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一種微量細(xì)胞培養(yǎng)液中離脂肪酸的測(cè)定方法與流程

文檔序號(hào):12591462閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種微量細(xì)胞培養(yǎng)液中游離脂肪酸的測(cè)定方法,其特征在于:操作步驟如下:

a)取細(xì)胞培養(yǎng)液離心獲得細(xì)胞培養(yǎng)液上清液;

b)取細(xì)胞培養(yǎng)液上清液利用MTBE超聲萃取,得萃取液;

c)對(duì)萃取液離心后取上清,用HPLC-MS/MS方法進(jìn)行檢測(cè)分析,或萃取液經(jīng)離心后取上層,吹干,用所取上層等體積的流動(dòng)相溶解后用HPLC-MS/MS方法進(jìn)行檢測(cè)分析。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:

所述細(xì)胞培養(yǎng)液為動(dòng)物或人體細(xì)胞培養(yǎng)液,包括1640培養(yǎng)液、DMEM、高糖DMEM中的一種;

步驟a)中離心轉(zhuǎn)速為2000-3000r/min,離心時(shí)間為3-5min;

步驟b)中加入的MTBE的體積與所取的細(xì)胞培養(yǎng)液上清液體積相同;超聲頻率為40-60kHz,超聲時(shí)間為8-10min;萃取后高速離心,取上層為萃取液;

步驟c)中離心轉(zhuǎn)速為13000-15000r/min,離心時(shí)間為3-5min;所述HPLC-MS/MS方法采用C8柱,ESI負(fù)離子模式,SRM檢測(cè);進(jìn)樣量為10μL。

3.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟c)中所述流動(dòng)相為乙腈。

4.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟c)中所述HPLC-MS/MS方法中,質(zhì)譜的檢測(cè)條件為負(fù)離子模式下的SRM檢測(cè),且子離子與母離子的選擇相同。

5.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟c)中所述HPLC-MS/MS方法中,液相色譜條件為:色譜分離采用Thermo Scientific HPLC系統(tǒng),C8色譜柱(2.1mm×150mm×3μm)流動(dòng)相A為含5mM NH4AC的ACN;流動(dòng)相B為100%ACN,流動(dòng)相梯度為(時(shí)間,%B,總流速)0-5min,90%,250μL/min,1min內(nèi)流動(dòng)相B從90%梯度增加至100%,7-15min,100%,250μL/min,16-20min,90%,300μL/min;柱溫為40℃;進(jìn)樣體積10μL,自動(dòng)進(jìn)樣盤的溫度為6-10℃。

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