本發(fā)明屬分析化學領(lǐng)域，涉及定量測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐含量的方法。
背景技術(shù)：
：順丁烯二酸(HO2CCH=CHCO2H)，又稱“馬來酸”，為最簡單的不飽和二元羧酸，屬于樹脂等化學黏合劑原料，主要用在工業(yè)粘著劑中，但若加入食物中可增加食物彈性及保質(zhì)期。長期超標食用含順丁烯二酸食品，將極大損傷人體腎臟功能，甚至引發(fā)不孕不育。目前，國內(nèi)在食品添加劑檢測中暫無馬來酸的相關(guān)檢測規(guī)定。但食品專家指出，順丁烯二酸（酐）在大陸食品領(lǐng)域可能存在一定濫用現(xiàn)象，成本低廉是商家使用順丁烯二酸（酐）作為食品添加劑的主要動因。為了增加食物的彈性、黏性及外觀光亮度，淀粉成為添加順丁烯二酸（酐）的高危對象。因此，本應(yīng)用建立了一種測定淀粉中順丁烯二酸（酐）的方法，以滿足迫切的食品安全監(jiān)控需求。順丁烯二酸酐遇水則水解成馬來酸，因此我們可以檢測樣品中馬來酸的含量，得到順丁烯二酸（酐）的總量。關(guān)于馬來酸的檢測報道，主要有高效液相色譜法，毛細管電泳法和離子色譜法等，現(xiàn)行國家標準GB/T23296.21-2009采用高效液相色譜法對食品模擬物中順丁烯二酸(酐)進行分離與測定。但關(guān)于淀粉中順丁烯二酸（酐）的檢測也見報道，高效液相色譜采用紫外末端吸收進行檢測，干擾較大。馬來酸作為一種有機酸，極易溶于水且呈陰離子狀態(tài)，離子色譜法成為分離并測定馬來酸的優(yōu)選方法。本文采用陰離子交換柱分離，抑制電導檢測器檢測，碳酸鹽等度淋洗。建立了一種離子色譜法測定淀粉中順丁烯二酸（酐）的測定方法，結(jié)果令人滿意，對食品安全監(jiān)督起到一定的方法指導作用。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在解決淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的測定方法，因此針對相關(guān)食物中馬來酸酐的測定，本發(fā)明提出了一種淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐含量的測定方法。本發(fā)明使用離子色譜法測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐含量，靈敏度高、準確度高，操作簡便且分析快速。為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的離子色譜方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）柱溫箱的溫度設(shè)置為50℃；（2）進樣量為100μL;（3）所施加的抑制電流為30mA;（4）淋洗液的配制配制3.6mmol/L的碳酸鈉溶液作為系統(tǒng)的淋洗液;（5）標準溶液的配制精確稱取0.1g馬來酸,置于100mL容量瓶中，用二次去離子水溶解，并稀釋至刻度，得到1000mg/L的標準儲備液，保存于4℃冰箱中；分別移取常規(guī)陰離子氟離子、氯離子、亞硝酸根、溴離子、硝酸根、磷酸根及硫酸根離子的標準儲備溶液，其濃度均為1000mg/L，依次移取的體積為0.1、0.1、0.1、0.1、0.1、0.50、1.0mL,置于100mL容量瓶中，再分別精確移取其濃度均為1000mg/L的1.0mL馬來酸和富馬酸，置于同一容量瓶中，用二次去離子水定容至刻度，得到馬來酸、富馬酸與常規(guī)陰離子的混合標準溶液；將1000mg/L馬來酸標準儲備溶液依據(jù)逐級稀釋的方式配制得到一濃度系列：0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0和100.0mg/L，得到馬來酸的系列線性標準溶液；（6）馬來酸、富馬酸與常規(guī)