一種氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用，尤其是一種以氧化石墨烯的混合材料作為基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用，屬于化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明利用一種氧化石墨烯和弗羅里硅土的混合材料作為基質(zhì)固相分散劑，以HPLC-MS/MS法的正離子模式MRM的檢測方式測定小麥粉樣品中的18種真菌毒素，其優(yōu)點(diǎn)是提高真菌毒素檢測方法的回收率和增強(qiáng)了方法的通用性，使不具正負(fù)離子切換模式的質(zhì)譜也可實(shí)現(xiàn)檢測要求，并且靈敏度和檢出限能滿足各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
【專利說明】一種氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用，尤其是一種以氧化石墨烯的混合材料 作為基質(zhì)固相分散劑及其應(yīng)用，屬于化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 真菌毒素（mycotoxin)是真菌在生長繁殖過程中產(chǎn)生的次生有毒代謝產(chǎn)物。目前 常見的真菌毒素有：黃曲霉毒素類（AFs)、赭曲霉毒素類（OTs)、伏馬毒素類（FBs)和脫氧雪 腐鐮刀菌烯醇（DON)等毒素。真菌毒素廣泛污染農(nóng)作物、食品及飼料等植物源性食品，研究 證實(shí)，部分真菌毒素可引起人類和動物急性或慢性中毒，損害機(jī)體的肝臟、腎臟、神經(jīng)組織、 造血組織及皮膚組織等，因而國內(nèi)外對真菌毒素有嚴(yán)格的限量規(guī)定。
[0003] 由于食品中真菌毒素含量較低，樣品基質(zhì)復(fù)雜，因而目標(biāo)分析物的分離富集方法 成為制約檢測時間和回收率的瓶頸技術(shù)。目前，常見的樣品前處理技術(shù)有免疫親和柱、固 相萃取（SPE)、QuEChERS、液液萃取和基質(zhì)固相分散法（MSPD)等。其中，免疫親和柱采用特 異性免疫反應(yīng)作為分離手段，但由于各種毒素的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差異很大，免疫親和柱只 能針對某種或某類結(jié)構(gòu)的毒素，而不適用于多種真菌毒素的分離富集。QuEChERS有操作簡 單、快速和經(jīng)濟(jì)的優(yōu)勢，但對于基質(zhì)中含有較多淀粉、蛋白和脂肪的樣品的凈化效果不是非 常理想。液液萃取是利用化合物在兩種互不相溶（或微溶）的溶劑中溶解度或的不同，使 化合物從一種溶劑轉(zhuǎn)到另一種溶劑。例如 申請人:檢索到的一篇公開的中國發(fā)明專利申請就 采用了液液萃取，申請?zhí)枮?01410005346. 0,名稱為"一種同時檢測多種真菌毒素的方法"， 公開了利用高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿法達(dá)到同時檢測33種真菌毒素的方法。該專 利先用水萃取，再用相同體積的酸性乙腈萃取，以無水氯化鈉和硫酸鎂進(jìn)行鹽析，取上層的 乙腈層。由于伏馬毒素 Bl、B2等毒素在水和乙腈中的溶解度都比較大，僅收集乙腈層會造 成這些毒素的大量損失。研究表明，提取大多數(shù)真菌毒素時，采用體積比為80?90%的乙 腈和20?10%的水，提取效率均達(dá)到較高水平，1 :1的乙腈水對大多數(shù)真菌毒素并不適合。 因而，采用該液液提取方法，沒有進(jìn)行凈化，直接進(jìn)樣，樣品基質(zhì)效應(yīng)明顯，容易造成回收率 低，出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。
[0004] 由此可見，目前真菌毒素的提取方法雖然較多，存在提取方法通用性不強(qiáng)，樣品 的基質(zhì)效應(yīng)影響較大，結(jié)果回收率較低，存在假陰性問題，采用了納米材料作吸附劑的Msro 技術(shù)有助于顯著改善樣品的萃取效率，非常適合固體小麥粉中真菌毒素的快檢和確證工 作。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有真菌毒素提取技術(shù)存在的缺陷，提出一種以氧化石墨烯 和弗羅里硅土作為基質(zhì)固相分散劑，快速準(zhǔn)確檢測小麥粉中真菌毒素的方法。
[0006] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決技術(shù)問題：一種氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分 散劑，由氧化石墨烯和弗羅里硅土組成，所述弗羅里硅土的質(zhì)量為氧化石墨烯的8-40倍。
[0007] 氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑的應(yīng)用，包括以下步驟：
[0008] 步驟一、制備樣品，將氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑和小麥粉按比例用 漩渦混勻器混合3-5min，其中小麥粉的質(zhì)量為氧化石墨烯的2-10倍；混合物轉(zhuǎn)移于研缽 中，研磨5-10min ;
[0009] 步驟二、小麥粉樣品的提取凈化，混合物用甲醇溶液淋洗樣品，再用含1% -3%濃 鹽酸的甲醇溶液洗脫目標(biāo)分析物，收集洗脫液，30°C -50°C下氮?dú)獯到?，加入乙腈，過濾 后待測；
