取配制得混合溶液用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，按上述條件進行高效液相分析，記錄色譜圖，結果見圖1，保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子4.968雜質(zhì)193557035--2.1727.172雜質(zhì)4908778657.8641.1149.330雜質(zhì)223411013109.7951.20312.186雜質(zhì)12134057268919.1670.82115.596雜質(zhì)3544912099118.9361.01815.828雜質(zhì)591291520201.3581.11917.258雜質(zhì)1384692221389.2591.15917.873雜質(zhì)875801704853.8511.11118.354雜質(zhì)7109242099202.8811.09919.605雜質(zhì)14136091693417.1351.10520.056雜質(zhì)15149382404672.5481.15722.800利伐沙班1018613608813.3551.07525.808雜質(zhì)641449941310.4721.05230.726雜質(zhì)991157638812.7381.03542.447雜質(zhì)10188814577818.9321.00045.042雜質(zhì)1124588410203.0831.044在上述色譜條件下，利伐沙班與各有關物質(zhì)之間分離度良好，各有關物質(zhì)理論塔板數(shù)均大于3000，且54min內(nèi)結束整個有關物質(zhì)檢測，且無論極性大小的有關物質(zhì)均能有效檢出，分析時間短，效率高，節(jié)約成本，滿足中國藥典的要求。實施例2儀器和條件島津LC-20A高效液相色譜儀，C18柱（4.6×250mm，5μm），檢測波長為250nm，流速1.0ml/min，柱溫20℃，進樣量為10μl，以緩沖鹽溶液（0.01mol/L辛烷磺酸鈉+0.02mol/L磷酸氫二鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）和乙腈為流動相按如下梯度進行洗脫：時間（min）緩沖鹽（%）乙腈（%）0821858218126040406040428218548218實驗步驟：取經(jīng)研細的利伐沙班片和利伐沙班有關物質(zhì)各適量，精密稱定，用50%乙腈超聲使溶解完全，制成每1ml含利伐沙班和利伐沙班有關物質(zhì)（雜質(zhì)1~15）各0.5μg/ml的混合溶液。取配制得混合溶液用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，按上述條件進行高效液相分析，記錄色譜圖，結果見圖2，保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子4.870雜質(zhì)190737072--1.6766.552雜質(zhì)4911885766.5381.0706.992雜質(zhì)22444135761.6831.05010.424雜質(zhì)1213619978910.3761.07614.602雜質(zhì)355108265213.3781.06415.101雜質(zhì)596351331302.7061.08116.771雜質(zhì)13985518988710.455--16.929雜質(zhì)876341299880.921--17.665雜質(zhì)7109922048634.2831.07118.859雜質(zhì)14130251787417.1391.05519.771雜質(zhì)15172722279745.3001.03721.945利伐沙班994916268511.3451.05424.758雜質(zhì)6443911189610.9510.94029.005雜質(zhì)985778956012.4241.02440.676雜質(zhì)10174235622021.7361.05743.213雜質(zhì)1123134494623.4681.032在上述色譜條件下，利伐沙班與各有關物質(zhì)之間分離度良好，各有關物質(zhì)理論塔板數(shù)均大于3000，且54min內(nèi)結束整個有關物質(zhì)檢測，且無論極性大小的有關物質(zhì)均能有效檢出，分析時間短，效率高，節(jié)約成本，滿足中國藥典的要求。