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一種貼壁細(xì)胞內(nèi)小分子代謝產(chǎn)物檢測分析的前處理方法與流程

文檔序號:12591446閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種貼壁細(xì)胞內(nèi)小分子代謝產(chǎn)物檢測分析的前處理方法,其特征在于:包括以下步驟:

貼壁細(xì)胞用超純水清洗,向清洗后的細(xì)胞中倒入液氮,待液氮揮發(fā)后加入超純水,超聲處理,冷凍干燥后萃取胞內(nèi)代謝物,對萃取液進(jìn)行分析。

2.按照權(quán)利要求1所述的前處理方法,其特征在于:包括以下步驟:

a)將貼壁細(xì)胞棄去細(xì)胞培養(yǎng)液,加入超純水,吹打清洗細(xì)胞,棄去液體;

b)向清洗后的細(xì)胞中倒入液氮,使細(xì)胞瞬間淬滅;

c)待液氮揮發(fā)后加入超純水,水浴條件下超聲處理,使細(xì)胞脫壁;

d)脫壁后的細(xì)胞冷凍干燥,用溶劑萃取胞內(nèi)代謝物,萃取液過濾后所得液體進(jìn)行分析。

3.按照權(quán)利要求1或2所述的前處理方法,其特征在于:

所述貼壁細(xì)胞為細(xì)胞培養(yǎng)中的可以貼壁的動(dòng)物細(xì)胞或人體細(xì)胞。

4.按照權(quán)利要求2所述的前處理方法,其特征在于:

步驟a)中加入的超純水的體積為原始細(xì)胞培養(yǎng)液體積的1/2-3/4;

步驟b)液氮的使用量為將所有貼壁細(xì)胞浸入液氮中;

步驟c)中加入的超純水的體積是步驟a)細(xì)胞培養(yǎng)板加細(xì)胞培養(yǎng)液體積的1/3-1/2所述水浴條件為冰水浴;

步驟d)中所述溶劑為甲醇的水溶液。

5.按照權(quán)利要求2所述的前處理方法,其特征在于:步驟a)中,超純水清洗細(xì)胞的時(shí)間為6-10秒,洗完后立即將液體棄去。

6.按照權(quán)利要求2所述的前處理方法,其特征在于:步驟b)中加入液氮淬滅細(xì)胞后,液氮揮發(fā)過程中將細(xì)胞放入冰箱中,待液氮揮發(fā)完,取出進(jìn)行下一步操作。

7.按照權(quán)利要求2所述的前處理方法,其特征在于:步驟c)超聲頻率為40-60kHz,超聲時(shí)間為3-5min。

8.按照權(quán)利要求4所述的前處理方法,其特征在于:步驟d)所屬溶劑即體積分?jǐn)?shù)為80%-85%甲醇的水溶液中。

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