陰離子的混合標準溶液的分析對混合標準溶液進樣分析，得到混合標準溶液中各離子的色譜峰，通過色譜軟件處理，得到各相鄰離子色譜之間的分離度；配制含馬來酸質(zhì)量濃度為10mg/L的常見陰離子混合標準溶液，重復(fù)進樣11次，得到馬來酸色譜峰的峰面積的相對標準偏差，其中所使用的數(shù)據(jù)處理方法為計算校正因子法；線性關(guān)系試驗：對步驟（5）中得到的馬來酸的系列線性標準溶液，依據(jù)從低濃度到高濃度的順序進行進樣，得到濃度對峰面積的線性方程，其中所使用的數(shù)據(jù)處理方法為計算校正因子法；（7）樣品的預(yù)處理準確稱取10g試樣于250mL具塞三角瓶中，移入100.0mL去離子水，迅速搖勻后，在間歇攪拌下于超聲波中提取20min，靜置，轉(zhuǎn)移20mL上清液于50mL離心管中，于3000r/min轉(zhuǎn)速下離心20min，取上清液備用；取上述備用上清液依次通過一次性針式尼龍過濾器和活化后的OnGuardRP柱，棄去初濾液3mL，其余濾液直接進樣分析；（8）處理后的樣品，注入離子色譜儀進行分析測定，通過得到的濃度和峰面積的線性方程算出樣品的馬來酸的含量，即可。所述的測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的離子色譜方法，其特征在于：所述的離子色譜方法采用的色譜柱為高容量的陰離子色譜柱，其填料內(nèi)徑為5μm，長度為150mm。所述的測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的離子色譜方法，其特征在于：淋洗液的配制方法為：精密稱取0.0.3816g碳酸鈉，置于1000mL容量瓶中，用二次去離子水定容至刻度，用二次去離子水定容到刻度，得到3.6mmol/L的碳酸鈉溶液，作為系統(tǒng)的淋洗液。所述的測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的離子色譜方法，其特征在于：步驟（7）中所述的一次性針式尼龍過濾器的孔徑為0.22μm。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明建立的離子色譜法測定淀粉及淀粉制食品中中馬來酸（酐）的方法，樣品前處理簡單、方便。方法穩(wěn)定，線性范圍內(nèi)相關(guān)性好，準確度高，受其他因素干擾小。將本方法應(yīng)用于食品安全監(jiān)測領(lǐng)域，具有極高的實用價值。附圖說明圖1常規(guī)陰離子與馬來酸、富馬酸同時分離色譜圖。色譜峰:1.氟離子2.氯離子3.亞硝酸根4.溴離子5.硝酸根6.磷酸根7.硫酸根8.未知峰9.馬來酸10.富馬酸圖2馬來酸標準溶液色譜圖。色譜峰（mg/L）:1.馬來酸（10.0）圖3馬來酸的濃度和峰面積線性關(guān)系圖。圖4實際樣品中馬來酸檢測色譜圖。色譜峰:1.馬來酸。具體實施方式本發(fā)明具體實施方式所采用的儀器與試劑：WY-IC6200型離子色譜儀；陰離子抑制器；電導檢測器；0.22μm一次性針式過濾器；OnGuardRP前處理小柱；樣品（客市售）；碳酸鈉（基準試劑）；馬來酸（優(yōu)級純）；富馬酸（優(yōu)級純）；常規(guī)陰離子標準儲備溶液（其濃度均為1000mg/L）流速：0.6mL/min；電導檢測器溫度：35℃。一種測定淀粉或淀粉制食品中馬來酸酐的離子色譜方法，包括以下步驟：（1）柱溫箱的溫度設(shè)置為50℃；（2）進樣量為100μL;（3）所施加的抑制電流為30mA;（4）淋洗液的配制精密稱取0.0.3816g碳酸鈉，置于1000mL容量瓶中，用二次去離子水定容至刻度，用二次去離子水定容到刻度，得到3.6mmol/L的碳酸鈉溶液，作為系統(tǒng)的淋洗液。（5）標準溶液的配制精確稱取0.1g馬來酸,置于100mL容量瓶中，用二次去離子水溶解，并稀釋至刻度，得到1000mg/L的標準儲備液，保存于4℃冰箱中。