對比例1儀器和條件島津LC-20A高效液相色譜儀，RP-18柱（55mm×4.0mm，3μm），檢測波長為250nm，流速1.5ml/min，柱溫45℃，進樣量為20μl，以0.01mol/L的磷酸和乙腈為流動相，按下列梯度進行洗脫：時間（min）0.01mol/L的磷酸（%）乙腈（%）09281592842495142.192850928實驗步驟：取經(jīng)研細的利伐沙班片和利伐沙班有關物質(zhì)各適量，精密稱定，用50%乙腈超聲使溶解完全，制成每1ml含利伐沙班和利伐沙班有關物質(zhì)（雜質(zhì)1~15）各0.5μg/ml的混合溶液。取配制得混合溶液用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，按上述條件進行高效液相分析，記錄色譜圖，結果見圖3，保留時間化合物名峰面積塔板數(shù)分離度拖尾因子0.663雜質(zhì)12126815662--1.3321.577雜質(zhì)1230543354.0810.6494.006雜質(zhì)22553811465.9390.5678.294雜質(zhì)132237324637.5111.00413.245雜質(zhì)15和73202225425.7591.24119.118雜質(zhì)4272268453.1900.70225.127雜質(zhì)3279951184934.111--25.585雜質(zhì)831588802871.4030.94127.266雜質(zhì)5275671745315.4030.92528.397雜質(zhì)14386452133994.4581.07431.288利伐沙班2911628917312.0831.09234.111雜質(zhì)61247842362312.7621.12835.123雜質(zhì)9252523482094.5211.10638.850雜質(zhì)102776645585215.9211.15439.598雜質(zhì)11372685193753.3241.143按上述色譜條件下對利伐沙班與有關物質(zhì)1~15進行分離，雜質(zhì)1保留時間0.663min、雜質(zhì)12保留時間0.577min，由此可見該部分有關物質(zhì)在色譜系統(tǒng)中幾乎無保留，且雜質(zhì)15和雜質(zhì)7出峰位置重合，不能準確的檢測雜質(zhì)的含量。制備例1利伐沙班雜質(zhì)6的制備將22.6g（111.21mmol）S-（+）-N-（2,3-乙氧基丙基）鄰苯二甲酰亞胺（SM1）、5.34g（27.80mmol）4-（4-氨基苯基）嗎啡啉-3-酮（SM2）依次加入250ml三口瓶中，再加入無水乙醇110ml，升溫回流反應24h。用自來水降溫至50~55℃，抽濾，除去不溶物，收集濾液，繼續(xù)降溫至10~15℃析晶，過濾，得黃色固體。將此黃色固體用無水乙醇80ml回流溶解，冷卻到5～10℃，過濾，濾餅于50～60℃減壓干燥5小時。得產(chǎn)物10.0g，收率60.0%，純度96.2%。H1-NMR(600HZ，DMSO-d6):7.86-7.87(4H，m)，7.82-7.84（4H，m），7.08（2H，d），6.67（2H，d），6.67（2H，d），5.12（2H，d），4.14（2H，s），4.11（2H，m），3.93（2H，t），3.57-3.63（8H，m），3.39（2H，m）；MS(m/z)：599[M+H]+，621[M+Na]+制備例2利伐沙班雜質(zhì)10的制備1、化合物I的制備將243.9g（1.20mol）S-（+）-N-（2,3-乙氧基丙基）鄰苯二甲酰亞胺（SM1）、121.8g（800.30mmol）2-(4-氨基苯基氨基)乙醇依次加入3L三口瓶中，再加入無水乙醇2.0L，升溫75~85℃反應24h。用自來水降溫至40~45℃，抽濾，用乙醇洗滌，收集濾餅，白色固體。于50～60℃減壓干燥5小時。得化合物I的256.0g，收率90.0%。、化合物II的制備將250.0g(0.703mol)化合物I，750ml四氫呋喃加入2L三口瓶中，快速稱取228.0g(1.406mol)N,N-羰基二咪唑加入反應瓶。