本發(fā)明涉及飼料檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種飼料中偶氮染料的檢測方法。
背景技術(shù)：
偶氮染料（azo dyes，偶氮基兩端連接芳基的一類有機化合物）是紡織品服裝在印染工藝中應(yīng)用最廣泛的一類合成染料，用于多種天然和合成纖維的染色和印花，也用于油漆、塑料、橡膠等的著色。在特殊條件下，它能分解產(chǎn)生20多種致癌芳香胺，經(jīng)過活化作用改變?nèi)梭w的DNA結(jié)構(gòu)引起病變和誘發(fā)癌癥。
偶氮染料包括酸性、堿性、直接、媒染、冰染分散、活性染料以及有機顏料等。按分子中所含偶氮基數(shù)目可分為單偶氮、雙偶氮、三偶氮和多偶氮染料：單偶氮染料：Ar-N=N-Ar-OH(NH2)；雙偶氮染料：Ar1-N=N-Ar2-N=N-Ar3；三偶氮染料：Ar1-N=N-Ar2-N=N-Ar3-N=N-Ar4；式中Ar為芳基；隨著偶氮基數(shù)目的增加，染料的顏色加深。
偶氮是染料中形成基礎(chǔ)顏色的物質(zhì)，如果擯棄了偶氮結(jié)構(gòu)，那么大部分染料基礎(chǔ)顏色將無法生成。有少數(shù)偶氮結(jié)構(gòu)的染料品種在化學反應(yīng)分解中可能產(chǎn)生以下二十四種致癌芳香胺物質(zhì)，屬于歐盟禁用的。這些禁用的偶氮染料品種占全部偶氮染料的5%左右。
目前，在偶氮染料的組分分析方面，主要借助色譜分離手段實現(xiàn)多個組分的區(qū)分和檢測，主要方法有高效液相色譜法HPLC、液相/氣相色譜-質(zhì)譜法LC/GC-MS等，但這些方法需要大型的儀器和長時間的分離流程，在實際快速流通的市場分析領(lǐng)域難于適用。因此，本發(fā)明研究出一種低成本、少工序的偶氮染料的檢測方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種低成本、少工序的飼料中偶氮染料的檢測方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種飼料中偶氮染料的檢測方法，包括以下步驟：
（1）分散染料的萃取，包括以下步驟：
11）將飼料烘干并碾碎，過200～250目篩，取篩下物作為樣品，備用；
12）稱取0.5～1.0g樣品于50ml帶蓋試管中，并在試管中加入20～30ml乙醇，擰緊試管蓋，置于42～45℃水浴超聲波中，超聲萃取70～90min，取出試管，冷卻至室溫得提取液；
13）將提取液過濾至100ml圓底燒瓶中，然后用8～10ml乙醇淋洗試管，淋洗液同樣過濾至圓底燒瓶中，再次過濾，得總濾液；
14）在溫度為55～65℃、真空度-0.05～-0.08MPa條件下，將總濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸至近干，得蒸干物，接著采用3ml乙醇分三次將蒸干物轉(zhuǎn)移至潔凈試管中；
（2）還原裂解，包括以下步驟：
21）在裝有蒸干物的試管中加入20～25ml預(yù)熱至55～58℃的檸檬酸鈉緩沖溶液，擰緊試管蓋，將試管置于55～58℃水浴鍋中保溫20～25min；
22）打開試管蓋，加入2.0～2.5ml濃度為1.10～1.20mol/L的氫溴酸，擰緊試管蓋并用力震搖，然后置于55～58℃水浴鍋中保溫35～40min；
23）取出試管，使其在90s內(nèi)冷卻至室溫，得還原裂解產(chǎn)物，備用；
（3）胺的分離，包括以下步驟：
31）在裝有還原裂解產(chǎn)物的試管中加入0.20～0.25ml質(zhì)量濃度為10～12%的氫氧化鈉溶液，擰緊試管蓋并用力震搖；再在試管中加入3.0～3.5ml二氯甲烷，擰緊試管蓋，置于搖床上300～350r/min下震搖35～40min；
