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直接觀察鹽生草根系及周圍環(huán)境鹽分的方法與流程

文檔序號(hào):11860395閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種直接觀察鹽生草根系及周圍環(huán)境鹽分的方法,其特征在于步驟為:

(1)以瓊脂為基質(zhì),培育0-300mM NaCl處理下的鹽生草無菌苗,培養(yǎng)基為Hoagland完全營養(yǎng)液,4-6g/L瓊脂,pH為5.7-5.8;

(2)待步驟(1)的鹽生草無菌苗生長至2-3個(gè)月,將瓊脂包裹的鹽生草無菌苗原封不動(dòng)地取出,切去幼苗莖、葉部分,原樣保留瓊脂固定根系的狀態(tài);

(3)用雙面刀片將步驟(2)瓊脂包裹的鹽生草無菌苗的瓊脂固定根系從根尖往上0.5-1.0cm處橫切,保留固定根尖部分的瓊脂,在1-2min內(nèi)橫切成厚度為0.2-0.5cm的切片;

(4)將步驟(3)獲得的切片以根系橫截面為中心縱切,留取瓊脂厚度0.2-0.5cm的瓊脂包裹根系橫截面的切片,用鑷子在1-2min之內(nèi)將瓊脂包裹根系橫截面的小切片移入置有液氮的鋁盒,速凍5-10min;

(5)液氮速凍后,在2-3min之內(nèi)將步驟(4)裝有小切片的鋁盒放入冷凍干燥機(jī),真空冷凍干燥12-18h,真空度為15-80pa,溫度為-50℃;

(6)將步驟(5)所獲小切片中根系橫截面和周圍瓊脂進(jìn)行電鏡掃描觀察,利用能量色散X射線光譜儀分別測定不同NaCl處理下根系橫截面和周圍瓊脂中Na的重量百分比。

2.如權(quán)利要求1所述的直接觀察鹽生草根系及周圍環(huán)境鹽分的方法,其特征在于步驟(1)所述無菌苗的培養(yǎng)所用試管為平口試管,每個(gè)試管中50mL固體培養(yǎng)基,每管10-15粒種子。

3.如權(quán)利要求1所述的直接觀察鹽生草根系及周圍環(huán)境鹽分的方法,其特征在于步驟(4)所述用鑷子將瓊脂包裹根系橫截面切片移入鋁盒時(shí),應(yīng)從包裹根系橫截面的瓊脂小塊周圍輕輕夾取,不能接觸根系橫截面。

4.如權(quán)利要求1所述的直接觀察鹽生草根系及周圍環(huán)境鹽分的方法,其特征在于步驟(6)所述切片電鏡掃描和能量色散X射線光譜儀分析時(shí),分別掃描同一切塊的根系橫截面和周圍瓊脂。

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