于外溫60~70℃反應10h。冷卻，再加入228.0g(1.406mol)N,N-羰基二咪唑，繼續(xù)于60~70℃保溫回流反應10h。停止加熱。降溫至內(nèi)溫20℃，過濾，濾餅用四氫呋喃洗滌。濾餅加入2L反應瓶中，加入800ml無水乙醇，于回流下溶解。再降溫至30℃；過濾，濾餅用無水乙醇洗滌。抽干，于50~60℃減壓干燥5h。得化合物II227.9g，收率85.6%。3、化合物III的制備將200.0g(0.524mol)化合物II，氯乙酰甲胺230.0g（2.139mol），乙腈1000ml，碳酸鉀290.0g（2.101mol）加入2L三口瓶中，升溫至80~90℃反應24h。降溫至內(nèi)溫20℃，過濾，濾餅用乙腈洗滌。收集濾液，減壓濃縮至干。加入2L二氯甲烷，1L水攪拌溶解萃取，分出有機層，用水洗滌，有機層用硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干。殘留物用600ml無水乙醇重結晶，得化合物III154.1g，收率65.0%。、化合物IV的制備于3L三口瓶中，依次加入120g（0.265mol）化合物III，1.8L無水乙醇和267.0g（3.445mol）40%的甲胺水溶液，升溫至75~85℃反應2~4h，降溫0～10℃，滴加濃鹽酸250.0g調(diào)節(jié)PH=2，控制內(nèi)溫0~10℃，保溫攪拌結晶30~40min，過濾，用乙醇洗滌，濾餅于50～60℃減壓干燥5h，得89.9g化合物IV，收率85.8%5、利伐沙班雜質(zhì)10的制備將82.1g（0.505mol）5-氯-噻吩-2-甲酸（SM3）,320mlN,N-二甲基甲酰胺加入1L三口瓶中攪拌溶清后，加冰浴降溫至0~10℃，加入98.3g（0.606mol）N，N-羰基二咪唑，于10~20℃攪拌反應30~40min，再加入61.2g（0.606mol）三乙胺。于10~20℃攪拌反應10~15min，控制內(nèi)溫10~20℃，緩慢加入80.0g（0.202mol）化合物IV，升溫30～35℃反應2.0~3.0h；將反應液緩慢加入裝有4.0L冰水的三口瓶中，體系變?yōu)槿榘咨珳啙嵋?，冰浴降?~10℃保溫攪拌30~40min。過濾，濾餅用純化水洗滌，收集濾餅于60~70℃減壓干燥12h。得到粗品。將干燥后粗品加入3.0L三口瓶，加入2L冰醋酸重結晶，得到62.0g雜質(zhì)10，收率為50.2%，純度100%。H1-NMR(600HZ，DMSO-d6):8.98(1H，t)，7.63-7.70（3H，m），7.55（1H，m），7.43（2H，d），7.19（1H，d），6.93（1H，d），6.52（1H，d），4.87（1H，m），4.22（1H，t），3.90（2H，m），3.81（2H，s），3.58-3.65（4H，m），3.14（1H，m），2.59（3H，d）；MS(m/z)：611[M]+。制備例3利伐沙班雜質(zhì)11的制備1、化合物V的制備將243.9g（0.75mol）S-（+）-N-（2,3-乙氧基丙基）鄰苯二甲酰亞胺（SM1）、105.1g（0.500mol）2-(2-(4-氨基苯基氨基)乙氧基)乙酸依次加入3L三口瓶中，再加入無水乙醇1.8L，升溫75~85℃反應24h。用自來水降溫至40~45℃，抽濾，用乙醇洗滌，收集濾餅，白色固體。于50～60℃減壓干燥5小時。得化合物V的165.4g，收率80.0%。、化合物VI的制備將150.0g(0.363mol)化合物V，400ml四氫呋喃加入2L三口瓶中，快速稱取118.0g(0.726mol)N,N-羰基二咪唑加入反應瓶。于外溫60~70℃反應10h。冷卻，再加入118.0g(0.726mol)N,N-羰基二咪唑，繼續(xù)于60~70℃保溫回流反應10h。停止加熱。降溫至內(nèi)溫20℃，過濾，濾餅用四氫呋喃洗滌。濾餅加入1L反應瓶中，加入400ml無水乙醇，于回流下溶解。再降溫至30℃；過濾，濾餅用無水乙醇洗滌。抽干，于50~60℃減壓干燥5h。得化合物VI120.9g，收率75.8%。