分別移取常規(guī)陰離子（氟離子、氯離子、亞硝酸根、溴離子、硝酸根、磷酸根及硫酸根離子）的標準儲備溶液（其濃度均為1000mg/L）0.1、0.1、0.1、0.1、0.1、0.50、1.0mL,置于100mL容量瓶中，再分別精確移取1.0mL馬來酸和富馬酸（濃度均為1000mg/L），置于同一容量瓶中，用二次去離子水定容至刻度，得到馬來酸、富馬酸與常規(guī)陰離子的混合標準溶液。將1000mg/L馬來酸標準儲備溶液依據(jù)逐級稀釋的方式配制得到一濃度系列：0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0和100.0mg/L。（6）馬來酸、富馬酸與常規(guī)陰離子的混合標準溶液的分析對混合標準溶液進樣分析，得到混合標準溶液中各離子的色譜峰，通過色譜軟件處理，得到各相鄰離子色譜之間的分離度；配制含馬來酸質(zhì)量濃度為10mg/L的常見陰離子混合標準溶液，重復(fù)進樣11次，得到馬來酸色譜峰的峰面積的相對標準偏差，其中所使用的數(shù)據(jù)處理方法為計算校正因子法；線性關(guān)系試驗：對權(quán)利要求書（5）中得到的馬來酸的系列線性標準溶液，依據(jù)從低濃度到高濃度的順序進行進樣，得到濃度對對峰面積的線性方程，其中所使用的數(shù)據(jù)處理方法為計算校正因子法；（7）樣品的預(yù)處理準確稱取10g試樣于250mL具塞三角瓶中，移入100.0mL去離子水，迅速搖勻后，在間歇攪拌下于超聲波中提取20min，靜置，轉(zhuǎn)移20mL上清液于50mL離心管中，于3000r/min轉(zhuǎn)速下離心20min，取上清液備用。取上述備用上清液依次通過0.22μm一次性針式尼龍過濾器和活化后的OnGuardRP前處理小柱，棄去初濾液3mL，濾液直接進樣分析。其中OnGuardRP柱使用前需要進行活化再生，其再生方法為：依次注入5mL甲醇和10mL二次去離子水后，放置20分鐘后使用。（8）處理后的樣品，注入離子色譜儀進行分析測定其中的馬來酸的含量；其中一次性針式過濾器的孔徑為0.22μm。所述的離子色譜方法采用的色譜柱為高容量的陰離子色譜柱，其填料內(nèi)徑為5μm，長度為150mm。色譜條件的優(yōu)化由于淀粉樣品基體復(fù)雜，若選用較低容量柱，馬來酸和硫酸根分離不理想。過高的柱容量色譜柱，盡管可以很好的分離出馬來酸，但其它強保留有機酸很難被一同洗脫下來。綜上所述，我們選擇柱容量適中的陰離子交換色譜柱，采用3.6mmol/LNa2CO3淋洗液等度洗脫，常見無機陰離子和有機酸的分離情況見圖1，從色譜圖數(shù)據(jù)可以看出常規(guī)陰離子不會干擾馬來酸的測定，尤其是馬來酸與鄰的未知色譜峰之間的分離度達到1.5以上，實現(xiàn)了基線分離。馬來酸標準溶液的分析（1）重復(fù)性對同一濃度的標準混合溶液連續(xù)進樣11次，得到馬來酸的色譜圖（見圖2），得到馬來酸色譜峰的保留時間、峰面積和峰高的相對標準偏差分別為0.06%、0.05%和0.17%。（2）線性關(guān)系對配制的馬來酸的線性溶液，依據(jù)從低濃度到高濃度的進樣順序進行進樣分析，得到不同濃度下馬來酸的峰面積，分別以待測離子的濃度（mg/L)為橫坐標，以其峰面積為縱坐標作圖，得到馬來酸的工作曲線，見附圖3。（3）最小檢出限以信噪比(S/N)為3計算，本方法對實際樣品中馬來酸的檢出限為0.5mg/Kg，定量限1.65mg/Kg。實際樣品馬來酸的含量的測定在選定的色譜條件下，對實際樣品進行檢測，得到實際樣品檢測的色譜圖，見附圖4，同時根據(jù)外標法對實際樣品中的馬來酸進行定量，得到實際樣品中馬來酸的含量，見表1。在樣品中，分別加入10、100、500mg/Kg三個水平含量的馬來酸，采用加標的方法進行回收率試驗，回收率結(jié)果附表1。實際含量mg/kg加標量mg/kg平均測得量mg/kg回收率%60.41070.6010260.4100153.392.960.4500534.694.8當前第1頁1 2 3