一種快速檢測(cè)甜茶苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種快速檢測(cè)甜茶苷的方法，屬于分析化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明反相高效液相色譜方法，在色譜柱：C18(5μm，150×4.6mm i.d)，流動(dòng)相組成的體積比：甲醇：水＝50～80:10～30，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，進(jìn)樣量：3～5μL的檢測(cè)條件下分別建立甜茶苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定純化的甜茶苷粉末。該方法能夠準(zhǔn)確快速地測(cè)定出樣品中甜茶苷的含量，且本方法成本低，為大批量樣品的快速檢測(cè)甜茶苷提供簡(jiǎn)便可靠的分析方法。
【專利說(shuō)明】一種快速檢測(cè)甜茶苷的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)是一種快速檢測(cè)甜茶苷的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 甜茶，是薔薇科懸鉤子屬、多年生有刺灌木，主要分布于廣西。甜茶主要成分有甜 茶苷、茶多酚、總黃酮、碳水化合物、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和礦物質(zhì)等。其中，含甜茶苷 4-6%，茶多酚8. 9%左右，黃酮大約3. 2%。甜茶苷，ent-貝殼松烯糖苷，與甜葉菊糖苷結(jié)構(gòu) 相似，只是在C13位上少一個(gè)葡萄糖分子。甜茶苷是一種無(wú)毒、高甜度、低熱值的甜味物質(zhì)， 具有降血壓、降血糖、促進(jìn)新陳代謝、治療胃酸過(guò)多等功效，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥工業(yè)， 現(xiàn)已出口日本、東南亞等地。
[0003] 甜茶苷是由斯替維醇和葡萄糖結(jié)合而成的二萜苷，可以通過(guò)測(cè)定斯替維醇的含量 來(lái)定量甜茶苷。目前，用于斯替維醇含量的檢測(cè)方法主要有：分光光度法、氣相色譜法、薄 層-氣譜聯(lián)用法、超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和高效液相色譜法。其中，分光光度法耗時(shí) 長(zhǎng)達(dá)6h，操作復(fù)雜；氣相色譜法雖然技術(shù)成熟，但是常與其他的色譜技術(shù)聯(lián)用檢測(cè)，而且氣 相色譜不適用于不揮發(fā)性和熱敏性的物質(zhì)；對(duì)于難分離的樣品，氣相色譜受到限制；和氣 相色譜相比液相色譜對(duì)樣品易回收且是定量的。所以，相對(duì)于其它幾種方法，高效液相色譜 法更適合于甜茶苷的檢測(cè)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中用于檢測(cè)甜茶苷的高效液相色譜法大多采用乙腈以及乙腈混合體系 作為流動(dòng)相，成本較高；也有采用甲醇作為流動(dòng)相報(bào)道，但是流動(dòng)相中甲醇比例較高，因而 檢測(cè)成本較高，且已有報(bào)道方法中甜茶苷出峰時(shí)間長(zhǎng)達(dá)16. 60min和28. 80min，嚴(yán)重影響檢 測(cè)甜茶苷的效率。如《甜茶葉中甜茶苷的測(cè)定》中雖然是采用高效液相色譜法對(duì)甜茶苷進(jìn) 行檢測(cè)，但是此文中流動(dòng)相組分體積比為甲醇：三氟乙酸=75:25,且保留時(shí)間為7.Omin左 右，此方法成本高，耗時(shí)長(zhǎng)，效率低；又如《甜茶葉中甜茶苷的UPLC-MS/MS分析》中采用超高 效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定廣西特產(chǎn)甜茶葉中的主要甜味成分甜茶苷的含量，流動(dòng)相為 乙腈和蒸餾水混合液，乙腈相體積由20%變化到65%，因而，此方法檢測(cè)成本較高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種采用高效液相色譜法快速檢測(cè)甜茶中甜茶苷的方法，以 克服現(xiàn)有技術(shù)中甜茶苷檢測(cè)成本高、效率低的問(wèn)題。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0006] -種快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0007] (1)分別配制甜茶苷的標(biāo)樣及樣品溶液；
[0008] (2)將甜茶苷標(biāo)樣在紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)190?400nm進(jìn)行掃描，得到最佳吸收波長(zhǎng)；
[0009] (3)采用反相高效液相色譜方法，高效液相色譜條件為：
[0010] 色譜柱：C18 (5um，150X4. 6mmi.d),
[0011] 流動(dòng)相組成的體積比：甲醇：水=50?80:10?30，
[0012] 流速：1.OmL/min，
[0013]柱溫：30°C，
[0014]進(jìn)樣量：3 ?5iiL;
[0015] (4)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出甜茶苷樣品溶液中甜茶苷的含量。
[0016] 作為優(yōu)選，所述流動(dòng)相組成的體積比：甲醇：水=75:25。
[0017] 作為優(yōu)選，所述配制甜茶苷標(biāo)樣溶液的方法為：準(zhǔn)確稱取25mg甜茶苷標(biāo)樣用甲 醇：水=75:25體積比的流動(dòng)相溶解，定容至2511^，分別取母液0,0.2,0.4,0.6,0.8，1，1.2， 1. 4,1. 6,1. 8, 2mL用流動(dòng)相定容至10mL，得到不同濃度的甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品。
