1.二喹啉甲酸用于海藻酸鹽材料中蛋白含量的定量檢測(cè)方法,其特征在于:在堿性條件下,用蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品繪制蛋白含量-吸光度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,再依此標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量檢測(cè)海藻酸鹽材料中的蛋白含量。
2.按照權(quán)利要求1所述的測(cè)定海藻酸鹽材料中蛋白含量的定量檢測(cè)方法,其特征在于所述方法的具體步驟如下:
(1)用生理鹽水配制成100.0μg/ml的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液;
(2)將步驟(1)配制的標(biāo)準(zhǔn)液用生理鹽水依此稀釋成10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml、40.0μg/ml、50.0μg/ml、60.0μg/ml、70.0μg/ml、80.0μg/ml、90.0μg/ml;
(3)配制二喹啉甲酸試劑及其工作液:
試劑A:分別稱取10.0g BCA(1%),20.0g Na2CO3·H2O(2%),1.6g酒石酸鈉(Na2C4H4O6·2H2O,0.16%),4.0g NaOH(0.4%),9.5g NaHCO3(0.95%),定容至1L,用10mol/L NaOH或固體NaHCO3調(diào)節(jié)pH值至11.25;
試劑B:精確稱取2.0g CuSO4·5H2O(4%),蒸餾水定容至50mL;
取50體積份試劑A與1體積份試劑B混合均勻,即配制成綠色的二喹啉甲酸工作液;
(4)向步驟(2)獲得的梯度蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入二喹啉甲酸工作液,蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液與二喹啉甲酸工作液二者質(zhì)量比為1:5-1:50均勻混合,40-70℃水浴中反應(yīng)10-60分鐘,不含蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液的生理鹽水為對(duì)照組,測(cè)定各組在562nm處的吸光度值,繪制蛋白含量-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(5)生理鹽水配制海藻酸鹽樣品溶液(1-20mg/ml);向配制的海藻酸鹽溶液中加入二喹啉甲酸工作液,海藻酸鹽溶液與二喹啉甲酸工作液二者質(zhì)量比為1:5-1:50均勻混合;或?qū)⒑T逅徕c樣品直接溶解在二喹啉甲酸工作液中,海藻酸鹽樣品的配制濃度在10μg/ml-10mg/ml;
40-70℃水浴中反應(yīng)10-60分鐘,生理鹽水為對(duì)照組,測(cè)定對(duì)照組與海藻酸鹽樣品組在562nm處的吸光度值,根據(jù)步驟(4)獲得的蛋白含量-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算海藻酸鹽溶液中的蛋白含量,根據(jù)海藻酸鹽溶液濃度計(jì)算海藻酸鹽材料樣品中的蛋白含量。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定海藻酸鹽材料中蛋白含量的定量檢測(cè)方法,其特征在于:該方法適合測(cè)定分子量在10-500kDa的海藻酸鹽材料。
4.按照權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定海藻酸鹽材料中蛋白含量的定量檢測(cè)方法,其特征在于:該方法適合測(cè)定海藻酸的鈉鹽或鉀鹽。
5.按照權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定海藻酸鹽材料中蛋白含量的定量檢測(cè)方法,其特征在于:所述蛋白質(zhì)為白蛋白、酪蛋白、免疫球蛋白等。