[0010] 步驟三、以高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿法的正離子模式測定小麥粉樣品中的 18種真菌毒素。
[0011] 18種真菌毒素分別為青霉酸、黃曲霉毒素 B1、黃曲霉毒素 B2、黃曲霉毒素 G1、黃曲 霉毒素 G2、雜色曲霉毒素、伏馬毒素 B1、伏馬毒素 B2、二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇、桔青霉毒素、 赭曲霉毒素、煙曲霉素、玉米赤霉烯酮、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、15-乙酰脫氧雪腐鐮 刀菌烯醇、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇和展青霉毒素。
[0012] 色譜條件：色譜柱：美國 Thermo 公司 Hypersil ODS C18 柱（150mmX 2. 1mm， 3. 5 μ m);柱溫25°C;進(jìn)樣量1 μ L ;流速0. 3mL/min ;流動相：采用梯度洗脫程序：A :10mmol/ L醋酸銨+0. 1%甲酸水溶液，B甲醇作流動相進(jìn)行梯度洗脫：0-3min，90% B ;3-6min， 60-55% B ；6-12min,55-5% B ；12-14min,5% B ；14-15min,90% B〇
[0013] 質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源；電離方式：ESI+;檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM);毛細(xì)管電壓：3. 5kV;霧化氣壓力：40psi ;干燥氣流速：10L/min ;干燥氣溫度： 350°C。MRM參數(shù)見表1。
[0014] 表1 18種真菌毒素的串聯(lián)質(zhì)譜檢測參數(shù)
[0015]

【權(quán)利要求】
1. 一種氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑，由氧化石墨烯和弗羅里硅土組成，所 述弗羅里硅土的質(zhì)量為氧化石墨烯的8-40倍。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑的應(yīng)用，包括以下步 驟： 步驟一、制備樣品，將氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑和小麥粉按比例用漩渦 混勻器混合3-5min，其中小麥粉的質(zhì)量為氧化石墨烯的2-10倍；混合物轉(zhuǎn)移于研缽中，研 磨 5-lOmin ; 步驟二、小麥粉樣品的提取凈化，混合物用甲醇溶液淋洗樣品，再用含1% -3%濃鹽酸 的甲醇溶液洗脫目標(biāo)分析物，收集洗脫液，30°C -50°C下氮?dú)獯到?，加入乙腈，過濾后待 測； 步驟三、用高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿法，以正離子模式的MRM方法測定小麥 粉樣品中的真菌毒素，色譜條件如下，色譜柱是美國Thermo公司Hypersil ODS C18柱 150mmX2. 1mm，3. 5 μ m ;柱溫25 °C ;進(jìn)樣量1 μ L ;流速0· 3mL/min ;梯度洗脫程序是A : 10mm〇l/L醋酸銨+0. 1%甲酸水溶液，B :甲醇作流動相進(jìn)行梯度洗脫，0-3min，90% B ; 3-6min，60-55% B ;6-12min，55-5% B ;12-14min，5% B ;14-15min，90% B ;質(zhì)譜條件如下， 離子源是電噴霧離子源；電離方式是ESI+;檢測方式是多反應(yīng)監(jiān)測（MRM);毛細(xì)管電壓是 3. 5kV ;霧化氣壓力是40psi ;干燥氣流速是10L/min ;干燥氣溫度是350°C ; 步驟四、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中各種真菌毒素的含量，計算公式為，
式中，Xi-樣品中各真菌毒素的含量，單位μ g/kg; (^一從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到被測組分溶液濃度，單位納克每毫升ng/mL ; V一樣品定容體積，單位毫升mL ; m一樣品的質(zhì)量，單位克g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑的應(yīng)用，其特征在于： 所述步驟一中，稱取0. 5g小麥粉、0. lg氧化石墨烯和2g弗羅里娃土于150mL三角瓶中，混 合物用漩渦混勻器混合3-5min，混勻后轉(zhuǎn)移于研缽中，研磨5min，在5ml玻璃注射器的底層 放置一塊篩板，將研磨后的混合物轉(zhuǎn)移到注射器中，樣品上方再放置一篩板，壓實(shí)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質(zhì)固相分散劑的應(yīng)用，其特征在于： 所述步驟二中，甲醇溶液用量為5ml，淋洗的流速為lml/min，棄去淋洗液，再用含2%鹽酸 的甲醇溶液洗脫目標(biāo)分析物，收集洗脫液；乙腈的加入量為200 μ L，過濾用0. 22 μ m的四氟 乙烯濾膜。
【文檔編號】G01N30/06GK104090057SQ201410329163
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】王峰, 張征, 張紅娟, 倉義鵬 申請人:江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院