[0018] 作為優(yōu)選，所述配制甜茶苷樣品溶液的方法為：稱取l〇mg純化的甜茶苷粉末用流 動(dòng)相溶解定容至10mL，然后過(guò)膜、進(jìn)樣。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：
[0020] 1、本發(fā)明用到的是較低比例的甲醇和水為流動(dòng)相，避免了乙腈流動(dòng)相的高成本。
[0021] 2、本發(fā)明目標(biāo)峰出峰時(shí)間耗時(shí)短，可以用于大批量甜茶苷樣品的檢測(cè)，大大提高 了檢測(cè)效率。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1為甜茶苷在波長(zhǎng)190?400nm的掃描圖譜；
[0023] 圖2為甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)樣品在流動(dòng)相（甲醇：水=75:25)的色譜圖；
[0024] 圖3為甜茶苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 1、下列實(shí)施例所用材料和儀器：
[0026]純化的甜茶苷粉末（自制），甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品（市售）；
[0027]waters高效液相色譜儀，超聲波，分析天平，容量瓶，注射器，濾膜。
[0028] 2、標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液的配制：
[0029] (1)準(zhǔn)確稱取25mg甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相定容至25mL，備用；
[0030] (2)準(zhǔn)確稱取10mg純化的甜茶苷粉末加流動(dòng)相超聲溶解，定容至10mL，過(guò)膜備用。
[0031] 實(shí)施例1 :最伴波長(zhǎng)的詵擇
[0032] 選取甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，隨行試劑重蒸水為空白，在190?400nm掃描，所得波長(zhǎng)掃 描圖譜如圖1所示，甜茶苷在波長(zhǎng)210nm有最大吸收峰，因此，選擇210nm為最佳吸收波長(zhǎng)。
[0033] 實(shí)施例2:標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0034] 分別取配制好的lmg/L的甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1、1. 2、1. 4、 1. 6、1. 8、2mL至10mL容量瓶，用流動(dòng)相定容至刻度線，得到不同濃度的甜茶苷標(biāo)樣溶液，過(guò) 膜進(jìn)樣。在甲醇：水=75:25,波長(zhǎng)210nm，柱溫30°C，流速lmL/min的條件下進(jìn)樣lOiiL。 以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作出甜茶苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳見(jiàn)圖3。
[0035]實(shí)施例3:本方法的準(zhǔn)確度及儀器的精密度測(cè)定
[0036] 在已知含量的一系列樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)品，分別計(jì)算添加回收率。從表1中可以看 出，本方法添加回收率在99. 41?100. 03%之間，平均回收率為99. 90%，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確 度好。
[0037] 表1加樣回收率試驗(yàn)（n=6)
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 一種快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 配制甜茶苷的標(biāo)樣溶液及樣品溶液； (2) 將甜茶苷標(biāo)樣在紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)190?400nm進(jìn)行掃描，得到最佳吸收波長(zhǎng)； (3) 采用反相高效液相色譜方法，高效液相色譜條件為： 色譜柱：C18 (5 u m，150 X 4. 6mm i. d)， 流動(dòng)相組成的體積比：甲醇：水=50?80:10?30, 流速：1. OmL/min, 柱溫：30°C， 進(jìn)樣量：3?5iiL; (4) 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出甜茶苷樣品溶液中甜茶苷的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相組成的體 積比為：甲醇：水=75:25。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，所述配制甜茶苷標(biāo)樣 溶液的方法為：準(zhǔn)確稱取25mg甜茶苷標(biāo)樣用甲醇：水=75:25體積比的流動(dòng)相溶解，定容 至 25mL，然后再分別移取 0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2、1. 4、1. 6、1. 8、2mL 的母液至 10mL 的 容量瓶，用流動(dòng)相定容，得到不同濃度的甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，所述配制甜茶苷樣品 溶液的方法為：稱取l〇mg純化的甜茶苷粉末用流動(dòng)相溶解定容至10mL，然后過(guò)膜進(jìn)樣。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)甜茶苷的方法，其特征在于，所述最佳吸收波長(zhǎng)為 210nm。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104458943SQ201410705364
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】楊洋, 葉琴, 趙芬芬, 馬萬(wàn)良, 胡振興 申請(qǐng)人:廣西大學(xué)