32）取下試管，在試管中加入無水硫酸銅，靜置分層，取上層有機相，經(jīng)0.45μm的有機微孔濾膜過濾至2ml氣相色譜進樣瓶中，供氣相色譜法分析。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟11）中，烘干溫度為102～105℃。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟12）中，稱取0.8g樣品于50ml帶蓋試管中，并在試管中加入25ml乙醇，擰緊試管蓋，置于43℃水浴超聲波中，超聲萃取80min。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟14）中，在溫度為60℃、真空度-0.06MPa條件下。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟22）中，氫溴酸的濃度為1.15mol/L。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟31）中，加入0.22ml質(zhì)量濃度為12%的氫氧化鈉溶液。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明用乙醇提取樣品中的分散染料，可以盡可能提取樣品中的分散染料，又能避免樣品中的其他雜質(zhì)過多的被提取；在試管中加入氫氧化鈉溶液，可以中和pH，生成的胺類物質(zhì)在此pH條件下更加穩(wěn)定；加入二氯甲烷，利于液-液萃取提取，叔丁基甲醚需求量少，可以極大的節(jié)約成本，減少工序；加入適量無水硫酸銅，可以吸水，加快分層，并有利于除去有機相中的部分雜質(zhì)。
具體實施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
實施例1
本發(fā)明實施例中，一種飼料中偶氮染料的檢測方法，包括以下步驟：
（1）分散染料的萃取，包括以下步驟：
11）將飼料置于102℃溫度下烘干并碾碎，過200目篩，取篩下物作為樣品，備用；
12）稱取0.5g樣品于50ml帶蓋試管中，并在試管中加入20ml乙醇，擰緊試管蓋，置于42℃水浴超聲波中，超聲萃取90min，取出試管，冷卻至室溫得提取液；
13）將提取液過濾至100ml圓底燒瓶中，然后用8ml乙醇淋洗試管，淋洗液同樣過濾至圓底燒瓶中，再次過濾，得總濾液；
14）在溫度為55℃、真空度-0.08MPa條件下，將總濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸至近干，得蒸干物，接著采用3ml乙醇分三次將蒸干物轉(zhuǎn)移至潔凈試管中；
（2）還原裂解，包括以下步驟：
21）在裝有蒸干物的試管中加入20ml預(yù)熱至58℃的檸檬酸鈉緩沖溶液，擰緊試管蓋，將試管置于58℃水浴鍋中保溫20min；
22）打開試管蓋，加入2.0ml濃度為1.20mol/L的氫溴酸，擰緊試管蓋并用力震搖，然后置于58℃水浴鍋中保溫35min；
23）取出試管，使其在90s內(nèi)冷卻至室溫，得還原裂解產(chǎn)物，備用；
（3）胺的分離，包括以下步驟：
31）在裝有還原裂解產(chǎn)物的試管中加入0.20ml質(zhì)量濃度為12%的氫氧化鈉溶液，擰緊試管蓋并用力震搖；再在試管中加入3.0ml二氯甲烷，擰緊試管蓋，置于搖床上350r/min下震搖35min；
32）取下試管，在試管中加入無水硫酸銅，靜置分層，取上層有機相，經(jīng)0.45μm的有機微孔濾膜過濾至2ml氣相色譜進樣瓶中，供氣相色譜法分析。
實施例2
本發(fā)明實施例中，一種飼料中偶氮染料的檢測方法，包括以下步驟：
（1）分散染料的萃取，包括以下步驟：
11）將飼料置于105℃溫度下烘干并碾碎，過250目篩，取篩下物作為樣品，備用；
12）稱取1.0g樣品于50ml帶蓋試管中，并在試管中加入30ml乙醇，擰緊試管蓋，置于45℃水浴超聲波中，超聲萃取70min，取出試管，冷卻至室溫得提取液；