、化合物VII的制備將于3L三口瓶中，依次加入100.0g(0.228mol)化合物VI，1.5L無水乙醇和229.7g（2.964mol）40%的甲胺水溶液，升溫至75~85℃反應2~4h，降溫0～10℃，滴加濃鹽酸200.0g調(diào)節(jié)PH=2，控制內(nèi)溫0~10℃，保溫攪拌結晶30~40min，過濾，用乙醇洗滌，濾餅于50～60℃減壓干燥5h，得78.4g化合物VII，收率90.0%4、化合物VIII的制備將79.7g（0.490mol）5-氯-噻吩-2-甲酸（SM3）,225mlN,N-二甲基甲酰胺加入500ml三口瓶中攪拌溶清后，加冰浴降溫至0~10℃，加入95.3g（0.588mol）N，N-羰基二咪唑，于10~20℃攪拌反應30~40min，再加入59.4g（0.588mol）三乙胺。于10~20℃攪拌反應10~15min，控制內(nèi)溫10~20℃，緩慢加入75.0g（0.196mol）化合物IV，升溫30～35℃反應2.0~3.0h；將反應液緩慢加入裝有3.8L冰水的三口瓶中，體系變?yōu)槿榘咨珳啙嵋海〗禍?~10℃保溫攪拌30~40min。過濾，濾餅用純化水洗滌，收集濾餅于60~70℃減壓干燥12h。得到粗品。將干燥后粗品加入2L三口瓶，加入1.2L冰醋酸重結晶，得到化合物VIII60.4g，收率為51.5%5、利伐沙班雜質(zhì)11的制備將50.0g（0.084mol）化合物VIII,100mlN,N-二甲基甲酰胺加入500ml三口瓶中攪拌溶清后，加冰浴降溫至0~10℃，加入15.9g（0.098mol）N，N-羰基二咪唑，于10~20℃攪拌反應30~40min，再加入9.9g（0.098mol）三乙胺體。于10~20℃攪拌反應10~15min，控制內(nèi)溫10~20℃，緩慢加入22.9g（0.070mol）5-氯-N-（{（5S）-2-氧代-3-[4-（3-氧代-4-嗎啉基）苯基]-1，3-噁唑烷-5-基}甲胺鹽酸鹽（中間產(chǎn)品C），升溫30～35℃反應2.0~3.0h；將反應液緩慢加入裝有2.0L冰水的三口瓶中，體系變?yōu)槿榘咨珳啙嵋?，冰浴降?~10℃保溫攪拌30~40min。過濾，濾餅用純化水洗滌，收集濾餅于60~70℃減壓干燥12h。得到粗品。將干燥后粗品加入1L三口瓶，加入500ml冰醋酸重結晶，得到29.6g雜質(zhì)11，收率為48.6%，純度99.9%。H1-NMR(600HZ，DMSO-d6):8.96(1H，m)，8.05（1H，m），7.65-7.68（3H，m），7.62（2H，d），7.39（4H，t），7.17（1H，d），6.91（1H，d），6.51（1H，d），4.82（1H，m），4.75（1H，m），4.11-4.20（4H，m），3.95（2H，t），3.87（4H，m），3.78（2H，m），3.68（2H，t），3.55-3.62（4H，m），3.45（2H，m）；MS(m/z)：871[M]+。制備例4利伐沙班雜質(zhì)12的制備于250ml三口瓶中，依次加入8.5g（21.50mmol）2-（（2R）-2-羥基-3-{[4-（3-氧代-4-嗎啉基）苯基]氨基}丙基）-1H-異吲哚-1，3（2H）-二酮（A），140ml無水乙醇和21.7g（280.00mmol）40%的甲胺水溶液，升溫回流反應2～4h，降溫10～20℃，滴加濃鹽酸23.1g調(diào)節(jié)PH=2，控制內(nèi)溫10~15℃，保溫攪拌30~40min，減壓濃縮至干，用85ml純化水溶解濃縮產(chǎn)物，過濾掉不溶物，濾液加入0.05g保險粉，0.5g活性炭脫色1h，過濾，濾液減壓濃縮至干，加入300ml二氯甲烷溶解，過濾掉不溶物，濾液減壓濃縮得白色固體7.5g，再用25ml二氯甲烷于室溫下打漿0.5h，抽濾，濾餅于50～60℃減壓干燥5h，得2.0g雜質(zhì)12，收率75.0%，純度99.3%。H1-NMR(600HZ，DMSO-d6):7.02(2H，t)，6.59（2H，d），5.61（1H，s），4.13（2H，s），3.92（2H，m），3.60（3H，m），3.08（1H，d），2.93（1H，t），2.66（1H，m），2.53（1H，m）；MS(m/z)：288[M+Na]+。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式上和細節(jié)上對其作為各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求所限定的本發(fā)明的精神和范圍。當前第1頁1 2 3