13）將提取液過濾至100ml圓底燒瓶中，然后用10ml乙醇淋洗試管，淋洗液同樣過濾至圓底燒瓶中，再次過濾，得總濾液；
14）在溫度為65℃、真空度-0.05條件下，將總濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸至近干，得蒸干物，接著采用3ml乙醇分三次將蒸干物轉(zhuǎn)移至潔凈試管中；
（2）還原裂解，包括以下步驟：
21）在裝有蒸干物的試管中加入25ml預(yù)熱至55℃的檸檬酸鈉緩沖溶液，擰緊試管蓋，將試管置于55℃水浴鍋中保溫25min；
22）打開試管蓋，加入2.5ml濃度為1.10mol/L的氫溴酸，擰緊試管蓋并用力震搖，然后置于55℃水浴鍋中保溫40min；
23）取出試管，使其在90s內(nèi)冷卻至室溫，得還原裂解產(chǎn)物，備用；
（3）胺的分離，包括以下步驟：
31）在裝有還原裂解產(chǎn)物的試管中加入0.25ml質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液，擰緊試管蓋并用力震搖；再在試管中加入3.5ml二氯甲烷，擰緊試管蓋，置于搖床上300r/min下震搖40min；
32）取下試管，在試管中加入無水硫酸銅，靜置分層，取上層有機相，經(jīng)0.45μm的有機微孔濾膜過濾至2ml氣相色譜進樣瓶中，供氣相色譜法分析。
實施例3
本發(fā)明實施例中，一種飼料中偶氮染料的檢測方法，包括以下步驟：
（1）分散染料的萃取，包括以下步驟：
11）將飼料置于104℃溫度下烘干并碾碎，過250目篩，取篩下物作為樣品，備用；
12）稱取0.8g樣品于50ml帶蓋試管中，并在試管中加入25ml乙醇，擰緊試管蓋，置于43℃水浴超聲波中，超聲萃取80min，取出試管，冷卻至室溫得提取液；
13）將提取液過濾至100ml圓底燒瓶中，然后用9ml乙醇淋洗試管，淋洗液同樣過濾至圓底燒瓶中，再次過濾，得總濾液；
14）在溫度為60℃、真空度-0.06MPa條件下，將總濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸至近干，得蒸干物，接著采用3ml乙醇分三次將蒸干物轉(zhuǎn)移至潔凈試管中；
（2）還原裂解，包括以下步驟：
21）在裝有蒸干物的試管中加入25ml預(yù)熱至56℃的檸檬酸鈉緩沖溶液，擰緊試管蓋，將試管置于56℃水浴鍋中保溫22min；
22）打開試管蓋，加入2.2ml濃度為1.15mol/L的氫溴酸，擰緊試管蓋并用力震搖，然后置于56℃水浴鍋中保溫38min；
23）取出試管，使其在90s內(nèi)冷卻至室溫，得還原裂解產(chǎn)物，備用；
（3）胺的分離，包括以下步驟：
31）在裝有還原裂解產(chǎn)物的試管中加入0.22ml質(zhì)量濃度為12%的氫氧化鈉溶液，擰緊試管蓋并用力震搖；再在試管中加入3.2ml二氯甲烷，擰緊試管蓋，置于搖床上320r/min下震搖36min；
32）取下試管，在試管中加入無水硫酸銅，靜置分層，取上層有機相，經(jīng)0.45μm的有機微孔濾膜過濾至2ml氣相色譜進樣瓶中，供氣相色譜法分析。
本發(fā)明用乙醇提取樣品中的分散染料，可以盡可能提取樣品中的分散染料，又能避免樣品中的其他雜質(zhì)過多的被提??；在試管中加入氫氧化鈉溶液，可以中和pH，生成的胺類物質(zhì)在此pH條件下更加穩(wěn)定；加入二氯甲烷，利于液-液萃取提取，叔丁基甲醚需求量少，可以極大的節(jié)約成本，減少工序；加入適量無水硫酸銅，可以吸水，加快分層，并有利于除去有機相中的部分雜質(zhì)。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
此外，應(yīng)當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。